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【正文】 不具備分開二者光譜的儀器設(shè)備 ， 應(yīng)盡量避免二者同時出現(xiàn)在同一樣品中 。 （一）制備細胞涂片應(yīng)注意： 23 （二） 固定組織時應(yīng)注意 : ① 應(yīng)力求保持組織新鮮，勿使其干燥，盡快固定處理； ②組織塊不宜過大過厚，必須小于 ，尤其是組織塊厚度必須控制在 ； ③固定液必須有足夠的量，在體積上一般大于組織 20倍以上，否則組織中心固定不良影響效果； ④組織固定后應(yīng)充分水洗。 ? 組織自發(fā)熒光淬滅劑 AutoFluo Quencher 28 十 . 定位與定量測量應(yīng)注意的問題 定位 ： 1AU ； 。 不主張用烘烤箱干燥 。 ⑥ 其他原因：例如 ， 加入試劑種類 、 順序錯誤 、 漏加試劑及不當?shù)牟僮骶蓪?dǎo)致熒光標記失敗 。 ， 例如 。 。 例如 FITC：在 pH68時 ， 很難跨過完整的活細胞膜使之染色 ， 但在 。 ? 對于易于漂白的樣本、樣本的熒光強度很低的樣本、多光子掃描模式，建議少用電子放大。 體會值 ：常用 4， ACCU掃描模式選 8。 =0 Aver=0 =0 Aver=0 =2 Aver=2 =2 Aver=0 12 單向、雙向掃描 功能：如果點擊 Unidirectional、 Bidirectional Scan按鈕，會啟動雙向掃描模式，如果不點擊此按鈕，就默認單項掃描模式 單向掃描 雙向掃描 單位 400 800 線數(shù)每秒 800 1600 線數(shù)每秒 1000 2022 線數(shù)每秒 13 Speed 掃描速度選擇 功能：如果點擊 Speed按鈕，會打開掃描速度調(diào)節(jié)對話框，選擇不同掃描速度 單向掃描 單位 400 線數(shù)每秒（默認值） 800 線數(shù)每秒 1000 線數(shù)每秒 14 Zoom 電子放大 ? 共聚焦顯微鏡術(shù)中圖像的放大倍數(shù)取決于物鏡的放大倍數(shù)和電子放大倍數(shù)。 ：孵育的時間 、 溫度不當 ， 大多數(shù)情況下都是樣品與探針孵育溫度太低或時間太短造成 。 例如 ， 有一些探針只標記活細胞 ， 如果細胞活性不夠則難以標記上熒光 。 而 Fura2采用雙波長檢測 （ 比率法 ） ， Fluo3是單波長檢測 ， Fura2的激發(fā)波長是 34
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