動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)hxyppt課件(存儲(chǔ)版)
【正文】 缺點(diǎn)：開(kāi)放式操作，容易造成污染?？纱龠M(jìn)與支持其他種細(xì)胞的生長(zhǎng)。采用的材料對(duì)細(xì)胞無(wú)毒，透明 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)瓶 滾動(dòng)培養(yǎng)瓶 貼壁細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ?蓋玻片 +培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法 ：先以蓋玻片為生長(zhǎng)表面，將擬培養(yǎng)細(xì)胞或組織接種于蓋玻片上，然后放進(jìn)培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。 ? 2. 半懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代 ? 消化法或直接吹打法 ? 3. 懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代 ? 離心法：培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到離心管， 1000r/min離心 。 ? 貼壁培養(yǎng)： 大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞需貼附于帶適量正電荷的固體或半固體表面進(jìn)行培養(yǎng)。可用不含鈣、鎂離子的 BSS配制成 %溶液。使用濃度一般為%%，用不含鈣、鎂離子的 BSS配制，PH89。加肝素 抗凝劑防止凝血。 ③ 對(duì)培養(yǎng)環(huán)境極其敏感，包括 pH、溶解氧、溫度、剪切力等都需嚴(yán)格監(jiān)控。低于 生長(zhǎng)受到影響， 甚至死亡。 ② 結(jié)合蛋白 和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 ：主要是轉(zhuǎn)鐵蛋白（增強(qiáng)細(xì)胞攝取培養(yǎng)基中鐵的能力，可螯合痕量有害金屬離子）和白蛋白（參與運(yùn)載一些脂類(lèi)、金屬離子等，也有螯合過(guò)量微量元素的作用）兩種蛋白。另外高質(zhì)量的動(dòng)物血清來(lái)源有限，成本高，限制了它的大量使用。 40 ? 合成培養(yǎng)基的組成： ? （ 1）氨基酸：氨基酸是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本成分， 12種必須氨基酸必須由培養(yǎng)液提供。用 Hanks液配制成 %溶液，與合成培養(yǎng)基按比例混合使用。 營(yíng)養(yǎng)豐富，其中溶有多種物質(zhì)，如無(wú)機(jī)鹽離子、蛋白質(zhì)及氨基酸、糖類(lèi)（如葡萄糖等）、脂類(lèi)、激素、固醇、抗體、維生素等。 細(xì)胞培養(yǎng)液 ? 細(xì)胞培養(yǎng)常用液體 ? 三蒸水、純水 ? （ BSS） – 由生理鹽水發(fā)展而來(lái)，由無(wú)機(jī)鹽和葡萄糖配制而成。這已成為培養(yǎng)工作中的一種習(xí)慣說(shuō)法，它 與細(xì)胞倍增一代非同一含義 。 3．衰退期： 此期細(xì)胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；細(xì)胞形態(tài)輪廓增強(qiáng)，最后衰退凋亡。 （二）細(xì)胞系的生長(zhǎng)過(guò)程 培養(yǎng)細(xì)胞的生命期： 是指細(xì)胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長(zhǎng)的時(shí)間。 培養(yǎng)時(shí)： 這些細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后 ,同樣需要貼附于某一固相表面才能生存和生長(zhǎng)，因而 屬于貼附型細(xì)胞 貼附 (錨定或錨著 )依賴(lài)型 (性 )細(xì)胞 細(xì)胞在體內(nèi)、外的貼附方式存在差異 體內(nèi)： 貼附是全方位 ,外形具有復(fù)雜的立體特征 體外： 多數(shù)情況，細(xì)胞只有一個(gè)附著平面，外 形一般與體內(nèi)時(shí)明顯不同 貼附的固相表面： 玻璃、聚苯乙烯塑料 按照培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)，可分為 四大類(lèi)型 成纖維細(xì)胞型： 名稱(chēng)： 成纖維細(xì)胞 來(lái)源： 由中胚層間充質(zhì)組織起源的組織 真正的成纖維細(xì)胞：心肌 ， 平滑肌 ， 成骨細(xì)胞 ， 血管內(nèi)皮 形態(tài)： 似體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài) ， 胞體梭形或不規(guī)則 三角形 ， 胞質(zhì)向外伸出 2— 3個(gè)長(zhǎng)短不等的突起 ， 中有卵圓形核 生長(zhǎng)特點(diǎn)： 排列成放射狀，漩渦狀，并不緊靠連成片， 細(xì)胞 細(xì)胞接觸易斷開(kāi)而單獨(dú)行動(dòng)，游離的單獨(dú)的成纖維樣細(xì)胞，常有幾個(gè)伸長(zhǎng)的細(xì)胞突起 上皮細(xì)胞型 名稱(chēng)： 僅形態(tài)上似體內(nèi)，實(shí)際上不完全相同 來(lái)源： 來(lái)源于外胚層、內(nèi)胚層細(xì)胞 , 如：皮膚及其衍生物 ,消化道，乳腺，肺泡 , 上皮性腫瘤 形態(tài)： 類(lèi)似體內(nèi)的上皮細(xì)胞，扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核 生長(zhǎng)特點(diǎn)： 易相連成片 ， 相靠 — 緊密相連成薄層 — 鋪石狀生長(zhǎng)時(shí)呈膜狀移動(dòng) ， 很少脫離細(xì)胞群而單個(gè)活動(dòng) 游走細(xì)胞型： 呈散在生長(zhǎng)，一般不連成片，胞質(zhì)常突起，呈活躍游走或變形運(yùn)動(dòng)，方向不規(guī)則。 ? 半貼壁型 細(xì)胞 3 （一）貼附型細(xì)胞： 大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長(zhǎng)，屬于貼壁依賴(lài)性細(xì)胞 貼附 :是大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞在體內(nèi)生存和生長(zhǎng)發(fā)育的基本存在方式 結(jié)果 : 基于貼附特性，使細(xì)胞與細(xì)胞之間相互結(jié)合形成組織，有機(jī)體的絕大多數(shù)細(xì)胞必須 貼附 于一 固相表面 才能 生存 和 生長(zhǎng) 。 ? 接觸抑制可作為區(qū)分正常細(xì)胞與癌細(xì)胞的標(biāo)志之一 16 ? ? 細(xì)胞增殖，密度加大，培養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng)成分消耗，細(xì)胞代謝物增多，導(dǎo)致發(fā)生密度抑制，細(xì)胞分裂停止 培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖過(guò)程 （一）單個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程 （二）細(xì)胞系的生長(zhǎng)過(guò)程 （三）每代細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程 （一）單個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程 ? 細(xì)胞周期 ：一個(gè)母細(xì)胞分裂結(jié)束后形成的細(xì)胞到下一次再分裂結(jié)束形成兩個(gè)子細(xì)胞的時(shí)期。一般情況下當(dāng)傳代 10～ 50次左右，細(xì)胞增殖逐漸緩慢，以至完全停止，細(xì)胞進(jìn)入第三期。 （三）每代細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程 所謂細(xì)胞的 “一代” 是指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時(shí)間。形態(tài)與功能逐漸單一化，細(xì)胞衰老或死亡，或發(fā)生轉(zhuǎn)化，獲得不死性或惡性性。 ?（ 1）血清 ： 血漿去除纖維蛋白所得 。 ? （ 3）水解乳白蛋白 ： 是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解后的產(chǎn)物，含豐富氨基酸。 ? 基本培養(yǎng)基， 如 109培養(yǎng)液、 DMEM、 TC19 RPMI
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