組化3第三章酶組化(存儲版)
【正文】 硫化鈷黑色沉淀為酶活性所在部位。 （三）、光鏡顯示方法 硫化鉛法 （ 1）原理：以吐溫為底物，在脂酶的作用下，分離出來的脂肪酸可與鈣形成鈣皂沉淀，進一步以鉛置換鈣，最后再經(jīng)硫化銨生成棕黑色硫化鉛沉淀。 用酯來檢測底物特異性時 ， AchE能最快地促進乙酰膽堿分解 ， 也能分解乙?；?β－甲基膽堿 ， 但不能分解苯甲酰 （ 基 ） 膽堿 ， 同時， 此酶能被 高濃度的乙酰膽堿所抑制 ， 但是 ChE則不同 ， 乙酰膽堿濃度越高 ， 越能被 ChE所分解。 (5)對照：用四異丙基焦磷酰胺（ ISO－OMPA） 4mM(%)堿酯酶酶而顯示乙酰膽堿酯酶 (AchE)。 （ 3）染色步驟： ①新鮮組織，冰凍切片； ②固定：冷丙酮或 10％福爾馬林固定 20~25分鐘； ③蒸餾水洗； ④入孵育液 ,室溫或 37℃ ，恒溫孵育 1~2小時； ⑤蒸餾水洗； ⑥甘油明膠封固。 八、乙酰膽堿酯酶和膽堿酯酶 (一 ) 名稱 常用名 :乙酰膽堿酯酶 (Acetylcholinesterase), 膽堿酯酶 (cholinesleraes) (二 )反應原理 廣義的膽堿酯酶可分為乙酰膽堿酯酶 (AChE)和狹義的膽堿酯酶 (ChE)兩大類 。活性部位的染色根據(jù)重氮鹽的不同而不同，堅牢紅 TR為紫紅色，堅牢藍 RR為青銅色。 （ 2） 孵育液的配制： 三磷酸腺苷鈉鹽 60mg 4ml 蒸餾水 2ml CaCl2 2ml 2,4－二硝基苯酚 30mg （ 1）方法與步驟： ① 新鮮組織 ,冰凍切片； ② 入孵育液，恒溫 37℃ 孵育 20~40分鐘 ③ 蒸餾水洗； ④ 1％ CaCl2溶液換洗三次，每次 2分鐘 ⑤ 蒸餾水洗； ⑥ 入 CoCl2液 5分鐘 。 最適 pＨ值為 。 (5)對照 : ① 除去底物；②以 223。 例如它可以最快的速度催化葡萄糖－ 6－磷酸水解 ,也可以水解阿洛糖 6磷酸 、 1,5山梨醇聚糖 6磷酸 、 甘露糖 6磷酸 、 半乳糖 6磷酸 、 核酸－ 5－磷酸及 2甘油磷酸 ,同時此酶還可水解焦磷酸 、 核苷三磷酸 ,果糖 6磷酸 、 氨甲?；?磷酸 、 磷酸烯醇丙酮酸 、 磷酰胺鹽和某些其它焦磷酸化合物 。 ④ 自來水洗 。 三 、 ５ ˊ－核苷酸酶 （ 一 ） 名稱 常用名： ５ ˊ－核苷酸酶 （ ５ ˊ－ Nucleotidase） ５ ˊ－核苷酸酶是一種特異性的磷酸單酯酶 ， 它能水解核糖核苷和去氧核糖核苷在Ｃ－ 5位置的磷酸酯 ， 如一磷酸腺苷 （ ＡＭＰ ） ， 一磷酸肌苷 （ ＩＭＰ ） ， 尿苷－磷酸（ UMP） ,胞苷－磷酸 （ ＣＭＰ ） 等 ， 水解產(chǎn)生核苷和磷酸 ， 但不能分解 223。在神經(jīng)傳導沖動時， ACP參與 Ca 2 +依賴的神經(jīng)遞質釋放過程。 ⑧ 甘油明膠封片 。7H2O) 1ml 蒸餾水 5ml 調(diào)此液 pH至 ,可冰箱保存。 ? 試劑的濃度配制必須準確。 酶＋酶的底物 最初的反應物＋另外物質 （ 金屬鹽 ） 不溶于水的顯色產(chǎn)物 酶的分類： ：是催化氧化還原反應的酶。 :是催化分裂或合成化合物的酶。 第二節(jié) 若干酶組織化學反應程序 一 、 堿性磷酸酶 （ 一 ） 名稱： 常用名：堿性磷酸酶 （ alkaline phosphatase, ALP） 水解酶 ， 在堿性環(huán)境下催化水解磷酸脂生成磷酸和醇 。 ③ 流水沖洗 5min 。 5）
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