垂直板聚丙烯酰胺凝膠連續(xù)電泳分離乳酸脫氫酶同工酶(存儲(chǔ)版)
【正文】 凹形氧化鋁板緊貼在本體的密封橡膠封條上，用彈簧夾夾緊，在凝膠板和本體之間形成一個(gè)封閉的上液槽。 加入脫色液終止酶促反應(yīng) ， 搖動(dòng) 3~5 min， 凝膠底色脫去直至背景清亮 ， 數(shù)碼相機(jī)照相 。 。 電極導(dǎo)線 安全蓋 上液槽 下液槽 橡膠封條 彈簧夾 冷卻水口 28 五 、 活性染色 ， 脫色 ， 照相： 電泳結(jié)束后 ， 將凝膠板取下 ， 用薄尺子輕輕將玻璃板和氧化鋁板撬開 ， 在凝膠下部切角標(biāo)注凝膠方位 ，然后將帶有凝膠的板反扣過來 ， 膠面朝下 ， 用尺子小心地將凝膠的一角剝離 ， 使凝膠掉入裝有活性染色液的培養(yǎng)皿中 。 22 制膠 (T=%， C=%) 兩組 按照表中的比例和順序在小燒杯中配制凝膠溶液 ， 加入 AP后 ， 立即混勻 ， 沿玻璃板 盡快 倒入玻璃板和金屬板縫隙中 ， 注意不要有氣泡 ， 當(dāng)凝膠液面距短板 （ 白金屬板 ） 上緣 cm時(shí) ， 立即輕輕將 樣品槽模板 插入凝膠溶液中 ， 注意樣品槽中不要有氣泡 ， 凝膠溶液應(yīng)充滿樣品槽間隙 。 LDH同工酶廣泛存在于動(dòng)植物及微生物中，動(dòng)物各組織中 LDH同工酶各組分含量不同。多數(shù)蛋白質(zhì)的pI在中性偏酸性范圍，通常是將樣品在堿性緩沖系統(tǒng)中進(jìn)行電泳，蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，以不同速度向陽極遷移，稱為 陽極電泳 ；對于一些堿性蛋白，使用酸性緩沖系統(tǒng)進(jìn)行電泳，蛋白質(zhì)分子帶正電荷而向陰極遷移，稱為 陰極電泳 。 ? 凝膠 a、 b的比例決定了凝膠的物理性狀。聚合反應(yīng)受各種因素的影響： ? 催化劑和加速劑的濃度 應(yīng)選擇合適的 AP和 TEMED濃度使聚合時(shí)間控制在 30— 60min內(nèi)較好，過量的催化劑和加速劑會(huì)引起燒膠和蛋白質(zhì)條帶的畸變。1 垂直板聚丙烯酰胺凝膠連續(xù)電泳分離乳酸脫氫酶同工酶 （活性染色鑒定法） 2 實(shí)驗(yàn)原理 ? 關(guān)于垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳 ? 關(guān)于連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng) ? 關(guān)于乳酸脫氫酶同工酶及酶活性染色 3 垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳 ? 電泳 帶電顆粒在電場的作用下，向著與其電性相反的電極方向移動(dòng)，這種現(xiàn)象稱之為電泳。 ? 硫酸自由基的氧原子激活 Acr單體并形成單體長鏈： ? Bis將單體長鏈間連成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)： 5 6 化學(xué)聚合的凝膠孔徑較小，常
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