【正文】 、菌源量、栽培條件等密切相關(guān)。在培養(yǎng)基上培養(yǎng)了3d之后，接種了枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基上已經(jīng)明顯出現(xiàn)了抑菌帶，在菌絲直徑與時間關(guān)系圖表中也可以明顯地看出沒有接種枯草芽孢桿菌的對照組菌絲生長狀況比實(shí)驗(yàn)組要好一些。 枯草芽孢桿菌拮抗實(shí)驗(yàn)分析在枯草芽孢桿菌抑制玉米小斑病菌生長的試驗(yàn)結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌A16對玉米小斑病菌的生長的確起到了一定的抑制作用。這樣在某種程度上實(shí)現(xiàn)了枯草芽孢桿菌菌劑的使用，也使得其使用效果在其他微生物的協(xié)同作用下得到提高。 生物菌肥的研發(fā)面臨的一個問題是生物菌的生物活性如何在產(chǎn)期保存的情況下保存完好，有些菌肥只能進(jìn)行短期保存，這樣對工業(yè)生產(chǎn)來說會造成較大負(fù)擔(dān)。在生物菌肥的推廣使用過程中，強(qiáng)有力的調(diào)查結(jié)果會提供更好地說服力。經(jīng)過長期的研究開發(fā)，生物菌肥已形成了以下幾種趨勢：(1) 由單一菌種向復(fù)合菌種轉(zhuǎn)化；(2) 由單一功能向多功能轉(zhuǎn)化；(3) 由豆科作物接種劑向非豆科作物肥料轉(zhuǎn)化；(4) 由單一接種劑向復(fù)合生物肥轉(zhuǎn)化；(5)由用無芽胞菌種生產(chǎn)向用有芽胞菌種生產(chǎn)轉(zhuǎn)化[16]。生物菌肥作為一種無毒無害的產(chǎn)品將越來越受到人們的青睞，生物菌肥的推廣勢將成為肥料發(fā)展的必然趨勢。再次，向所有幫助過我的老師、師兄師姐及同學(xué)表示最衷心的感謝和最誠摯的敬意。 在實(shí)習(xí)期間，實(shí)驗(yàn)室的師兄師姐在生活和學(xué)習(xí)上給了我極大的關(guān)心和幫助，在平常的實(shí)驗(yàn)操作中細(xì)心地指導(dǎo)我完成每一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容；在論文課題研究過程中，馬傳營老師，湯艷超師兄為我提供了大力的支持、知道和幫助。 隨著環(huán)境問題在全球范圍內(nèi)越來越受到重視以及農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展策略的應(yīng)用，生物菌肥的開發(fā)、生產(chǎn)及應(yīng)用力度在不斷擴(kuò)大?，F(xiàn)已有70多個國家進(jìn)行生物菌肥的生產(chǎn)機(jī)推廣使用。 從示范和施用效果的角度來看，推廣和應(yīng)用生物菌肥具有一定的可行性。 現(xiàn)在市場上出售的生物菌肥大部分對土壤的溫度、濕度、pH等要求比較嚴(yán)格，使得施用后菌種可能不能發(fā)揮最大的作用。通過這些作用機(jī)理的研究，可以有效指導(dǎo)枯草芽孢桿菌制劑的產(chǎn)品生產(chǎn)工藝和應(yīng)用技術(shù)方法，是其的應(yīng)用和研究水平有更大的發(fā)展和提高。在發(fā)酵前期過程中觀察0006罐一直發(fā)酵正常，但從第三天觀察發(fā)現(xiàn)發(fā)酵罐里含有大量雜質(zhì)而菌體量和芽孢量很少，可能原因就是發(fā)酵過程中被污染，應(yīng)屬于發(fā)酵中期污染，在該種情況下會嚴(yán)重影響產(chǎn)生菌的代謝，雜菌大量產(chǎn)酸致使培養(yǎng)液pH下降，糖、氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時甚至?xí)挂旬a(chǎn)生的產(chǎn)物分解。得6500ml LB培養(yǎng)基,待用（以下實(shí)驗(yàn)部分需用不同容量及數(shù)量的LB培養(yǎng)基，按照比例重新配置即可） 活化菌種①將裝有Bacillus subtilis A16的種子瓶拿入無菌操作室，同時將200ml的LB培養(yǎng)基拿進(jìn)超凈工作臺，紫外滅菌20min.②按1:1000比例，每瓶培養(yǎng)基中加入200μl種子③將接種完的LB培養(yǎng)基放入搖床內(nèi)36℃,200r/min培養(yǎng)過夜④將種子瓶放回冰箱4℃保存 菌種擴(kuò)大培養(yǎng)①將上步得到的200ml接種枯草芽孢桿菌的LB培養(yǎng)基，18500ml LB培養(yǎng)基拿入無菌操作臺，開紫外燈對超凈工作臺滅菌20min左右②把上步試驗(yàn)中接種到200ml培養(yǎng)瓶中的菌種按照3%的接種量接種到500ml的LB培養(yǎng)基中，共有9L18個大瓶③36℃,200r/min搖床培養(yǎng)，預(yù)得上罐前種子 發(fā)酵生產(chǎn)監(jiān)測（對0004,0005,0006罐進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵罐模擬實(shí)驗(yàn)） 取樣從0004,0005,0006三罐中分別取樣 壓片復(fù)染①制作菌種常規(guī)涂片：取潔凈載玻片，滴一滴取樣液于玻片中央，室溫自然干燥，涂面朝上，通過火焰23次進(jìn)行熱固定②于圖片上滴35滴孔雀綠溶液；用試管夾夾住載玻片在火焰上用微火加熱，自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時開始計時約45min；傾去染液，待玻片冷卻后，用自來水沖洗至孔雀綠不再褪色為止；%的堿性復(fù)紅溶液進(jìn)行復(fù)染1min，水洗； 觀察結(jié)果將制作好的壓片置片干燥后用油鏡觀察 Bacillus subtilis A16與Bipolaris maydis的拮抗實(shí)驗(yàn) 各種培養(yǎng)基的配制①酵母浸膏培養(yǎng)液：蔗糖`，酵母浸膏12g，K2HPO4 4g,無菌水1000ml②酵母浸膏培養(yǎng)基：酵母浸膏培養(yǎng)液+瓊脂20g③燕麥培養(yǎng)基：燕麥片30g，瓊脂18g，無菌水1000ml 玉米小斑病菌（Bipolaris maydis）的培養(yǎng)將玉米葉表面分離的玉米小斑病菌移植于燕麥片培養(yǎng)基上，2530℃培養(yǎng)7d左右，待菌落表面達(dá)培養(yǎng)皿面積2/3時，22℃光照培養(yǎng)3d 拮抗細(xì)菌（Bacillus subtilis A16）的培養(yǎng)將A,B,C三罐的枯草芽孢桿菌分別接種于盛有150ml酵母浸膏培養(yǎng)液的三角瓶中，30℃，240r/min震蕩培養(yǎng)48h 拮抗實(shí)驗(yàn)以玉米小斑病菌為靶標(biāo)菌，采用平板對峙法測定枯草芽孢桿菌對玉米小斑病菌的拮抗作用。病菌以菌絲和分生孢子在病株殘體上越冬，第二年產(chǎn)生分生孢子，成為初次侵染源。 產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化 在衡量農(nóng)藥產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)中，只把側(cè)重點(diǎn)放在藥效上而忽略了有害雜質(zhì)的含量，沒有明確要求對對有害雜質(zhì)進(jìn)行限量導(dǎo)致一些農(nóng)藥產(chǎn)品產(chǎn)生副作用。韓國研制的殺菌劑Mildewide, 主要防治霜霉病、白粉病等真菌病害?？莶菅挎邨U菌為細(xì)菌性植物保護(hù)劑，是多種植物病原菌的競爭性抑制劑。不同菌株的作用機(jī)理存在很大的差異。此類微生物具有很高的專一性，其對靶標(biāo)害物具有極高的選擇性，而對其他生物卻十分安全。 提高土壤肥力水平微生物在生命活動中，不斷分解土壤中的有機(jī)質(zhì)，產(chǎn)生多種有機(jī)酸（如腐殖酸），增強(qiáng)土壤的保肥能力?？莶菅挎邨U菌的批量生產(chǎn)工藝簡單，成本較低，施用方便，儲存期長，而且其制劑的穩(wěn)定性，與化學(xué)制劑的相容性和在不同植物、不同年份防治效果的一致性方面均優(yōu)于不產(chǎn)生芽孢的細(xì)菌和真菌生防菌株，是一種較理想的生防微生物。 Antagonism。分析了生物菌肥相對于化肥的優(yōu)勢以及國內(nèi)外對生物菌肥的研究情況，并對其發(fā)展進(jìn)行了展望。生物菌肥是近年來發(fā)展起來的一種新型肥料，它是一種多元素肥料，主要由固氮菌、解鉀菌及多種微量元素和腐殖酸組成。 生物菌肥的分類生物菌肥從作用上可分為：生物固氮菌劑；分解土壤有機(jī)物菌劑（有機(jī)磷細(xì)菌肥、綜合細(xì)菌肥）；分解土壤難溶性礦物質(zhì)的菌劑（硅酸鹽細(xì)菌肥料、無機(jī)磷細(xì)菌肥料）；抗病與刺激作物生長的菌劑（抗生菌肥料）。 提高作物產(chǎn)量調(diào)查結(jié)果顯示：生物菌肥在于化肥結(jié)合使用下，比傳統(tǒng)化肥施用方式增產(chǎn)5%10%，%，增產(chǎn)10%15%%，增產(chǎn)15%20%%，報道增產(chǎn)20%%。 枯草芽孢桿菌在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們對微生物的研究更加深入。其中麥豐寧對小麥紋枯病田間防效達(dá)50％~80％，它主要產(chǎn)生一種抗菌物質(zhì)來一直病原菌菌絲的生長、菌核形成及萌發(fā)。下表1列出了國內(nèi)研發(fā)的主要枯草芽孢桿菌制劑。QS T713為美國 Agra Quest公司開發(fā)出來的活菌制劑, 商品名Serenade , 不僅通過美國環(huán)保局 ( EPA)的登記而且還得到食用作物病害應(yīng)用的審批和認(rèn)可,通過葉面施用能防治蔬菜、櫻桃、 葡萄、葫蘆和胡桃多種作物的白粉病、 爛根病、霜霉病、疫病、灰霉病等細(xì)菌和真菌引起的病害[9]。 生產(chǎn)成本高 在枯草芽孢桿菌發(fā)酵過程中分泌的有效殺菌物質(zhì)較低，而且在生產(chǎn)發(fā)酵過程中容易感染雜菌，種種因素使得發(fā)酵操作要求的成本過高，研究開發(fā)一種新產(chǎn)品所花費(fèi)的時間較長，應(yīng)用于農(nóng)作物后效果不明顯，防治