【正文】 青菜 大豆 —— 馬唐草 矮牽牛 —— 龍面花 大麥 —— 花生 大麥 —— 大豆 小麥 —— 矮牽牛 油菜 —— 大豆 玉米 —— 大豆 大豆 —— 野豌豆 大麥 —— 蠶豆 大豆 —— 草香木犀 酵母菌 —— 雞 大豆 —— 煙草 大豆 —— 秋水仙 人 —— 胡蘿卜 番茄 —— 馬鈴薯 人 —— 小鼠 葉 —— 葉 葉 —— 根 愈傷組織 —— 葉 葉 —— 花瓣 種子 —— 種子 葉 —— 懸浮細胞 葉 —— 花瓣 葉 —— 懸浮細胞 葉 —— 懸浮細胞 懸浮細胞 —— 懸浮細胞 葉 —— 根 懸浮細胞 —— 葉 原生質體 —— 血紅細胞 懸浮細胞 —— 葉 懸浮細胞 —— 葉 腹水癌細胞 —— 原生質體 葉 —— 根尖 纖維肉瘤細胞 —— 畸胎瘤細胞 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 幾種細胞融合成功的例子 植物融合細胞成長狀態(tài)對比 ,右瓶為地面融合的細胞，左瓶中為太空微重力環(huán)境下融合的細胞 動物細胞融合實驗使用的小白鼠 動植物細胞的融合過程 植物細胞融合過程 人造小鼠培育過程示意圖 細胞融合的意義 ?理論上說任何細胞，都有可能通過體細胞雜交而成為新的生物資源。 用滅活的病毒誘導的動物細胞融合過程示意圖 ? 優(yōu)點是易得，用法簡單，融合效果穩(wěn)定。其缺點是融合過程繁瑣， PEG可能對細胞有毒害。 ? 6） 核質體 ：有細胞核而帶有少量細胞質的亞原生質體 ?基于酶缺陷型細胞和藥物抗性所建立的雜種篩選 ?基于營養(yǎng)缺陷型細胞所建立的雜種篩選 ?由溫度敏感型細胞組成的雜種細胞的篩選 ?具有所需性狀雜種細胞的篩選 常用的雜種細胞篩選方法 植物細胞篩選方式 1） 遺傳互補篩選法： 利用每一親本貢獻一個功能正常等位基因，糾正另一親本的缺陷，令雜種細胞表現(xiàn)正常。 ?親本 A：色氨酸缺陷型 ?親本 B：蘇氨酸缺陷型 ?雜種細胞可以在不含色氨酸和蘇氨酸的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，而親本細胞均會死亡。 ? 一些近親植物、有性不親和的組合，如馬鈴薯 番茄等都得到了再生植株。 特點： 特異性強、靈敏度高 只針對某一抗原決定簇 單克隆抗體技術的核心是用 骨髓瘤細胞 (myeloma cell)與經(jīng)特定抗源免疫刺激的 B淋巴細胞 (antigen stimulated B lymphoblast)融合得到 雜交瘤細胞 (hybridoma cell)，雜交瘤細胞既能象骨髓瘤細胞那樣在體外無限增殖，又具有 B淋巴細胞產(chǎn)生特異性抗體的能力。免疫時是否采用佐劑和事先處理抗原，要依抗原性的強弱而定。 思考： 本過程利用了哪些原理？ 免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理 為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與 B細胞融合？ 這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質，不僅具有 B細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領，因而可以獲得大量單克隆抗體 單克隆抗體的應用 與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯 。 動物體細胞核移植是一種無性繁殖技術，用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。 ?制備轉基因動植物的生物反應器。 ?新型動植物品種的培育。 胚胎移植技術 試管動物（嬰兒）培養(yǎng)過程 卵細胞 精子 體外受精 受精卵 胚胎 新個體 母體子宮內 孕育、產(chǎn)出 一、動物體細胞核移植技術和克隆動物 動物細胞全能性的表現(xiàn)程度不同 受精卵 胚胎干細胞 多能干細胞 單能干細胞 體細胞 核移植 胚胎細胞核移植 體細胞核移植（難度高） 動物體細胞核移植 是將動物的一個細胞的細胞核 ,移如入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中 .使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎 ,這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。 （五）細胞融合 (1)將 1ml 40％的 PEG液一滴滴加入列細胞團中，在 60秒內加完，同時并不斷輕微 轉動離心管或用手指輕彈離心管； (2)在不斷轉動離心管中加 1ml無血清培養(yǎng)液， 60秒鐘內加完； (3)于 5分鐘內慢慢加完 20ml無血清培養(yǎng)液；此時細胞對機械損傷非常敏感， (4)離心 (800轉／分， 8分鐘 )，去上清，用完全培養(yǎng)液 10ml懸浮，輕輕混勻； (5)取 96孔板，每孔加 50?l； (6)取等體積細胞懸液，向另一 96孔板中加 50P1； (7)送入 5％ CO2，溫箱中 37℃ 培養(yǎng)， 24小時后更換成 HAT選擇性培養(yǎng)掖。只有融合細胞具有親代雙方的遺傳性能，可在 HAT培養(yǎng)基中長期存活與繁殖并分泌抗體。 ３．每一個淋巴細胞只能產(chǎn)生一種抗體。 雜種細胞在植物育種中的應用 ? 雜種細胞 是一條 新的育種途徑 ，可以產(chǎn)生新經(jīng)濟性狀的良種。 ?親本 A：對氨芐青霉素敏感，對卡娜霉素不敏感 ?親本 B：對卡娜霉素敏感，對氨芐青霉素不敏感 ?雜種細胞可以在含有兩種抗生素的培養(yǎng)基上生長 ?2） 營養(yǎng)互補篩選系統(tǒng)： 細胞在缺乏一種或幾種營養(yǎng)成分時，不能生長繁殖，即營養(yǎng)缺陷型細胞。 電融合誘導法原理示意圖 雜種細胞的篩選 雜種細胞的篩選 ? 原理： 兩種親本細胞融合的混合物中可能有多種類型細胞，篩選的目的是獲得優(yōu)良的雜種細胞。 二、聚乙二醇（ PEG）法 聚乙二醇（ PEG）法細胞融合過程 ?PEG的作用機理 ： Kao等認為，由于 PEG分子具有輕微的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質和碳水化合物等形成 H鍵，從而在在質膜之間形成分子橋，其結果是使細胞質膜發(fā)生粘連進而促使質膜的融合；另外， PEG能增加類脂膜的流動性，也使細胞的核、細胞器發(fā)生融合成為可能。并使兩細胞相互凝聚； ②在 37℃ 中，病毒與細胞膜發(fā)生反應，細胞膜受到破環(huán)，此時需 要 Ca2+和 Mg2+，最適 PH為 ； ②細胞膜連接部穿通，周邊連接部修復，此時需Ca2+和 ATP； ④融合成巨大細胞，仍需 ATP 。 ?1975年 Kohler和 Milstein成功地融合了小鼠 B淋巴細胞和骨髓瘤細胞而產(chǎn)生能分泌預定單克隆抗體的雜交瘤細胞。 酒精燈置于中央，打開的培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等應保持斜立或平放（瓶口長時間開口直立 ,易增加落菌機會）。 無菌操作的要領 ? 由于體外培養(yǎng)的細胞缺乏機體抗感染功能，所以在一切操作中要努力作到最大限度的無菌，防止污染。 ?水純化裝置 細胞培養(yǎng)對水的質量要求較高。 ?操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機及倒置顯微鏡等。 6)、無污染環(huán)境 ? 培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。膠原是從動物真皮中提取的，具改善細胞表面特性促使其附著生長的作用。牛血清分為 胎牛血清和犢牛血清 ，前者來源少，價格高；后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛，因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復雜的成分。 ?人工合成培養(yǎng)基，如 109培養(yǎng)液、 DMEM、19 ? RPMI1640， IMEM， MEM培養(yǎng)液等。 4）營養(yǎng) — 培養(yǎng)基： ? 在保證細胞滲透壓的情況下，培養(yǎng)液里的成分要滿足細胞進行代謝所需要的各種營養(yǎng)，如包括十幾種必需氨基酸及其他多種非必需氨基酸、維生素、碳水化合物及無機鹽類等。 ℃ ，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。 細胞培養(yǎng)以玻璃器皿為主。 （分解彈性纖維） 有關概念 ?原代培養(yǎng) ：從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。 在京展出的數(shù)天，盡管門票高達 20元，但還是有將近 20萬人，心甘情愿地掏錢一睹 “ 人耳鼠 ” 的風采。 有機氮源 通常采用的有機氮源有 蛋白質水解物 、 谷氨酰胺或氨基酸混合物 等 。 小規(guī)模的細胞培養(yǎng)通常在培養(yǎng)瓶中完成 ， 而大規(guī)模的培養(yǎng)可在發(fā)酵罐中進行 。 1）植物細胞和組織培養(yǎng)技術 植物組織培養(yǎng)的過程 離體的植物器官、組織或細胞 脫分化（又叫去分化） 愈傷組織 （排列疏松而無規(guī)則，高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞） 再分化 根或芽等器官 植物體 植物組織培養(yǎng)的條件： 適宜的養(yǎng)料和激素，適宜的溫度和無菌條件 離體的植物器官、組織或細胞 愈傷組織 根 芽 植物體 脫分化 再分化 脫分化 由高度分化的植物器官、組織或細胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細胞的脫分化。 原因： 是生物體的每一個細胞都含有該物種所特有的全套遺傳物質及發(fā)育為完整個體所必需的全部基因。 受精卵的全能性最高； 其次是生殖細胞（尤其是卵細胞）； 體細胞的全能性比生殖細胞低得多。 （不同種生物之間存在著生殖隔離，所以用傳統(tǒng)的有性雜交方法是不可能做到這一點的） 相關問題 （ 1）要想讓兩個來自不同植物