[自然科學(xué)]干擾素的生產(chǎn)與行(存儲版)
【正文】 —— 8 . 1 6 % 1 0 . 6 7 % 1 1 . 3 8 %2022 年 2022 年 2022 年 2022 年前景與展望 隨著人們對干擾素研究的不斷深入 ,尤其是現(xiàn)代分子生物學(xué)飛速發(fā)展 ,人們對干擾素的分子結(jié)構(gòu)、理化特性、生物學(xué)特性、產(chǎn)生和作用機理的不斷闡明 ,使得人們在干擾素領(lǐng)域取得了空前的進步。從我國市場研發(fā)情況來看，目前重組 α干擾素占據(jù)的市場比重較大，約為 %。 (7)檢測項目 ? 干擾素鑒別試驗 ? 干擾素效價測定 ? 蛋白質(zhì)含量，純度測定，分子量 ? 宿主殘余蛋白、殘余 DNA ? 干擾素結(jié)構(gòu)鑒定：紫外光譜，肽譜， N端序列 ? 其他：熱原，內(nèi)毒素，殘留抗生素 4 國內(nèi)基因工程藥物產(chǎn)業(yè)發(fā)展?fàn)顩r 我國的生物技術(shù)藥物卻一直苦于缺乏自主創(chuàng)新的產(chǎn)品，絕大多數(shù)上市藥物為仿制藥，創(chuàng)新藥物的開發(fā)一直未能打開局面。 ? 鹽濃度線性梯度 5～ 50 ms/cm進行洗脫， ? 配合 SDSPAGE收集干擾素峰。 、干擾素純化工藝過程 ? 溶解粗干擾素 ? 沉淀與疏水層析 ? 陰離子交換層析與濃縮 ? 陽離子交換層析與濃縮 ? 凝膠過濾層析 ? 無菌過濾分裝 (1) 溶解粗干擾素 ? 配制純化緩沖液： 超純水， ， μm濾器和 10 ku超濾系統(tǒng)，百級層流下收集。 ? 檢測：干擾素含量、菌體蛋白含量、菌體干燥失重、質(zhì)粒結(jié)構(gòu)一致性、質(zhì)粒穩(wěn)定性。 （ 3）發(fā)酵罐培養(yǎng) ◆ 接種：通入 300L培養(yǎng)基的發(fā)酵罐，接種量 10%。 基因工程大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)工藝 : 干擾素生產(chǎn)工藝路線（ 4） ? 上市產(chǎn)品： rhuIFN β1a ? 1996， Avonex(Biogen)； 2022， Rebif(Serono) ? 表達產(chǎn)物： 166 aa 糖基化蛋白， ku ? 工藝特點：分泌表達，產(chǎn)量低，成本高 ,過程嚴(yán)格 動物無限細(xì)胞系培養(yǎng)生產(chǎn)工藝： 干擾素生產(chǎn)工藝路線（ 5） ?宿主：腐生型假單胞桿菌（ Pseudomonas putida） ?上市產(chǎn)品： IFN α2b/安福隆 ?表達產(chǎn)物：無糖基化可溶性蛋白質(zhì)，具有天然分子 結(jié)構(gòu)和生物活性 ?工藝特點： 發(fā)酵周期短：幾個小時 無需變性、復(fù)性過程，獲得有活性產(chǎn)品 純化過程：淘汰抗體親和層析 基因工程假單胞桿菌發(fā)酵生產(chǎn)工藝 3 基因工程假單胞桿菌發(fā)酵生產(chǎn)工藝 、基因工程假單胞桿菌菌種建立 ? 第一步：干擾素 α2b基因的克隆 ? 第二步：表達載體的構(gòu)建 ? 第三步：工程菌的構(gòu)建 第一步：干擾素基因的克隆 (RTPCR) ? 制備白細(xì)胞，病毒誘導(dǎo)，分離 mRNA,反錄酶合成cDNA,PCR， ? 基因連接質(zhì)粒 , 轉(zhuǎn)化 ,篩選鑒定克隆。在感染的起始階段，體液免疫和細(xì)胞免疫發(fā)生作用之前，干擾素發(fā)揮重要作用。 干擾素首先作用于細(xì)胞的干擾素受體，經(jīng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等一系列生休過程，激活細(xì)胞基因表達多
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