bd流式基礎(chǔ)知識-qj-wenkub
2023-05-11 08:52:22 本頁面
【正文】 nm 紅激光 Excitation Emisson 300 nm 400 nm 500 nm 600 nm 700 nm 2. 選擇合適的熒光染料 ★ 必須能夠被流式細(xì)胞儀上所配備的激光器所激發(fā) ★ 激發(fā)光譜必須在探測器能夠接收的合適范圍內(nèi) ★ 根據(jù)抗原表達(dá)強(qiáng)弱選擇熒光抗體 ★ 熒光素光譜的重疊應(yīng)當(dāng)盡量減少 FACSCalibur光路圖 每個探測器前往往為 BP，所以每個探測器只能接收特定波長范圍的光信號 FL1: 515nm 545nm 2. 選擇合適的熒光染料 ★ 必須能夠被流式細(xì)胞儀上所配備的激光器所激發(fā) ★ 激發(fā)光譜必須在探測器能夠接收的合適范圍內(nèi) ★ 根據(jù)抗原表達(dá)強(qiáng)弱選擇熒光抗體 ★ 熒光素光譜的重疊應(yīng)當(dāng)盡量減少 2. 選擇合適的熒光染料 ★ 必須能夠被流式細(xì)胞儀上所配備的激光器所激發(fā) ★ 激發(fā)光譜必須在探測器能夠接收的合適范圍內(nèi) ★ 根據(jù)抗原表達(dá)強(qiáng)弱選擇熒光抗體 ★ 熒光素光譜的重疊應(yīng)當(dāng)盡量減少 熒光光譜重疊與補(bǔ)償 530/30 585/42 利用電子術(shù)或計(jì)算機(jī)軟件等方法將串入相鄰熒光通道的信號加以扣除的技術(shù)稱 “ 熒光補(bǔ)償 ” 熒光補(bǔ)償 補(bǔ)償前 補(bǔ)償后 2. 選擇合適的熒光染料 ★ 必須能夠被流式細(xì)胞儀上所配備的激光器所激發(fā) ★ 激發(fā)光譜必須在探測器能夠接收的合適范圍內(nèi) ★ 根據(jù)抗原表達(dá)強(qiáng)弱選擇熒光抗體 ★ 熒光素光譜的重疊應(yīng)當(dāng)盡量減少 — 體積 — 溫度 — 孵育時間 — 對照 4. 數(shù)據(jù)收集和分析 1) 畫圖（直方圖，散點(diǎn)圖） 2) 調(diào)整儀器設(shè)置到合適的狀態(tài) 3) 尋找目標(biāo)細(xì)胞 4) 我們可以得到怎樣的結(jié)果？ 它們意味著什么？ 儀器設(shè)置調(diào)節(jié) 1. 用陰性細(xì)胞調(diào)整儀器 PMT電壓 2. 用單染色的細(xì)胞調(diào)節(jié)儀器補(bǔ)償 二原則： 同型對照 （ Isotype control） — 例：一個雙色染色的實(shí)驗(yàn) 抗體 A FITC，抗體 B PE 對應(yīng)的同型對照是 IgG1 FITC,IgG1 PE 那么需要準(zhǔn)備的是 陰性對照：細(xì)胞加上 IgG1 FITC,IgG1 PE 單陽性對照： FITC: 細(xì)胞加上 Ab A FITC PE: 細(xì)胞加上 Ab B PE 同型抗體為沒有特異性，與熒光抗體蛋白亞型一致的免疫球蛋白，通常是未進(jìn)行免疫小鼠血清的純化 IgG1或 IgG2. 同型對照就是使用同型抗體進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)，反映待測樣本對抗體非特異性結(jié)合水平。此時，激光強(qiáng)度和信號強(qiáng)度都很低。 SSC） 散射光能被用來區(qū)分不同細(xì)胞群體的基本形態(tài)上的差異
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