花生中植物螯合肽pc的研究__本科畢業(yè)論文(存儲(chǔ)版)
【正文】 表明， PC 不僅可以緩解重金屬鎘對(duì)植物的毒性作用還可以提高對(duì)重金屬鎘的抗性。 實(shí)方法驗(yàn) 花生樣品的處理 花生種植后，樣品被粉碎，利用索氏提取脫脂，脫脂干燥后是一種粗蛋白粉，稱 0 . g 蛋白粉末。 7 第 2 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論 PCs 標(biāo)準(zhǔn)樣品混合物的色譜分離 經(jīng)提取的 GSH， PCs 巰基化 合物和衍生試劑 (mBBr) 在 45℃的條件下衍生反應(yīng)40min 以后，生成帶有熒光的衍物 mBSR， 在 MBSR 流線（ ACN % TFA）下，一定濃度的混合樣品的 4 種化合物和 GSH 的 分離是很清楚的，依次是 GSH ＞ PC2 ＞ PC3 ＞ PC4 這樣的分離順序 。當(dāng)濃度為 － ，線性方程為 y = + 80275（ r=） 當(dāng)信噪比 S/N=3 時(shí)，儀器檢出限為 /L，定量限為 /L。 研究展望 本研究性實(shí)驗(yàn)在先前的基礎(chǔ)上進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，還有好多工作需進(jìn)一步研究。本實(shí) 驗(yàn)建立了獨(dú)特的檢測(cè)方 11 法被證明花生含有丙氨酸 類 PC 化合物。從圖 6b 可以得出 ， 信號(hào)反應(yīng)最強(qiáng)的是 m/z1018 的 [M ]+母離子峰 ； m /z 698 的是 [MGluCysAla]+離子峰， m/z 929 的為 [MAla]+離子峰，均為斷裂峰 ； m/z1019 為 [M + H ]+離子峰， m /z 521 為[M+H+ Na]2 +離子峰 ， m /z 1056 為 [M H + K ]+離子峰 ， 大概是由于環(huán)境，樣品和容器含鉀， N 和其他堿金屬，由于去除堿金屬樣品存在困難，所以在質(zhì)譜， K 離子 往往 往 作為一個(gè)特征離子。 色譜質(zhì)譜條件 （ 1） 實(shí)驗(yàn)的色譜條件 ： 選用洗脫劑為 0 .1 % 三氟乙酸 ( TFA)乙腈進(jìn)行梯度淋洗， 流速為 /min； 淋洗梯度條件見表 ； 設(shè)置柱溫為 30℃ ； 220280 nm的 二極管陣列檢測(cè) ； 進(jìn)樣容量為 10ml。見 圖 圖 PC解除重金屬的毒害作用機(jī)理示意圖 5 第 1 章 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器 該實(shí)驗(yàn)所用的實(shí)驗(yàn)試劑有：三氟乙酸（分析純，沈陽(yáng)新紀(jì)化學(xué)公司） ； 乙腈 (色譜純， 沈陽(yáng)新紀(jì)化學(xué)公司 )； (γ G l uCys) 4β A la(北京盛科博源生物科技有限公司 )；PC 標(biāo)準(zhǔn)品（純度 97%的丙氨酸類植物螯合肽 PC4 )； 去離子水 ； 花生。 PC 對(duì)重金屬的解毒作用 PC 可提高植物對(duì)重金屬的抗性 斯特芬和其他科學(xué)家在 1986 年使番茄品種細(xì)胞用足以致死的濃度處理，獲得了抗 Cd2+的細(xì)胞，獲得的抗性細(xì)胞中，植物螯合肽的累積量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常細(xì)胞， 但隨著 γ谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制劑 BSO（丁亞磺酰亞胺）作用于 Cd2+抗性細(xì)胞之后，其又恢復(fù)了對(duì) Cd2+的敏感性，所以他 們認(rèn)為 PC 含量與細(xì)胞對(duì) Cd2+的抗性有關(guān)，做了不同植物的實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果是一樣的。 PC 合成 Salt 等研究者將植物對(duì)金屬的解毒機(jī)制分為生物轉(zhuǎn)化、細(xì)胞修復(fù)作用、區(qū)室化作用、螯合作用這四個(gè)方面。 Plant chelating peptide (PC)。 本實(shí)驗(yàn) 利用 C 反相柱 ，用 乙腈 和 %的三氟乙酸檢測(cè) 了 花生中在不同濃度鎘誘導(dǎo)下形成的植物螯合肽含量。研究發(fā)現(xiàn) 鎘被人體吸收后，在體內(nèi) 變成 鎘硫蛋白， 鎘硫蛋白 具有 選擇性 ，可累積 于腎、肝中。鎘在體內(nèi)可與含 氨基、 羥基、硫基的蛋白 質(zhì)分子結(jié)合， 抑制 許多酶系統(tǒng) ，從而 使 肝、腎器官中酶系統(tǒng)的 正常功能 受阻 。結(jié)果表明， 重金屬鎘污染的花生中都檢出不同濃度的植物螯合肽。研究表明 PC 最初是在用 200 mMol/LCdSO4 誘導(dǎo)蛇根木懸浮細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)的，目前人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了 5 種帶有不同的C末端氨基酸 種類 的 PC，分別是：（ γ谷氨酸 半胱氨酸） nGly， (γ谷氨酸 半胱氨酸）nGly， （ γ谷氨酸 半胱氨酸） βAla，（ γ谷氨酸 半胱氨酸） nser 和（ γ谷氨酸 半胱氨酸） n。 PC 的合成需要金屬離子的誘導(dǎo) 2 PC 的合成可被金屬離子激活 ， 因?yàn)槊傅幕钚阅鼙唤饘匐x子誘導(dǎo)。 PC 解除重金屬的毒害作用機(jī)理 植物螯合肽的功能 主要是通過(guò)絡(luò)合重金屬與將重金屬區(qū)室化來(lái)減輕重金屬對(duì)細(xì)胞的毒害，多數(shù)金屬離子都能被 PC 絡(luò)合，但是研究較清楚的是植物螯合肽與金屬Cd 的絡(luò)合機(jī)制，并且日前分離出的 PC 大多是 PCCd 型復(fù)合物。 花生中 PC 的提取 根據(jù) sneller（ 20xx）的方法，把花生鮮樣用液氮在研缽中磨碎，然后冷凍干燥達(dá)70 小時(shí)，冷凍干燥以后稱量約 的花生，再加入 7mL 的 % TFA（含， PH1)，充分振蕩 30min ，然后 4 度下， 在約 10000 r/m in 離心率下離心 20 m i n ， 吸取上清液以備待測(cè)用。 見圖 0 10 20 30 40 t/min 圖 混合樣品中標(biāo)準(zhǔn) PC， GSH化合物的色譜分離 鎘對(duì)花生體內(nèi) PC 和 GSH含量和 PCs 狀態(tài)的影響 由圖 可得到，在濃度為 60 mol/L 的 Cd 的脅迫作用下，花生體內(nèi) GSH 與未加毒的比較相比含量無(wú)有明顯差別，這是由于土壤環(huán)境中有 Fe 或者 Zn 等金屬 離子的 存在使得在無(wú) Cd 的對(duì)照組中也檢測(cè)到 了 PC2 ，通過(guò)設(shè)置多重比較，可知，花生經(jīng)
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