【正文】 糖變化：脫氧核糖上的每個碳原 子和羥基上的氫都能與OH反應，導致脫氧核糖分解，最后引起DNA鏈斷裂。隨后，MutS錯配DNA復合物募集該修復系統(tǒng)的第二種蛋白因子MutL,MutL再激活內(nèi)切核酸酶MutH在錯配位點附近切斷錯配核苷酸所在的一條DNA鏈，在解旋酶UvrD和外切核酸酶作用下，將包括錯配核苷酸在內(nèi)的一條單鏈DNA去除，所產(chǎn)生的單鏈DNA缺口由DNA聚合酶Ⅲ填補．DNA連接酶封口，完成錯配修復。34. 簡述人類核苷酸切除修復機制。36. 簡述大腸埃希菌重組修復機制。DNA單鏈區(qū)產(chǎn)生于recB、recC、recD酶的作用或DNA缺口。答：在DNA受到嚴重損傷時，SOS應答能夠誘導合成很多參與DNA損傷修復的酶和蛋白質。答：Sanger DNA測序法是建立在兩個基本原理之上：(1)核酸是依賴于模板在聚合酶的作用下由5’端向3’端聚合；(2)可延伸的引物必須能提供游離的3’羥基末端，雙脫氧核苷酸由于缺少游離的3’羥基末端，因此會終止聚合反應的進行a如果分別用4種雙脫氧核苷酸終止反應，則會獲得4組長度不同的DNA片段。42. 切口平移(nick translation)標記探針的主要步驟有哪些?答：(1)DNase I造成切口；(2)DNA聚合酶Ⅲ的5’3’外切核酸酶進行切割；(3)DNA聚合酶Ⅲ的5’3’合成酶進行修補；(4)在修補過程中，隨著切口(nick)的移動，將放射性的底物摻人到雙鏈DNA中。它是將生長在或影印在微孔濾膜上的菌落(或噬菌斑)原位溶菌，原位進行DNA變性并原位固定在濾膜上，然后用放射性標記的探針同固定了的DNA進行雜交經(jīng)放射自顯影后，確定哪一個菌落含有重組的DNA分子，再從參比平板上選取重組體。(3)是否變性電泳不同：Southern印跡雜交是跑非變性瓊脂糖凝膠電泳，電泳之后在凝膠上用NaOH處理使DNA變性，然后轉?。籒orthern印跡雜交實在電泳上樣前用甲基氫氧化銀、乙二醛或甲醛使RNA變性，而不用NaOH，因為它會水解RNA的2’3）非特異性產(chǎn)物或引物二聚體與反應物競爭4）產(chǎn)物的再結合53. 簡述基因克隆的主要過程。答；末端脫氧核苷酸轉移酶能將脫氧核苷酸加到DNA的3，OH~，主要用于探針標記；或者在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于進行克隆57. 將DNA分子進行體外連接的方法：黏性末端連接、平端連接、同聚物加尾連接、人工接頭連接58. 表達融合蛋白有何優(yōu)點 答：表達融合蛋白的優(yōu)點如下：(1)融合蛋白較穩(wěn)定，不易被細菌蛋白酶水解；(2)如果融合蛋白中有信號肽序列，可產(chǎn)生分泌型產(chǎn)物．(3)可利用針對原核部分的單抗進行親和層析，便于純化．59. 堿性磷酸酶在基因克隆中的作用。2)無義突變 是由于堿基取代、缺失或插入后使得編碼某種氨基酸的密碼子變成了終止密碼子，導致蛋白質翻譯過程被提前終止。66. 簡述DNA指紋分析的基本流程。答：將“自殺基因導入宿主細胞中，這種基因編碼的酶能使無毒性的藥物前體轉化為細胞毒性代謝物，誘導靶細胞產(chǎn)生“自殺”效應，從而達到清除腫瘤細胞的目的。證據(jù)表明一個稱為Dicer的酶，是l~aseⅢ家族中特異識別雙鏈RNA的一員，它能以一種ATP依賴的方式逐步切割由外源導入或者由轉基因、病毒感染等各種方式引入的雙鏈RNA，將其切割將DNA降解為19～21bp的雙鏈RNAs(siRNAs)，每個片段的3’端都有2個堿基突出。答：通過基因置換和基因添加，導入多種抑癌基因以抑制癌癥的發(fā)生、發(fā)展和轉移；抑制癌基因的活性，通過于擾癌基因的轉錄和翻譯，發(fā)揮抑癌作用；增強腫瘤細胞的免疫原性，通過對腫瘤組織進行細胞因子修飾，刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生對腫瘤細胞的溶解和排斥反應；通過導入“自殺基因殺傷癌細胞。5）基因免疫治療。基因調控策略大致有以下幾種：基因內(nèi)部調節(jié)機制、基因外部調節(jié)機制、利用病灶微環(huán)境使治療基因特異性表達以及治療基因的誘導表達等。答 RNA干擾包括起始階段和效應階段。突變?nèi)舭l(fā)生在生殖細胞，可引起各種遺傳性疾??；若發(fā)生在他細胞，可導致腫瘤、心血管疾病等69. 熒光原位雜交的特點及應用包括哪些?答：(1)其探針比放射性探針更穩(wěn)定，不需要特殊的安全防護和污物處理措施；．(2)與原位雜交一樣，不需要提取和純化核酸；(3)多色TLSII可以在同一核中顯示不同的顏色，從而同時檢測兩種或多種序列；(4)應用不同的探針可以顯示某一物種的全部基因或某一染色體、染色體片段及單拷貝序列。答：在非變性條件下，DNA分子為維持其穩(wěn)定而自身折疊形成具有一定空間結構的構象，這種構象是由單鏈DNA分子中的堿基順序所決定，DNA分子中的堿基變異(即使只有一個堿基)可導致其空間構型的改變，形成不同的構象，導致電泳遷移率發(fā)生改變。 基因突變的遺傳學效應包括錯義突變、無義突變、同義突變和移碼突變。(4)DNA序列分析。52. 影響PCR擴增平臺期的因素? (1)引物及dNTP底物濃度降低，摻入速度減慢。(2)所用凝膠不同：Southern印跡雜交和Northern印跡雜交用的是瓊脂糖凝膠，而Western免疫印跡用的是SDS39。因為DNA、RNA或蛋白質從凝膠向濾膜轉移的過程稱為印跡，故此將這種雜交稱為印跡雜交。41. PCR的基本原理是什么?用PCR擴增某一基因，必須預先得到什么樣的信息? 答：PCR是根據(jù)DNA半保留復制的原理，在體外進行DNA的變性、復性和引物延伸。這種修復帶給細胞很高的突變率。DNA雙鏈斷裂后，細胞中存在姐妹染色體時，則通過同源重組的方式進行修復，如細胞中不存在姐妹染色體時，則通過非同源末端連接的方式進行修復。E．coli的recA蛋白在DNA重組中起關鍵作用。答：人全基因組與轉錄偶聯(lián)核苷酸切除修復的基本過程相同，即都有發(fā)現(xiàn)錯誤，解鏈并募集內(nèi)切核酸酶，切割損傷部位，解旋去除損傷位點，DNA聚合酶和連接酶填補缺口。兩個UvrA分子和一個UvrB分子組成復合物結合于DNA，并消耗ATP沿著DNA鏈移動，UvrA能夠發(fā)現(xiàn)損傷造成的DNA雙螺旋變形，由UvrB負責解鏈，在損傷部位形成單鏈區(qū)，并使之彎曲約130度，接著UvrB募集內(nèi)切核酸酶UvrC，在損傷部位的兩側切斷DNA鏈，其中一個切點位于損傷部位5’側八個核苷酸處，而另一個切點位于3’側四或五個核苷酸處。目前，已在哺乳動物細胞中發(fā)現(xiàn)了四個較為完善的DNA修復通路，分別是核苷酸切除修復(nucleotide．excision repair，NER)、堿基切除修復(base—excision repair，BER)、 重組修復(rebination repair)和錯配修復(mismatch repair)31. 答：，錯配修復蛋白MutS二聚體沿著DNA運動，能夠發(fā)現(xiàn)DNA骨架因非互補堿基對之間的不對稱而產(chǎn)生的變形，