重組人促紅細胞生成素的純化【精品(存儲版)
【正文】 多少也有一定的關(guān)系。 關(guān)于 EPO純化方法的延伸 ? 沉淀方法： 酒精沉淀（濃度達 90%），硫酸銨沉淀（ uEPO），醋酸沉淀（活性喪失） 要求：樣品體積小，蛋白濃度高 ? 親和層析： EPO抗體包括合成多肽抗體 ， uEPO和 rhEPO抗體，將抗體交聯(lián)于 AffiGel或 Sephadx等基質(zhì)制成免疫吸附柱可用于 EPO純化 要求：親和層析的洗脫液往往高鹽并加有疏水劑，須脫鹽，脫疏水劑。同時在洗脫過程中避免強烈的洗脫條件以防肽鏈或二硫鍵斷裂以及蛋白構(gòu)象改變等從而引起蛋白質(zhì)變性。Fh$DfBdYzaWx8Uv6Rt 4Pr2Np0LmJk(Hiamp。Fh$DfBcYzaWx8Tv6Rt4Pr2No0LmJk(Hi%Fg!DeZAc3Pq1Mo+Km)Ik*Gh%Ef !CdYAbWy9Uw7St5Qr3Op1MnKl(Ijamp。Gh$DfBdY zbWx8Uv6St4Qr2Np0LnJl(Hiamp。Gh$DfB dYzaWx8Uv6St4Pr2Np0LnJk(Hiamp。Fh$Df BcYzaWx8Uv6Rt4Pr2No0LmJk(Hi%Fg!DeZBcXyaVw8Tu5Rs3Pq1No+Km)Ik*Gi%Ef!CdZAbXy9Uw7Su5Qr3Op1Mn+K l(Ijamp。Gh$E)Ij*Gh$EfCdYAbWx9Uv7St5Qr2Op0MnJl(Hjamp。Gh$EfCdYzbWx9Uv6St4Qr2Op0LnJl(Hjamp。Fh$DfB cYzaWx8Uv6RaWx8Uv6St4Pr2Np0LnJk(Hiamp。Fh$Df BdYz aWx8Uv6St4Pr2Np0LnJk(Hiamp。Fh$Df BdYz aWx8Uv6St4Pr2Np0LmJk(Hiamp。Fh$Df BcYzaWx8Tv6Rt4P8Uv6St4Pr2Np0LmJk(Hiamp。Fh$DeBcYzaVx8Tv6Rt4Pq2No0LmJAcXy9Vw7Tu5Rs3Oq1Mo+K m)Ij*Gh%EfCdYAbWy9Uv7St5Qr3Op0MnKl(Hjamp。Gh$EfCdYzbWx9Uv6St4Qr2Op0LnJl(Hjamp。Fg! DeZBc XzaVw8TcXzaVx8Tu6Rs4Pq2No+Lm)Jk*Gi%Eg!CeZAbX y9Vw7Tu5Qs3Oq1Mo+Kl)Ij*Gh$Ef CdYAbWx9Uv7St5Q r2Op0MnJl(Hjamp。Fg$DeBcYz aVx8T v6Rt4Pq2No0Lm)Jk*Hi%Fg! CeZAc XyaVw7Tu5Rs 3Pq1Mo+Km)Ij*Gh%Ef!CdY AbWy9Uw7St 5Qr3O p0MnK l(Ijamp。Gh$EfCdYzb2Np0LnJl(Hiamp。Fg!DeZBcXz aVw8T cXzaVx8Tu6Rs4Pq2No+Lm)Jk*Hi%Eg!CeZAbXy9Vw7Tu5Qs3O q1Mo+Kl)Ij*Gh$EfCdYAbWx9Uv7St5Qr2Op0MnKl(Hjamp。 ? 為此純化過程中須抑制造成水解蛋白，脫糖基，唾液酸化的酶類，如加入一定濃度的苯基對氨基水楊酸，適當濃度的鹽，尿素，葡糖胺等。 ? 而且使用可以用于臨床的檸檬酸緩沖液做流動相，不需另作臨床使用溶劑置換處理。 ? 凝膠層析除純化分離作用外，還可起 脫鹽和置換緩沖液作用。 ? 80年代后期，反相高壓液相純化成為趨勢，多用于離子交換柱的后續(xù)步驟。重組人促紅細胞生成素的純化 2022級生命科學基地 賓雪 楊丹 什么是促紅細胞生成素？ ? 促紅細胞生成素 (Erythropoietin， EPO)是一種促進紅系造血前體細胞分化，繁殖的細胞因子。 不足： 層析條件劇烈，活性喪失多。 第三步：分子篩色譜 ? Sephacryl S200 色譜分析 ? 流程： 上樣體積 80ml 流速 2ml/min 流動相 20mmol/L 檸檬酸鈉 100mmol/L NaCl 緩沖液 結(jié)果： 收集的 rHuEPO保留時間約為 45min 比活性約為 *108U/g蛋白；純度 〉 98%（ SDSPAGE檢測） 免疫原性檢測： Western blot 分析 ? 分子篩，也就是凝膠層析，主要依賴 分子量大小分離蛋白質(zhì)， EPO粗制品中分子量接近的蛋白質(zhì)較多，且該法上樣量小，故一般不用于前期純化步驟。 最后一步分子篩色譜的作用？ ? 將培養(yǎng)上清中一部分與 rHuEPO疏水性，等電點極為接近的蛋白質(zhì)盡量去除，得到98%以上純度的產(chǎn)品。 ? 因此，造成脫糖基化和脫唾液酸化的純化
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