垂直板聚丙烯酰胺凝膠連續(xù)電泳分離乳酸脫氫酶同工酶-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 用于制備分離膠，重復(fù)性好。 式中， a為丙烯酰胺單體的質(zhì)量 (g)， b為交聯(lián)劑的質(zhì)量 (g)， m為溶液的終體積 (mL)。利用蛋白質(zhì)分子中所帶凈電荷、分子質(zhì)量、形狀的差異，在電場(chǎng)中泳動(dòng)的速度和方向不同，從而達(dá)到分離的目的。目前已知 LDH同工酶是由 H和 M亞基按不同比例組成的四聚體。 背板 壓條 固定架 橡膠墊 底座 凸輪 21 將固定架安裝在底座上 將固定架置于凝膠 模底座上，螺絲朝外， 固定架兩側(cè)插入凸輪， 凸輪旋轉(zhuǎn) 180o使凝膠模 的下緣在固定架的橡膠 墊上壓緊，形成一個(gè) 密 閉的夾心式凝膠模 。 26 骨骼肌 8μL 心肌 5μL 肝臟 3μL 腦 10μL 27 四、電泳： 加樣后，蓋上電泳 槽安全蓋，接通電源， 注意正負(fù)電極的連接， 將電泳儀調(diào)至恒壓 80 V， 待指示劑全部進(jìn)入凝膠 后，電壓提高到 120 V， 繼續(xù)電泳，直到溴酚藍(lán) 前沿到達(dá)距凝膠下端約 cm時(shí)，關(guān)閉電源， 停止電泳（本實(shí)驗(yàn)可將 溴酚藍(lán)走出 ~1h后停 止電泳）。 ? 實(shí)驗(yàn)完成后，將電泳裝置洗凈，所用配件放回盤(pán)中，老師檢查合格后方可離開(kāi)。 29 附： 制干膠 用兩張玻璃紙將凝膠制成夾心式干膠 ，待凝膠干透后 ， 取下玻璃板即可得到平整透明的電泳干膠圖譜 。 25 加樣 取 125mL電極緩沖液貯液，用去離子水稀釋到 250mL，加入 上、下緩沖液槽中 ， 注意上槽液要 高過(guò)凹形板 ，凝膠板與下液槽的縫隙處無(wú)氣泡。反應(yīng)式如下： 15 LDH4 LDH3 LDH5 LDH1 LDH2 1 2 3 4 電泳結(jié)果實(shí)例 16 電泳裝置 采用 Pharmacia公司的 SE250小型夾心式垂直板電泳裝置： ? 制膠裝置 制備凝膠板 ? 電泳裝置 進(jìn)行凝膠電泳 每組（ 2人）做一塊膠，兩組共用一套電泳裝置，兩套電泳槽共用一臺(tái)電泳儀。 12 不連續(xù)系
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