【正文】 云龍，王哲 .動物營養(yǎng)代謝病 [M].長春吉林科技出版社， 1995. [18] Abumrad NN,Schneider AJ， Steel acid intolerance during prolonged total paranteral nutrition reversed by molybdate therapy [J].Am J Clin Nutr ,1981,34(11):25512559 [19] Eisler R. Molybdenum hazards to fish, wildlife, and invertebrates: a synoptic review[J]. US Fish Wildl. Serv. Biological Report, 1988, 85(). [20] Hille R. Molybdenum in Biological Systems[M]//Encyclopedia of Metalloproteins. Springer New York, 20xx: 14441450. [21] 王宏偉 .周變?nèi)A .張樑 .張森 .胡文發(fā) .楊自軍 . 高鉬低銅對小鼠腎臟結(jié)構(gòu)及其表達(dá)TNFα蛋白的影響 [J] .動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 20xx(9). [22] 胡國良 , 張彩英 . 重金屬對畜禽的危害及其防控 [J]. 生物災(zāi)害科學(xué) , 20xx, 35(1): 9396. [23] 李珂 , 龍輝 , 吳清明 . 鉬對人食管癌細(xì)胞 的化療增敏作用及對食管癌干細(xì)胞 p75nTR 的影響 [J]. 世界華人消化雜志 , 20xx, 20(11): 959963. [24] 高進(jìn)東 ,丁明星 .畜禽免疫球蛋白的功能及應(yīng)用 [J].動物保健 ,20xx ,7 . [25] 李三強(qiáng) , 龍晶 . 飲用天然高鉬水誘發(fā)的鉬中毒耕牛主要生物酶測定 [J]. 動物營養(yǎng)學(xué)報(bào) , 1998, 10 (1): 2933. 17 致 謝 本論文是在導(dǎo)師 楊自軍 教授的悉心指導(dǎo)和嚴(yán)格要求下 完成 的。 最后， 由衷的感謝我的父母 和同學(xué) ，他們的 關(guān)心、 理解和 不懈 支持永遠(yuǎn)是我繼續(xù)前進(jìn)的精神動力！ 再次 感謝動醫(yī) 10 級的全體兄弟姐妹們，以及所有關(guān)心、幫助和支持我的朋友們！ 弓超 20xx 年 6 月 7 日 18 外文文獻(xiàn)翻譯 長期暴露于金屬（銅，鎘，鉛，鋅）環(huán)境中歐洲共同海星免 疫細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)（海星魯本斯） 摘要 常見的海星（海星魯本斯）是東北部大西洋底棲息生物群落的一個(gè)關(guān)鍵物種。 關(guān)鍵詞 ： 棘皮動物 ，海洋污染 ，金屬堆積 ，熱休克蛋白 1 前言 海洋生物受到越來越多的環(huán)境污染所造成的壓力，例如過度捕撈和海岸線的退化。rfjord 仍然是污染最嚴(yán) 重的區(qū)域在歐洲。 Sugni等人， 20xx 年， Falugi 等， 20xx）。rfjord聚集在南挪威西海岸金屬積聚成幾個(gè)組織（體壁和幽門 coeca）中以濃度依賴性的方式，相對于存在于沉積物中重金屬含量 （ Coteur 等人， 20xx 年 a）。在 S1高度污染的采樣點(diǎn)是位于 峽灣（ 60*790N， 06*），而在S4相對未受污染的部位是在它的嘴 和底部 ， 面 向公海 （ 60*， 06*）。 體腔細(xì)胞處理和免疫印跡產(chǎn)品分析 20 取出 約 （ CF）， 其中 含有游離循環(huán)體腔細(xì)胞，從每一個(gè)海 星 的手臂倒 刺加入 等體積的抗凝血緩沖， 80％由 CMASW（鈣 /鎂免費(fèi)人工海水，滲透壓200毫滲量： 37克 / L 的 / L 的 / L 硫酸鈉 / L 的NaHCO 3）和 20％的 EDTA 溶液（ / L）。 根據(jù) 所選位點(diǎn)的地理位置和特點(diǎn)，以及沉積物的特性， 它們 已被先前描述（ Coteur 等， 20xx年 a。他們 中 的 這些，是吞噬細(xì)胞的主要成分，約占 95％的總?cè)丝冢?Pinsino 等， 20xx）。施羅德等， 20xx。少數(shù)金屬（鎘，鉛，鋅，銅）被發(fā)現(xiàn)從底部到峽灣的口沿梯度分布，由于冶煉廠廢棄的污染物排出的原因，更多積累超過 80年（吉蘭等， 20xx）。由蛋白質(zhì)組圖譜的比較分析，我們發(fā)現(xiàn)， 31 蛋白不同點(diǎn)在于他們的相對豐度，表示基因表達(dá)對于所述金屬混合物危險(xiǎn)回應(yīng)。在此，我要衷心感謝河南科技大學(xué) 及動 物 科 技學(xué) 院 所有關(guān)心、愛護(hù)、幫助我的 領(lǐng)導(dǎo)和老師們 ，四年 來對我的培養(yǎng)和指導(dǎo)。鉬銅聯(lián)合可以使血清中的免疫球蛋白含量降低，隨著鉬含量的逐漸增加，血清中的免疫球蛋白含量下降明顯，但一定量的銅對在一定程度上可以延緩小鼠免疫功能的下降。 其中 IgG雖然隨年齡的增。 小鼠的 IgG有四個(gè)亞類，為 IgG1， IgG2a，IgG2b， IgG3[19]。 邊緣區(qū)是脾內(nèi)免疫細(xì)胞捕獲、識別、處理抗原和誘發(fā)免疫應(yīng)答的重要部位。 4 分析與討論 鉬銅聯(lián)合對小鼠脾臟的形態(tài)學(xué)影響 鉬 (Mo)是動物、植物、微生物及人類必需的微量元素，是黃嘌呤氧化酶，醛氧化 13 酶，亞硫酸氧化酶的組成成分，參與電子傳遞及鐵的釋放與運(yùn)輸，影響多種物質(zhì)的代謝，具有重要的生理學(xué)功能 [13]。 注 : 同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同大寫字母表示 (P＜ )差異極顯著，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著 (P＜ )差異顯著，肩標(biāo)相同字母表示差異不顯著 (P＞ )。 177。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度（ OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠 免疫球蛋白 G(IgG）濃度如表 4。 7 周與 9 周相比差異極顯著 (P＜ )。 IV 177。 177。 7 周與 5周和 9 周相比差異極顯著 (P＜ )。 IV 177。 177。 3 結(jié)果 脾臟的形態(tài)學(xué)變化 如圖 2~6所示，與 I組相比 脾臟低倍鏡下體積增大、腫脹、顏色暗紅，呈現(xiàn)急性充血、出血，后期逐漸萎縮，脾內(nèi)淋巴細(xì)胞少，實(shí)質(zhì)細(xì)胞萎縮。 5洗滌 ：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。 切片與展片 將切片刀安裝妥當(dāng)，與組織塊成 5176。 沖洗 固定后的組織用 70 %酒精稍加清洗后進(jìn)行修切， 去掉不需要部分，選擇好包埋部分。在 5 周、 7 周、 9 周時(shí)用摘眼球取血法剖殺小鼠，取出脾臟，固定包埋處理后，制得切片，經(jīng) HE 染色，用顯微鏡觀察小 鼠脾臟組織病理形態(tài)學(xué)變化；將血液靜置 30 分鐘，高速離心取上清液進(jìn)行小鼠免疫球蛋白酶聯(lián)免疫分析并用酶聯(lián)免疫分析小鼠血清中 IgG 含量。2H 2O），天津市化學(xué)試劑四廠，含鉬量為 %； 銅用硫酸銅（ CUSO4178。脾內(nèi)濾血的 主要部位是脾索和邊緣區(qū)。鞘毛細(xì)血管可間歇性地收縮或擴(kuò)張，有調(diào)節(jié)血流的作用。邊緣區(qū)是脾內(nèi)免疫細(xì)胞捕獲、識別、處理抗原和誘發(fā)免疫應(yīng)答的重要部位。在新鮮脾的切面上，呈灰白小點(diǎn)狀，因而得名。雄性小鼠的免疫系統(tǒng)主要有胸腺和脾臟。銅缺乏小鼠白細(xì)胞介素的水平僅為正常鼠的 40％ 50％，并發(fā)現(xiàn)在患各種感染時(shí)，血清銅升高，刺激并增加肝臟合成和釋放銅藍(lán)蛋白，有利于抵抗微生物的侵襲。近年來，銅作為畜禽飼料的添加劑，廣泛用于現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)。 在研究小鼠鉬中毒的毒性試驗(yàn)中 ， 劉鳳軍等用鉬酸銨對小鼠進(jìn)行中毒試驗(yàn)，結(jié)果表明鉬酸銨對小鼠屬于中等毒性，可造成貧血、組織臟器痛變及精子畸形等。當(dāng)機(jī)體缺銅時(shí)，多種酶的活性降低。 group V (molybdenum 800mg /, copper 50mg / L) group。 鉬銅聯(lián)合超過（ 200mg/ml） 會降低小鼠的免疫力，但補(bǔ)銅在一定程度上可以延緩小鼠免疫功能的下降。2H2O的形式） 和銅（以 CuSO4 ，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)， 動物模型建， 完成動物實(shí)驗(yàn)和檢測內(nèi)容。 畢 業(yè) 設(shè) 計(jì)（ 論 文 ）任 務(wù) 書 （指導(dǎo)教師填表） 填表時(shí)間： 20xx 年 1 月 10 日 學(xué)生姓名 弓超 專業(yè)班級 動醫(yī) 101 指導(dǎo) 教師 楊自軍 課題 類型 論文 論文題目 鉬銅聯(lián)合對小鼠免疫功能的影響 主要 研究 內(nèi)容 免疫球蛋白的含量在一定程度上可反映機(jī)體免疫功能。 進(jìn)度 計(jì)劃 ，查閱資料，寫出文獻(xiàn)綜述、完成前期準(zhǔn)備及開題工作。飲水中加入不同劑量的鉬 （以Na2MoO4 鉬 銅聯(lián)合超過（ 200mg/ml） 可對小鼠 脾臟 造成病理形態(tài)學(xué)損傷 。 group IV (molybdenum 400mg / L, copper 50mg / L)。銅是動物體必需的微量元素之一，是動物體內(nèi)許多酶（如酪氨酸酶、胺氧化酶、抗壞血酸氧化酶、亞鐵氧化酶、超氧化物歧化酶和細(xì)胞色素氧化酶）的組成成分，參與機(jī)體代謝。尤其是豫西地區(qū)的鉬儲量極大，居亞洲第一位，居世界第三位，礦區(qū)周圍環(huán)境中的鉬含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他地區(qū)，對周圍人畜健康已 構(gòu)成潛在威脅 。 銅 銅是機(jī)體必需微量元素，參與動物體內(nèi)蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物和維生素等營養(yǎng)物質(zhì)的代謝，提高飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，也是體內(nèi)多種酶的組成成分，對維護(hù)動物正常生理機(jī)能至關(guān)重要 [6]。銅缺乏也使 T細(xì)胞減少，淋巴細(xì)胞對抗原反應(yīng)的能力減退 [8]。這個(gè)系統(tǒng)由免疫器官（骨髓、脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾、胸腺等）、免疫細(xì)胞（淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、血小板，以及免疫分子 [11]。 (2) 白髓 由密集的淋巴組織環(huán)繞動脈而成，包括脾小結(jié)和動脈周圍淋巴鞘。中央動脈分支而成的一些毛細(xì)血管，其末端在白髓與邊緣區(qū)之間膨大形成邊緣竇，它是血液和淋巴細(xì)胞進(jìn)入脾內(nèi)的重要通道。鞘結(jié)構(gòu)有時(shí)很緊密，此時(shí)濾過作用很低；有時(shí)呈松散海綿狀，鞘內(nèi)充滿血漿和血細(xì)胞，此時(shí)濾過作用較強(qiáng)。 (2) 濾血 脾內(nèi)含有大量的巨噬細(xì)胞，可吞噬清除血液中的病原體和衰老的血細(xì)胞。 主要試劑 化學(xué)藥品 鉬用鉬酸鈉（ Na2MoO4178。 按小 6 白鼠飼養(yǎng)管理?xiàng)l件要求進(jìn)行管理，按時(shí)清理籠具和打掃鼠舍衛(wèi)生，對小鼠的體況表現(xiàn)等做好試驗(yàn)記錄。固定后加入 70 %酒精中洗去多聚甲醛。 石蠟塊的整修 整修時(shí)將上下左右多余的石蠟修掉，使石蠟塊上下兩面成平等的面，將組織四周的蠟層遺留大于 2 mm。 HE 染色流程圖： 欲染切片 ? 二甲苯Ⅰ ? 二甲苯Ⅱ ? 二甲苯 :100 %酒精（ 1:1） 15 min 15 min 1 min ? 90 %酒精 ?95 %酒精Ⅱ ?95 %酒精Ⅰ ?100 %酒精Ⅱ ?100 %酒精Ⅰ 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min ? 80 %酒精 ? 70 %酒精 ? 50 %酒精 ? 蒸餾水 ? 蘇木精 ? HCl 酒精 2 min 2 min 2 min 2min 3min 10 s ? 伊紅染色 ?90 %酒精 ?80 %酒精 ?70 %酒精 ?50 %酒精 ?自來水 15s 2 min 2 min 2 min 2 min 5 min 95 %酒精Ⅰ ? 95 %酒精Ⅱ ? 100 %酒精Ⅰ ? 100 %酒精Ⅱ ? 二甲苯Ⅰ 3 min 3 min 3 min 3 min 10 min ? 顯微鏡觀察 ? 中性樹膠、封片 ? 二甲苯Ⅱ 10 min 酶聯(lián)免疫分析 ? 8 IgG酶聯(lián)免疫分析 樣本處理及要求： 血清：室溫血液自然凝固 1020h，離心 20h 左右（ 20xx3000r/min）。 4 配液：將 30（ 48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30（ 48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。 計(jì)算： 9 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙 上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，將樣品的 OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。 ????????????????????????????表 ?????小鼠脾臟重量變化 ???????????（ ??mg/100) Change in the amount of mouse