掌握層析chromatography的概念(存儲版)
【正文】 MW的關(guān)系 對同一類型的化合物 ,洗脫特性與組分的分子量有關(guān) ,流過凝膠柱時 ,按分子量 (MW)大小順序流出 ,MW大的走在前面 ,Ve與 MW的關(guān)系可用下式表示 : Ve = K1 K2lgMW K1 K2 為常數(shù) , MW為分子量 三 .凝膠層析的特點 （一）優(yōu)點 。 ? Ｋｄ可通過實驗求得 。 小分子 由于擴散作用進入凝膠顆粒內(nèi)部而 被滯留 ,大分子 被排阻在凝膠顆粒外面 ,在顆粒之間 迅速通過 。 反之 ,K值相差較小 ,不易 把混合物中的生物物質(zhì) 分離 。 分配系數(shù) 是一種物質(zhì)在兩種特定相中分配 ，在 特定的溫度時 這個系數(shù)的值是一個 常數(shù) ， 即 : 溶質(zhì)在固定相中的濃度 Cs K= ———————————— = —— 溶質(zhì)在流動相中的濃度 Cm 有效分配系數(shù) ：定義為化合物在一個相的總量除以另一個相中的總量。 ?.分配層析 (partition chromatography ) 利用不同組分在流動相和固定相中的 分配系數(shù) 不同而進行分離的方法 。 色譜歷史 古羅馬人分析混合染料（類似輻射紙色譜） 1903（ 1906） 年 ， Michael Tswett提出 色譜法 1931年 ， Kuhn采用柱色譜分離了類胡蘿卜素 1941年 ， Martin和 Synge提出分配色譜法 1944年 ， Martin等又提出紙色譜法 1952年 ， Martin和 James發(fā)明了氣液色譜法 1955年 ， 第一臺商品氣相色譜問世 ， 標志著現(xiàn)代色譜分析的建立 1956年 ， Stahl系統(tǒng)研究了薄層色譜法 (TLC) 1958年 ， Stein和 Moore研制出氨基酸分析儀 ，確定了核糖核酸的分子結(jié)構(gòu) 1967年 ， Horvvath和 Huber等研制了高效液相色譜 (highperformance liquid chromatography,HPLC)儀 1975年， Small等提出離子色譜 20世紀 80年代 ， 超臨界色譜 20世紀 90年代 ， 毛細管電泳 （ 1809年 Re?ss第一次電泳實驗 ） 21世紀 ， 聯(lián)用技術(shù) 、 大分子色譜分離 、 制備色譜可望取得更大的發(fā)展 層析法進行時有兩個相 ， 一個相稱為 固定相 (Stationary phase )， 另一相稱為 流動相 (Mobile phase )。 ?.親和層析 （ affinity chromatography） 利用生物大分子之間特有 親和力的不同 進分離純化的方法 。在分配層析中 ,K為分配系數(shù) 。 凝膠層析 Gel Chromatography 一、定義 凝膠層析 … 是按照 被分離物質(zhì)分子大小 ,經(jīng)過具有一定孔徑的多孔物質(zhì)進行分離的一種方法 。 ? 洗脫體積 （ Ve） … 即欲分離物質(zhì)通過層析 ? 柱洗脫下來所需洗脫液 ? 的總體積 。Wr求得 （ g為干凝膠重 ,單位為克 ,Wr為凝膠的吸水量以 ml/g表示 ） 。 ,重復(fù)性好 .如果按比例擴大柱 的體積
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