植物組織培養(yǎng)實驗新(存儲版)
【正文】 水 硝酸銀 氯化汞（升汞） 抗菌素 910 2 1012 12 1 –1 450ppm 530 530 515 210 530 215 3060 易 易 最易 易 較難 較難 中 很好 很好 好 很好 好 最好 較好 ? 要根據(jù)植物材料對滅菌劑的敏感性來選用不同的藥劑，確定適宜的處理時間和水洗的次數(shù)。 ? 7. 高壓滅菌后取出。 植物組織培養(yǎng) Ⅰ —— 培養(yǎng)基的制備 ? （一）儲備液的配置與保存 將配方中的藥品一次稱量供一段時間使用，即配一些濃溶液，用時稀釋，這種濃溶液就是儲備液或母液。 用量一般在 410g/l之間。 ? （三）鐵鹽 現(xiàn)在培養(yǎng)基中幾乎都采用 Fe ? （ 3）玻璃器皿及耐熱用具等可采用干熱滅菌 即利用烘箱加熱到 160180℃ 的溫度來殺滅微生物。 無菌的范疇： 經(jīng)過高溫灼燒或蒸煮過后的物體，經(jīng)其他物理的或化學(xué)滅菌方法處理過后的物體，是無菌的。 植物組織培養(yǎng) 陳 勇 ? 一、培養(yǎng)基的成分及作用 ? 二、培養(yǎng)基的制備 ? 概念：本世紀(jì)初開始，以植物生理學(xué)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的一項技術(shù)。 ? 2. 滅菌 有菌的范疇： 凡是暴露在空氣中的物體，曾經(jīng)接觸過自然水源的物體，至少它的表面，毫無例外都是有菌的。 過濾滅菌的原理：溶液通過濾膜后，細(xì)菌的細(xì)胞和孢子等因大于濾膜孔徑而被阻。 微量元素的生理作用主要在酶的催化功能和細(xì)胞分化、維持細(xì)胞的完整機(jī)能等方面。 ? （六）瓊脂 瓊脂是最好的固化劑，本身并不提供任何營養(yǎng)。 ? （九）其它成分 較常見的有活性炭、抗生素、抗氧化劑、誘變劑、生長抑制劑、促進(jìn)細(xì)胞分裂和胚狀體同步發(fā)生的藥劑等。 ? 6. 包牛皮紙蓋并用橡皮筋綁好。 第二步：用洗衣粉水或肥皂 水浸洗并攪動。（注：沒有特別情況，盡量不要下工作臺） 用 70－ 75％的酒精拭擦臺面并消毒雙手。 用酒精擦洗工作臺和手。 （ 6）工作中不能面向操作區(qū)講話或咳嗽，以免唾沫把細(xì)菌或支原體帶入工作臺面發(fā)生污染。 （ 3）為拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央。金屬器械不能過度灼燒，以防退火。 物品因素 器皿和用具 培養(yǎng)皿：洗 → 熱壓 玻璃器皿：洗 → 干熱（干熱箱）或晾干 接種用具：用 CCL4布擦 → 濕布擦 → 泡 75%~95%酒精 → 燒 培養(yǎng)基：濕熱 培養(yǎng)材料 外部細(xì)菌：用水沖洗 → 化學(xué)藥劑處理 內(nèi)部細(xì)菌 莖尖培養(yǎng) 加抗生素：青霉素、利福平 操作的空氣：洗刷地板 95%酒精擦超凈工作臺 用化學(xué)試劑薰蒸 污染來源 無菌操作技術(shù) 實驗器具和材料的準(zhǔn)備 用 75%的酒精擦拭超凈工作臺，然后室內(nèi)及超凈工作臺用紫外燈殺菌 20min30min。 配置 1升培養(yǎng)基分工： ? 稱重： 1 瓊脂 810克； 2 蔗糖 30克； 3 肌醇 100毫克。 ? 2. 加入各種母液 (如大量元素 100ml，微量元素、有機(jī)物、鐵鹽各 10ml），按需要加入植物激素（如 20ml、 6BA 5ml）。 ? 脫分化：使已分化了的停止分裂的細(xì)胞失去分化特性，回復(fù)到未分化的幼齡狀態(tài)，恢復(fù)細(xì)
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