從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌實驗方案說明(存儲版)
【正文】 制培養(yǎng)基，防止雜菌污染。在Young等方法的基礎(chǔ)上作了改進：取5ml %的可溶性淀粉溶液，在40℃水浴中預(yù)熱10min，反應(yīng)5min后，用5ml 。 乙酰甲基甲醇試驗(V．P試驗) 標記試管 ：取裝有葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管，編號。注意接種的整個過程中，不能人為的制造氣泡，若發(fā)酵管內(nèi)有氣泡，則輕輕甩動發(fā)酵管直至氣泡消失。陰性反應(yīng)則無透明環(huán)或肉湯呈深藍色。 在上述各平板中分別劃線接種不同的菌種，每個菌種重復(fù)接種六個平板。貼標簽 取各種無菌斜面試管數(shù)支，將注有菌株名稱和接種日期的標簽貼上，貼在試管斜面的正上方，距試管口2～3cm處。 鏡檢：油鏡觀察染色結(jié)果。實驗室里，四個平板均加入碘液，立即觀察記錄陽性和陰性菌落所在位置，并可同時記錄透明圈的大小。復(fù)篩方法【1】劃線接種（分區(qū)劃線法）：在上述不同稀釋度培養(yǎng)基中挑取不同形態(tài)的單菌落進行分區(qū)劃線，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第1次平行劃線3~4條，再轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約60176。每個環(huán)境的土樣裝1個錐形瓶，共2個，同時將其分為4組，編號AB。 淀粉牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(%)： ～ ～ 發(fā)酵培養(yǎng)基(%)：玉米粉 2 黃豆餅粉 CaCl MgSO4 NaCl K2HPO4 檸檬酸鈉 (溶解后加) 葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基（）（%）： K2HPO4 校正pH ～ 蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗用）（%）：蛋白胨1% % 校正pH ～ 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基（%）： 硫酸鎂(MgSO4因此，純培養(yǎng)的確定除觀察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測個體形態(tài)特征后才能確定，有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過一系列分離與純化過程和多種特征鑒定才能得到。三、實驗原理自然界中，土壤是微生物生活最適宜的環(huán)境。淀粉酶種類繁多,特點各異,可應(yīng)用于造紙、印染、釀造、果汁和食品加工、醫(yī)藥、洗滌劑、工業(yè)副產(chǎn)品及廢料的處理、青貯飼料及微生態(tài)制劑]等多種領(lǐng)域。淀粉酶廣泛存在于動植物和微生物中,是最早用于工業(yè)生產(chǎn)并且迄今仍是用途最廣、產(chǎn)量最大的酶制劑產(chǎn)品之一。二、實驗?zāi)康囊?．了解生物分離提純的原理和方法技術(shù)2．掌握從土壤中篩選產(chǎn)淀粉酶菌株的原理和方法、綜合分析問題解決問題和判斷實驗結(jié)果的能力。值得指出的是，從微生物群體中經(jīng)分離生長在平板上的單個菌落并不一定保證是純培養(yǎng)。加入瓊脂,加熱煮沸，使瓊脂溶化。恒溫搖床 恒溫培養(yǎng)箱 高壓蒸汽滅菌箱 超凈工作臺 水浴箱 紫外燈照射箱 磁力攪拌器 玻璃珠 移液管 涂布器 顯微鏡五、實驗方法及步驟初篩方法①制菌懸液：兩個土樣分別取5g，放入各自裝有45mL無菌水的三角瓶，振蕩10min,即為稀釋101的土壤懸浮液。37℃下恒溫培養(yǎng)24h。上述點接后的平板中取出一組四個分好區(qū)域的淀粉牛肉膏培養(yǎng)基平板于實驗室，其他置于無菌室。復(fù)染：滴加番紅染色液，染3－5分鐘，水洗后用吸水紙吸干。加熱過程中切勿使染料蒸干，必要時可添加少許染料。（注：觀察芽孢的形狀和位置，查伯杰細菌手冊）（ 到2倍） 取30 套牛肉膏蛋白胨平板，分別進行標號。立
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1