【正文】 Lpbs 配置病毒液，完成后再加入適量的石英砂（有利于在接種的時(shí)候損傷葉片，從而更好的使煙草葉片感染 TMV），完成后將病毒液放入冰箱保存。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加 ， 4℃過夜。 4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的 TMB底物溶液 ， 37℃10～ 30 分鐘。 活性測(cè)定：取出各個(gè)培養(yǎng)基中的對(duì)應(yīng)菌液，以半葉枯斑法，采用健康，長勢(shì)基本一樣的心葉煙做活性測(cè)定。代替原培養(yǎng)基中的 %硝酸鉀，制作培養(yǎng)基，通過高溫滅菌，冷卻至常溫，并接種 F02菌株； F07 菌株 2種菌株在搖床（ 28℃， 180rpm）中培養(yǎng)七天。 果 果糖 。 結(jié)果及分析 ph 重復(fù) 2菌株 平均抑制率 % 重復(fù) 1 重復(fù) 2 重復(fù) 3 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 22 27 19 34 41 17 19 25 24 20 15 32 53 21 37 43 24 49 51 49 26 39 33 10 28 64 16 38 58 52 33 41 20 25 28 11 14 19 26 19 ph 重復(fù) 7菌株 平均抑制率 % 重復(fù) 1 重復(fù) 2 重復(fù) 3 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 12 17 29 24 31 23 21 28 25 26 31 49 37 29 50 42 18 30 40 40 28 39 36 20 32 38 13 27 52 42 7 11 36 41 48 15 35 44 20 24 在對(duì)培養(yǎng)條件 pH 優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，通過所得菌液對(duì)煙草 TMV病毒活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，在pH 為 時(shí) ，抗煙草 TMV病毒活性最高 。 發(fā)酵條件為培養(yǎng)基初始 pH為 , 28 ℃ 培養(yǎng) , 120 h左右抑菌物質(zhì)產(chǎn)量達(dá)最高峰 。 展望 鏈霉菌在生物防治和環(huán)境保護(hù)領(lǐng) 域具有重大應(yīng)用前景，是許多病原微生物的生防因子，也是目前研究應(yīng)用廣泛的生防菌。許多學(xué)者的研究表明，使用幾種拮抗菌的混合物可以獲得良好的病害防治效果 ，多菌復(fù)配可以拓寬鏈霉菌使用范圍，防治多種病原 菌；可以增強(qiáng)其有效性，減少使用頻率，可結(jié)合不同微生物的防治優(yōu)勢(shì)，提高生防效果。建立優(yōu)化的發(fā)酵 、增殖生產(chǎn)工藝技術(shù)，提高有效活性物質(zhì)的生產(chǎn)率。在培養(yǎng)條件 pH篩選中，選取 、 、 、 。 這些物質(zhì)一般在較低濃度時(shí)對(duì)細(xì)胞的生長和產(chǎn)物合成有促進(jìn)作用 , 而在高濃度時(shí)常表現(xiàn)出顯著的抑制作用 。 結(jié)果及分析 溫度 重復(fù) 2菌株 平均抑制率 % 重復(fù) 1 重復(fù) 2 重復(fù) 3 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 26℃ 39 48 19 23 29 21 18 24 25 22 28℃ 30 45 33 21 39 46 6 18 67 49 30℃ 11 24 54 18 25 28 32 45 29 37 32℃ 29 42 31 17 24 29 9 13 31 30 溫度 重復(fù) 7菌株 平均抑制率 % 重復(fù) 1 重復(fù) 2 重復(fù) 3 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 26℃ 22 32 31 41 52 21 30 39 23 25 28℃ 12 21 43 19 32 41 17 28 39 41 30℃ 8 16 50 33 48 31 24 39 38 40 32℃ 18 30 40 22 31 29 25 38 34 34 在對(duì)培養(yǎng)條件溫度優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，通過所得菌液對(duì)煙草 TMV病毒活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，在溫度為 28℃ 時(shí) ，抗煙草 TMV病毒活性最高 pH 的優(yōu)化： 菌株培養(yǎng)基： 利用最優(yōu)碳氮源 （碳源 — 小米粉；氮源 — 酪蛋白胨） 組合制作培養(yǎng)基，分別用 ph 計(jì)將培養(yǎng)基的 ph 調(diào)至 ph6， ph7， ph8， ph9四個(gè)不同的 pH 值， 121℃高溫高壓滅菌 30分鐘，冷卻至室溫后，分別接種 F01（ 2， 7，） 2 種菌種，然后 28℃、 180rpm 搖床培養(yǎng) 7 天。 碳氮源組合表 碳源 氮源 果糖 淀粉 小米粉 玉米粉 硝酸鉀 果糖 /硝酸鉀 淀粉 /硝酸鉀 小米粉 /硝酸鉀 玉米粉 /硝酸鉀 大豆蛋白胨 果糖 /大豆蛋白胨 淀粉 /大豆蛋白胨 小米粉 /大豆蛋白胨 玉米粉 /大豆蛋白胨 酪蛋白胨 果糖 /酪蛋白胨 淀粉 /酪蛋白胨 小米粉 /酪蛋白胨 玉米粉 /酪蛋白胨 活性測(cè)定：取出各個(gè)培養(yǎng)基中的對(duì)應(yīng)菌液，以半葉枯斑法，采用健康，長勢(shì)基本一樣的心葉煙做活性測(cè)定。 結(jié)果及分析 單糖 重復(fù) 2菌株 平均抑制率 % 重復(fù) 1 重復(fù) 2 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 淀粉 5 6 17 52 53 2 玉米粉 2 5 60 20 24 17 小米粉 5 11 55 6 9 33 44 大米粉 5 5 0 13 18 28 28 黃豆粉 23 26 12 17 19 11 麥芽糖 28 37 24 24 30 20 22 甘露糖 12 21 43 15 26 42 42 半乳糖 14 31 55 10 25 60 57 葡萄糖 29 36 19 16 14 06 12 果 糖 8 19 58 12 27 56 57 單糖 重復(fù) 7菌株 平均抑制率 % 重復(fù) 1 重復(fù) 2 左 右 抑制率 % 左 右 抑制率 % 淀粉 8 9 11 11 33 75 43 玉米粉 9 14 36 26 37 30 33 小米粉 17 21 19 3 5 40 30 大米粉 6 8 25 27 42 36 黃豆粉 10 17 41 15 20 25 33 麥芽糖 7 8 13 8 5 0 13 甘露糖 6 7 14 9 14 36 25 半乳糖 4 15 73 7 9 22 47 葡萄糖 22 31 29 8 19 58 43 果 糖 5 9 44 6 16 63 53 通過對(duì)十種碳源的實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)分析可得較優(yōu)碳源四種：果糖，淀粉，小米粉，玉米粉。 半葉枯斑法： 挑選健康且長勢(shì)一致的心葉煙， 將事先提取的 TMV病毒液混勻，并取出適量病毒液，采用摩擦接種的方法，將 TMV 病毒液接種到心葉煙的葉片上，由于接種損傷葉片，因此接種后葉片會(huì)有短暫的萎焉現(xiàn)象，將其放置34 小時(shí)，即待葉片基本恢復(fù)正常狀態(tài)，用毛筆將菌液均勻的涂在接種 TMV 病毒葉片的左半部分，每種菌液設(shè)置重復(fù) 23 次，菌液涂抹完成，做好標(biāo)簽，涂上菌液后 45 天統(tǒng)計(jì)結(jié)果，分別統(tǒng)計(jì)葉片左右的病斑數(shù)，并算出抑制率，可得出菌液的效果，通過活性得較優(yōu)碳源，氮源組分。 3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體 (經(jīng)滴定后的稀釋度 )。比較常用的是 ELISA 雙抗體夾心法及 ELISA 間接法。 培養(yǎng)基 放線菌培養(yǎng)基 (高氏 1 號(hào)培養(yǎng)基 )： 淀粉（ 2g） KNO3() K2HPO4 () () NaCl () () 水 100mL 實(shí)驗(yàn)方法 菌株培養(yǎng)方法：以高氏一號(hào)培養(yǎng)基為菌株提