db21t18612-20xx水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性法(存儲(chǔ)版)
【正文】 。應(yīng)保證DNA濃度在10μg/mL以上，方可正常進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。L）酶切緩沖液10X1XEcoRⅠ10U/181。l 接頭復(fù)性將EcoRⅠ和MseⅠ各自的單鏈接頭等分子數(shù)混合， 94℃變性3min，37℃保溫5min。表3 預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)體系試劑體積(181。l)dNTPs (5mM)10X PCR緩沖液2Taq聚合酶 (5U/181。L。并用 UPGMA做基于Nei’s遺傳距離的樹(shù)形圖，以及用鄰近法（Neighbor joining method，NJ）構(gòu)建聚類圖（系統(tǒng)樹(shù)檢驗(yàn)置信度值為1000次）。TACTCAGGACTCAT5180。GATGAGTCCTGAGTAAXXX3180。GACTGCGTACCAATTCXXX3180。 GACGATGAGTCCTGAG3180。建立各個(gè)群體的01數(shù)據(jù)陣列。（5）產(chǎn)物變性 選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物中添加等體積上樣緩沖液混勻，95℃變性5min，迅速置于冰上。L)EcoRⅠ選擇擴(kuò)增引物 (50ng/181。L)Acetylated BSA超純水總計(jì)預(yù)擴(kuò)增引物序列見(jiàn)附錄B。l——10181。L， 37℃保溫3h， 65℃保溫3h。 紫外吸收定量測(cè)試260nm波長(zhǎng)下測(cè)定產(chǎn)物（或產(chǎn)物稀釋液）的紫外吸收值，根據(jù)公式計(jì)算DNA濃度。 Ⅲ型樣品取鮮樣品50～150mg，剪成小塊放入研缽中，加入液氮，待樣品完全冷凍后，快速、用力研磨至粉末狀；將研缽放入65℃水浴至樣品粉末剛開(kāi)始融化，向研缽中加入DNA提取液(10mmol/L TrisHCl，pH ，75mmol/L NaCl，％SDS，5mmol/L EDTA)及RNA酶、蛋白酶K共400μL，用力碾磨30s。 Ⅱ型樣品從活體中直接采集肌肉或臟器組織， 20℃冰箱直接凍存。 Ⅱ型樣品：肌肉、臟器組織類（仿刺參、海膽、虹鱒、大菱鲆、鰻鱺、中國(guó)對(duì)蝦、日本對(duì)蝦、中華絨鰲蟹、三疣梭子蟹、皺紋盤鮑、海灣扇貝、蝦夷扇貝、櫛孔扇貝、文蛤、牡蠣、海蜇等）。 電泳槽。6 儀器和設(shè)備 凝膠成像分析系統(tǒng)。 37%甲醛溶液。 甲叉雙丙烯酰胺：分析純。 異戊醇：分析純。 遺傳距離（Genetic Distance，D）用基因頻率的函數(shù)表示的群體間遺傳差異，它的最適宜的測(cè)度是單位長(zhǎng)度DNA的核苷酸數(shù)或密碼子的差數(shù)，是用來(lái)表示群體或個(gè)體之間遺傳關(guān)系遠(yuǎn)近的一個(gè)量化指標(biāo)，其值可以從0至無(wú)限大。GB/T 養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)檢驗(yàn) 第15部分：RAPD分析3 術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)歸口單位：遼寧省海洋與漁業(yè)廳。8 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性法????? 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)生物擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（AFLP）的原理、試劑、儀器和設(shè)備、采樣、分析步驟和數(shù)據(jù)運(yùn)算方法。 座位（Locus） 基因在染色體上所處的特定位置。 聚類分析（Cluster Analysis）
化學(xué)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1