bd流式基礎(chǔ)知識(shí)-qj(存儲(chǔ)版)
【正文】 物質(zhì)濃度 。 計(jì)算一個(gè)電壓脈沖峰 Time Volts Pulse Area Pulse Height Pulse Width 0 — 面積是對(duì)熒光光通量進(jìn)行積分測(cè)量的結(jié)果 — 寬度 =面積 /高度，與顆粒通過(guò)激光照射區(qū)的時(shí)間成正比 — 特定參數(shù)可選擇面積、寬度信號(hào)（ DNA含量分析） 模擬信號(hào)轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號(hào) 流式細(xì)胞儀的構(gòu)造 3. 光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，數(shù)字化處理 4. 數(shù)字信號(hào)傳入計(jì)算機(jī) 1. 細(xì)胞樣本成單列依次通過(guò)光檢測(cè)區(qū) 2. 激發(fā)并收集各種光信號(hào) 液流系統(tǒng) 光學(xué)系統(tǒng) 電子系統(tǒng) 計(jì)算機(jī)系統(tǒng) 數(shù)據(jù)的獲取表現(xiàn) 專(zhuān)業(yè)軟件中的數(shù)據(jù)表現(xiàn) 單參數(shù)直方圖 雙參數(shù)散點(diǎn)圖 三維點(diǎn)圖 等高圖 密度圖 設(shè)門(mén)（ Gating） 平均熒光強(qiáng)度 百分比 流式細(xì)胞儀的構(gòu)造 1. 細(xì)胞樣本成單列依次通過(guò)光檢測(cè)區(qū) 2. 激發(fā)并收集各種光信號(hào) 3. 光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，數(shù)字化處理 4. 數(shù)字信號(hào)傳入計(jì)算機(jī) 液流系統(tǒng) 光學(xué)系統(tǒng) 電子系統(tǒng) 計(jì)算機(jī)系統(tǒng) 分選系統(tǒng) 5. 活細(xì)胞分選 分選系統(tǒng) 檢測(cè) 加電 偏轉(zhuǎn) 收集 Review Sorting Review Questions 在儀器設(shè)置中調(diào)高 Red參數(shù)的電壓，左圖中群體會(huì)發(fā)生什么變化？ 如何進(jìn)行流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)？ 1. 樣本處理 2. 熒光染料的選擇 3. 染色 4. 數(shù)據(jù)收集和分析 1. 樣本處理 單細(xì)胞懸液 — 細(xì)胞懸液 ： – 直接使用外周血、骨髓：最接近生理狀況，操作簡(jiǎn)便，樣本用血量小 – 灌洗液、體腔積液 – 培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞系 — 實(shí)體組織 ： – 病理組織：新鮮樣本 /石蠟包埋樣本 – 針吸組織：新鮮樣本 2. 選擇合適的熒光染料 ★ 必須能夠被流式細(xì)胞儀上所配備的激光器所激發(fā) ★ 激發(fā)光譜必須在探測(cè)器能夠接收的合適范圍內(nèi) ★ 根據(jù)抗原表達(dá)強(qiáng)弱選擇熒光抗體 ★ 熒光素光譜的重疊應(yīng)當(dāng)盡量減少 熒光信號(hào) （ Fluoresent light ） Fluorescein (FITC) 400 nm 500 nm 600 nm 700 nm Relative IntensityWavelength Excitation Emisson 300 nm 400 nm 500 nm 600 nm 700 nm Excitation Emisson 300 nm 400 nm 500 nm 600 nm 700 nm Phycoerytherin (PE) Allophycocyanin (APC)
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