【正文】 脊液中 Aβ Aβ 42和 Tau 蛋白的參考正常值。 4．研 究工作的預(yù)期結(jié)果或成果 預(yù)期通過對(duì)不同年齡段的非癡呆人群 腦脊液 Tau 蛋白和 Aβ的檢測(cè)，界定其人群的參考正常值。 2） 本院核醫(yī)學(xué)科有一流技術(shù)的醫(yī)技人員和成套設(shè)備，能夠完成該科題的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。 編程軟件材料費(fèi) 萬元；資料、書籍購(gòu)買費(fèi) 萬元 直接主管部門開戶銀行及帳號(hào)： 主要研究單位開戶銀行及帳號(hào) 11 五、合作單位意見 （一）同意申請(qǐng)書的內(nèi)容并做到： 保證參加合作研究的人員、物力和時(shí)間： 督 促課題參加者按計(jì)劃完成所承擔(dān)的研究工作，并按時(shí)報(bào)送有關(guān)報(bào)表 （二）需要說明的其它問題： 合作單位 1 （公章） 合作單位 2 （公章） 合作單位 3 （公章） 合作單位 4 （公章） 12 六、申請(qǐng)單位學(xué)術(shù)委員會(huì)審查意見（對(duì)本課題的意義特色和創(chuàng)新之處，研究方法的先進(jìn)性、可行性及研究者素質(zhì)水平等簽署意見） 本研究課題緊密聯(lián)系臨床，研究人群腦脊液的 Aβ和 Tau蛋白的參考正常值，為 AD 的診斷提供客觀的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 3．所 簽定的此項(xiàng)合同課題，乙方不得另向其它部門或單位申報(bào)計(jì)劃。 8．凡未被甲方認(rèn)可的理由，不如期按要求完成合同任務(wù)者，進(jìn)行文字通報(bào)。其研究成果未經(jīng)專家鑒定或未經(jīng) 方同意，不得對(duì)外提供 成公開發(fā)表具有保密價(jià)值的關(guān)鍵資料、數(shù)據(jù)（包括某些訣竅、方法）。由甲方資助經(jīng)費(fèi)總額 元，分 次拔完，完成全部合同任務(wù)。 2．實(shí)現(xiàn)本項(xiàng)研究已有的主要儀器設(shè)備，尚缺的儀器設(shè)備及解決途徑 本院核醫(yī)學(xué)科有成套的儀器設(shè)備，已開展放射免疫檢測(cè)多年，不缺任何儀器設(shè)備，只需購(gòu)買相應(yīng)的試劑合。 4） 書寫論文。 目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于腦脊液 Aβ和 Tau 蛋白檢測(cè)的報(bào)道主要是對(duì)已確診為癡呆的研究，對(duì)非癡呆患者 腦脊液 Tau 蛋白和Aβ的檢測(cè)的報(bào)道甚少。徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 20xx， 2： 109112。 2． 吳愷，胡剛，國(guó)泓，等。其原因主要與沒有分別測(cè)定 Aβ Aβ 42 和總 Aβ有關(guān)；且因均采用 ELASA 法，測(cè)出的結(jié)果受主客觀影響較大，致使 Aβ測(cè)定的應(yīng)用價(jià)值降低 。 本研究擬采用放射免疫法檢測(cè)不同年齡段人群（包括癡呆和非癡呆）腦脊液 β Aβ 42和 Tau 蛋白含量，通過大樣本的分析，界定其參考正常值范圍，為Alzheimer 病的診斷提供可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 3）、實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的主要實(shí)驗(yàn)儀器： （ 1）、病理制片配套設(shè)備 （ 2）、石蠟、冷凍、恒冷、超薄切片機(jī) （ 3）、顯微像系統(tǒng) （ 4）、熒光、相差、倒置、自動(dòng)照相顯微鏡 （ 5）、細(xì)胞培養(yǎng)全套設(shè)備 （ 6）、熒光分光光度計(jì)和紫外分光光度計(jì) （ 7）、 PCR 儀、電泳儀 （ 8）、低溫超速離心機(jī) （ 9）、超低溫冰箱 （ 10）、流式細(xì)胞儀 （ 11）、石英三蒸水發(fā)生器 （ 12）、三維細(xì)胞培養(yǎng)器 （ 13）、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用設(shè)備 （ 14）、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)維持設(shè)備 4）、骨形態(tài)計(jì)量學(xué)涉及的圖像分析系統(tǒng)已具備。 2）、生理負(fù)荷和超負(fù)荷下成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的生物學(xué)性狀。 年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究結(jié)果。 本項(xiàng)目的特色與創(chuàng)新之處。 本項(xiàng)目在技術(shù)思想上是課題“？？？”的延續(xù)和發(fā)展。 四）、 采用 RTPCR 檢測(cè)不同負(fù)荷下 表達(dá)差異明顯的基因 擬對(duì)在骨形成和骨吸收中基因表達(dá)差異（上調(diào)或下調(diào)）超過 5 倍的基因，應(yīng)用RTPCR 法進(jìn)行基因表達(dá)水平的半定量測(cè)定，并結(jié)合基因數(shù)據(jù)庫(kù)分析此生理過程中涉及功能性基因的種類和變化的幅度，以期闡明“標(biāo)記”基因。 二）、 體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞在間斷力學(xué)刺激下基因表達(dá)譜的基因芯片檢測(cè) 1）、體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞，觀察不同負(fù)荷下的生物學(xué)性狀。 4）、通過探索骨形成和骨破壞過程中 OB 和 OC 特異性基因表達(dá)的種類和豐度，嘗試找尋相應(yīng)的“標(biāo)記”基因。 第二部分：體外培養(yǎng) OB 和 OC，采用基因芯片法檢測(cè)不同力值的間斷力學(xué)刺激下OB 和 OC 基因表達(dá)譜的時(shí)序變化。22(5):2714. 1 Moalli MR, Caldwell NJ, Patil PV, et in vivo model for investigations of mechanical signal transduction in trabecular Bone Miner Res. 20xx Jul。 參考文獻(xiàn)： Lee TC, Staines A, Taylor D. Bone adaptation to load: microdamage as a stimulus for bone remodelling. J Anat. 20xx Dec。 Vaes[16]等人曾嘗試應(yīng)用基因芯片的方法，找尋骨形成蛋白 2 誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化過程中的標(biāo)記基因，為探尋力學(xué)信號(hào)對(duì)骨系細(xì)胞基因表達(dá)的影響提供了一個(gè)好的思路。成骨細(xì)胞在某些力學(xué)刺激因素作用下表達(dá)一些因子，從而將骨吸收信號(hào)傳遞給破骨細(xì)胞的前體細(xì)胞，使之分化發(fā)育并活化，行使骨吸收功能。 Cillo 等 [8]則針對(duì)另外一些重要的基因表達(dá)進(jìn)行了研究：實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)拉伸應(yīng)力可以使 TGFβ和胰島素樣生長(zhǎng)因子 II 的 mRNA 表達(dá)增加，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)減少，且不同的力值和加載時(shí)間對(duì)這些基因的表達(dá)有不同的影響。 骨吸收會(huì)使種植體與骨組織分離，增加了植入物微粒、細(xì)菌及炎癥介質(zhì)等侵入的機(jī)會(huì)，引起炎癥反應(yīng)，加速骨吸收并造成植入體松動(dòng)，進(jìn)而影響種植體的生存率和生存時(shí)間。明確從骨形成到骨破壞這個(gè)質(zhì)的變化過程中，基因表達(dá)的差異和 相關(guān)的特異性基因，探討成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的耦聯(lián)機(jī)制，從系統(tǒng)角度研究生理負(fù)荷促進(jìn)骨形成和超負(fù)荷導(dǎo)致骨破壞的基因調(diào)控機(jī)制的差異，嘗試篩選出與骨形成和骨破壞相關(guān)基因，以為骨生物力學(xué)及骨組織工程學(xué)提供理論依據(jù)，并進(jìn)一步完善負(fù)荷狀態(tài)下骨組織與人工材料界面骨改建機(jī)制的理論，為臨床診斷和防治提供理論先導(dǎo)。成骨細(xì)胞 (OB)和破骨細(xì)胞 (OC)是骨改建的兩大主要功能細(xì)胞，在應(yīng)力、生長(zhǎng)因子、激素等作用下兩者之間相互作用，相互調(diào)控，使骨產(chǎn)生適應(yīng)性地構(gòu)建。但是最近的研究表明 [9]： 應(yīng)力可直接導(dǎo)致 體外培養(yǎng)的破骨細(xì)胞 mRNA 表達(dá)的增強(qiáng)，并伴隨著骨吸收能力的增強(qiáng) 。 從以上研究中可以看出：（ 1）力學(xué)刺 激導(dǎo)致 OB、 OC 基因改變的過程涉及眾多基因的變化，但針對(duì)個(gè)別基因的研究顯得較為凌亂，基因之間的相互影響也不清楚，不能精確地闡明各基因在這一過程中的作用。激光捕獲顯微切割技術(shù) [19]（ Laser Capture Microdissection ， LCM）則是解決細(xì)胞異質(zhì)性問題的革命性技術(shù)，是在顯微鏡下從組織切片中分離、純化單一類型細(xì)胞群或單個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。537(13):11720. Kletsas,Dimitris,Basdra,et al. Effect of proteinkinase Inhibitor on the stretchelicited cfos and cjun upregulation In human PDL osteoblastlike cells [J].Cell Physiol,20xx,190(3):313— 321. 6 、 Ikegame M,Ishibashi O,YOSHIZAWA T,et stress Induces bone morphogeic protein 4 in preosteoblastic and fibroblastic cells,which later differentiate into osteoblasts leading to osteogenesis in the mouse calvariae in an culrure [J]Bone Miner Res,20xx,16(1):2432. Pavlin D, Zadro R, GluhakHeinrich J. Temporal pattern of stimulation of osteoblastassociated genes during mechanicallyinduced osteogenesis in vivo: early responses of osteocalcin and type I collagen. Connect Tissue Res. 20xx Oct。20(2):18792. 1 Vaes BL, Dechering KJ, Feijen A, et microarray analysis of bone morphogeic protein 2induced osteoblast differentiation resulting in the identification of novel markers for bone Bone Miner Res. 20xx Dec。 第五部分： 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較體內(nèi)外 OB、 OC