【正文】 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 99 三 、 影響抗體產(chǎn)生的因素 1. 抗原方面 A. 抗原的性質(zhì) B. 抗原的物理狀態(tài) C. 抗原用量 、 接種次數(shù)與時(shí)間間隔 D. 接種途徑 2. 機(jī)體方面 A. 遺傳因素 幼齡 、 青壯年 、 老齡動(dòng)物等 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 96 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 97 二 、 抗體的免疫學(xué)功能 抗體在體內(nèi)可發(fā)揮多種免疫功能 。 初次應(yīng)答產(chǎn)生的抗體總量較低，維持時(shí)間也較短。 CTL溶解靶細(xì)胞主要由其釋放的兩種物質(zhì)參與 ， 一是穿孔素 ， 這是導(dǎo)致靶細(xì)胞溶解的重要介質(zhì)；二是 淋巴毒素 (LT、 TNFβ)， 它可與靶細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合 ，誘導(dǎo)靶細(xì)胞自殺 。 1. 致敏階段 又稱 感應(yīng)階段 ， 是抗原物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi) ，抗原遞呈細(xì)胞 對(duì)其 識(shí)別 、 捕獲 、 加工處理和遞呈 ，以及抗原特異性 淋巴細(xì)胞 (T、 B細(xì)胞 )對(duì)抗原的識(shí)別階段 。 除參與機(jī)體的多種免疫反應(yīng)外 ， 有些細(xì)胞因子還參與炎癥 、 發(fā)熱等 ， 甚至影響某些生理活動(dòng) 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 84 一、種類與命名 細(xì)胞因子的種類繁多，具體包括干擾素 (IFNα、 β、 γ)、 白細(xì)胞介素 (IL 114)、 腫瘤壞死因子 (TNFα、 β)、 集落刺激因子 (CSF)等四大系列十幾種。 肥大細(xì)胞 存在于周圍淋巴組織 、 皮膚的結(jié)締組織 ， 特別是在小血管周圍 、 脂肪組織和小腸黏膜下組織等中 。 粒細(xì)胞由于有分葉狀的細(xì)胞核 ， 又稱多形核白細(xì)胞 。只有遺傳性完全相同的動(dòng)物可以互相移植不引起排斥反應(yīng)。 巨噬細(xì)胞可在抗體存在下發(fā)揮 ADCC作用 。 NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用是廣譜的 ， 因有 免疫監(jiān)視 作用 。 K細(xì)胞殺傷的靶細(xì)胞包括 病毒感染細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、 移植物中的 異體細(xì)胞 及 較大的病原體 (如寄生蟲(chóng) )等，故 K細(xì)胞在抗腫瘤免疫和移植物排斥反應(yīng)、清除自身的衰老細(xì)胞等方面有一定意義。發(fā)揮體液免疫功能。 如單核吞噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞等 。 如消化道 、 呼吸道和尿生殖道黏膜下層的淋巴組織 。 脾臟的免疫功能： （ 1）血液濾過(guò)作用 脾臟中的巨噬細(xì)胞等可吞噬清除混入血液的細(xì)菌等異物和自身衰老傷殘的血細(xì)胞等廢物。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 67 雞無(wú)淋巴結(jié) ，但淋巴組織廣泛分布于體內(nèi)，有的為彌散性；有的為淋巴集結(jié)，如盲腸扁桃體；有的呈小結(jié)狀等，它們?cè)诳乖碳ず蠖寄苄纬缮l(fā)中心。 接觸抗原刺激后 ， B細(xì)胞分裂增殖形成 生發(fā)中心 ， 內(nèi)含不同分化階段的 B細(xì)胞和漿細(xì)胞 。 胚胎后期或初孵出的雛禽切除腔上囊 ， 則體液免疫應(yīng)答受到抑制 ， 漿細(xì)胞減少或消失 ， 接受抗原刺激后不能產(chǎn)生抗體 ， 但切除腔上囊對(duì)細(xì)胞免疫則影響很小 ， 被切除的雛禽仍能排斥皮膚移植 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 62 胸腺的免疫功能： (1) T細(xì)胞成熟的場(chǎng)所 骨髓中的前 T細(xì)胞隨血流進(jìn)入胸腺 ， 先后在皮質(zhì)和髓質(zhì) ， 分化增殖為成熟的具有不同功能的 T細(xì)胞亞群 。 一部分淋巴干細(xì)胞分化為 T細(xì)胞的前體細(xì)胞 ， 隨血流 進(jìn)入胸腺 后 ， 分化為成熟的淋巴細(xì)胞稱為 胸腺依賴性淋巴細(xì)胞 ， 簡(jiǎn)稱 T細(xì)胞 ， 參與 細(xì)胞免疫 。 由 免疫器官 、 免疫細(xì)胞 組成 。 細(xì)菌總論 共七章，介紹細(xì)菌的形態(tài)、構(gòu)造、生理，消毒與滅菌，細(xì)菌生態(tài)、致病機(jī)理、遺傳變異，細(xì)菌分類與命名等。 在胚胎時(shí)期 ， 人為地引進(jìn)異體抗原 ， 也能消除與該抗原相對(duì)應(yīng)的淋巴細(xì)胞克隆 ， 動(dòng)物出生后 ， 對(duì)此種抗原即不產(chǎn)生免疫反應(yīng) ，形成人工免疫耐受 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 47 二 、 克隆選擇學(xué)說(shuō)對(duì)幾個(gè)問(wèn)題的解釋 (一 )對(duì)抗體產(chǎn)生多樣性的解釋 動(dòng)物出生以后 ，機(jī)體便已具有產(chǎn)生各種各樣抗體的免疫活性細(xì)胞 ，體內(nèi)有眾多細(xì)胞克隆可足夠抗原選擇 。 免疫抗體 指自然感染 ， 人工免疫動(dòng)物所產(chǎn)生的抗體 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 42 (8) 單克隆抗體的生產(chǎn) 獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞克隆后 ， 即可用于生產(chǎn)單克隆抗體 。 靜置 90s， 逐漸加入 HAT培養(yǎng)基 ， 分于加有飼養(yǎng)細(xì)胞的 96孔培養(yǎng)板孔中 ， 置 5％ 10％ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 。 McAb優(yōu)點(diǎn) 與多克隆抗體比較 ， McAb具有無(wú)可比擬的優(yōu)越性 ， 具有 高特異性 、 高純度 、 均質(zhì)性好 、 親和力不變 、 重復(fù)性強(qiáng) 、 效價(jià)高 、 成本低 、并可大量生產(chǎn) 等優(yōu)點(diǎn) 。 此外 IgD與免疫記憶與某些過(guò)敏反應(yīng)有關(guān) 。 在傳染病預(yù)防中 ， 經(jīng) 滴鼻 、 點(diǎn)眼 、 飲水及噴霧 途徑免疫 ， 均可產(chǎn)生分泌型 IgA而建立相應(yīng)的粘膜免疫力 。 產(chǎn)生與分布 IgM主要由脾臟和淋巴結(jié)中 B細(xì)胞產(chǎn)生 ， 只分布于 血液 中 ， 僅占血清 lg的 10％ 左右 。 獨(dú)特位 獨(dú)特型由 Ig可變區(qū)若干個(gè)抗原決定簇所組成 ， 它們被稱為 獨(dú)特位 。 分類分型 Ig類的區(qū)分是依據(jù)其重鏈 C區(qū)的理化特性及抗原性 的差異 ， Ig可分為IgG、 IgM、 IgA、IgE和 IgD 5大類及其亞型 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 26 連接鏈 又稱 J 鏈 ， 在 Ig中 ， IgM是五聚體 ， 分泌型的 IgA是二聚體 ， 這些單體之間就是依靠 J 鏈 連接起來(lái)的 。 其中有兩個(gè)相同的片段 ， 可與抗原特異性結(jié)合 ， 稱為 抗原結(jié)合片段 （ Fab） ；另一個(gè)片段可形成蛋白結(jié)晶 ， 稱為 Fc片段 (Fc) 。 輕鏈 又稱 L鏈 ， 兩條相同的輕鏈其羧基端 (C端 )靠二硫鍵分別與兩條重鏈連接 。 依據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗原性差異 ， Ig可分為 IgG、 IgM、 IgA、 IgE和 1gD五類 。如 囊膜抗原 、 衣殼抗原 、 可溶性抗原 和 核蛋白抗原 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 15 菌體抗原 又稱 O抗原 ，是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁抗原，其化學(xué)本質(zhì)為脂多糖的多糖側(cè)鏈。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 13 五 、 抗原的分類 （ 一 ） 抗原分類 按性質(zhì)分 完全抗原 、 半抗原 等 。 抗原價(jià)特異性 根據(jù)決定簇特異性的不同 ， 又有 單特異性決定簇 和 多特異性決定簇 之分 。 可溶性抗原分子聚合后或吸附在顆粒表面可增強(qiáng)其免疫原性 。微生物、異種組織、細(xì)胞及蛋白質(zhì)均是良好的抗原。 免疫原性 （ 抗原作用 ） 指能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞的特性 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 6 2. 特異性 機(jī)體的免疫應(yīng)答和免疫力具有高度的特異性（針對(duì)性）。 細(xì)菌各論 共十二章，介紹各屬重要病原細(xì)菌的形態(tài)、生化特性、致病性、微生物學(xué)診斷和免疫防治等。 真菌 共二章，介紹真菌的分類、形態(tài)、生化及致病特性，真菌病的診斷與防治等。 3. 免疫記憶 機(jī)體受抗原刺激產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞外 ， 也形成了免疫記憶細(xì)胞 ， 對(duì)再次接觸的相同抗原物質(zhì)可產(chǎn)生更快的免疫應(yīng)答 。 反應(yīng)原性 （ 抗原反應(yīng) ） 指抗原與相應(yīng)的抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)的特性 。通常動(dòng)物親緣關(guān)系相距越遠(yuǎn)，種系差異越大，免疫原性越好。 5. 完整性 所以抗原物質(zhì)通常要通過(guò)非消化道途徑以完整分子狀態(tài)進(jìn)入體內(nèi) ， 才能保持抗原性 。 前者只有一種特異決定簇 ， 后者則含有兩種以上不同特異性的決定簇 。 按來(lái)源分 異種抗原 與免疫動(dòng)物不同種屬的抗原 ， 如微生物抗原 ， 異種動(dòng)物紅細(xì)胞 ， 異種動(dòng)物蛋白 。 鞭毛抗原 又稱 H抗原 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 16 囊膜抗原（ V抗原） 有囊膜病毒，抗原特異性主要是囊膜上的纖突所決定的。 2. 抗體 (antibody Ab) 抗體 動(dòng)物機(jī)體受到抗原物質(zhì)刺激后 ， 由 B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞產(chǎn)生的 ， 能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的 Ig， 這類 Ig稱為 抗體 。 輕鏈從 N端開(kāi)始最初的 109個(gè)氨基酸的排列順序及結(jié)構(gòu)隨抗體分子的特異性 （ 與抗原對(duì)應(yīng) ） 變化而有差異 ， 稱為輕鏈的 可變區(qū) (VL)， 其余的氨基酸比較穩(wěn)定 ， 稱為恒定區(qū) (CL)。 IgG抗體分子可被 胃蛋白酶 消化成兩個(gè)大小不同的片段 ， 一個(gè)是具有雙價(jià)抗體活性F(ab’)2片段 ， 小片段類似于 Fc， 稱為 pFc’片段 ， 后者無(wú)任何生物學(xué)活性 。 J 鏈?zhǔn)且粭l多肽鏈 ， 內(nèi)含 10％ 糖成分 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 28 2. Ig的抗原性 Ig是蛋白質(zhì) ， 因此一種動(dòng)物的 Ig對(duì)另一種動(dòng)物而言是良好的抗原 。 獨(dú)特型在異種 、 同種異體乃至同一個(gè)體內(nèi)均可刺激產(chǎn)生相應(yīng)的抗體 ，稱為 抗獨(dú)特型抗體 。IgM在體內(nèi)產(chǎn)生最早 ， 在抗感染免疫的早期起著十分重要的作用 。 IgA功能 具有 抗菌 、 抗病毒 、 中和毒素 等免疫活性 ， 雙體 IgA具有重要的 局部粘膜免疫功能 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 34 五 、 抗體的制備 （ 一 ） 人工制備抗體的種類 1. 多克隆抗體 (PcAb) 采用傳統(tǒng)的免疫方法 ， 將抗原物質(zhì)經(jīng)不同途徑進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi) ， 經(jīng)免疫后 ， 分離出血清 ， 由此獲得的抗血清即為 多克隆抗體 。 （ 二 ） B細(xì)胞雜交瘤株建立與 McAb生產(chǎn)技術(shù) 基本過(guò)程 B細(xì)胞的制備 、 骨髓瘤細(xì)胞的制備 細(xì)胞融合 檢測(cè)抗體 雜交瘤細(xì)胞的克隆化 細(xì)胞株凍存或單克隆抗體的生產(chǎn) 。5d后更換一半 HAT培養(yǎng)基 ， 再 5d后改用 HT培養(yǎng)基 ，再經(jīng) 5d后用完全 DMEM培養(yǎng)基 。 可采用的方法有： 可 將雜交瘤細(xì)胞注入小鼠腹腔 ， 瘤細(xì)胞可在小鼠腹腔中無(wú)限繁殖 ， 導(dǎo)致腹水產(chǎn)生 ， 腹水可獲得 520mg/ml的單克隆抗體 。 Ig的類型分 IgG、 IgM、 1gA、 IgE、 IgD抗體。 不管何種抗原進(jìn)入體內(nèi) ， 均有相應(yīng)的克隆即被選出 ， 進(jìn)而分化增殖 ， 產(chǎn)生抗體 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 49 克隆選擇學(xué)說(shuō)對(duì)以上問(wèn)題都進(jìn)行了比較滿意的解釋 ， 因此該學(xué)說(shuō)為廣大免疫學(xué)者所接受 ， 對(duì)現(xiàn)代免疫學(xué)的發(fā)展起到了極大的推動(dòng)作用 。 免疫基礎(chǔ) 共七章，介紹抗原抗體，免疫系統(tǒng)，抗感染免疫，變態(tài)反應(yīng)，免疫調(diào)節(jié)，免疫技術(shù)及應(yīng)用等。 免疫器官 是免疫細(xì)胞發(fā)生 、 分化 、 成熟 、 定居和增殖以及產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)的場(chǎng)所 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 60 另一部分淋巴干細(xì)胞分化為 B細(xì)胞的前體細(xì)胞 ， 隨血流進(jìn)入 腔上囊 （ 鳥(niǎo)類 ） 或 骨髓 （ 哺乳動(dòng)物 ） 發(fā)育為成熟的淋巴細(xì)胞稱 囊依賴性淋巴細(xì)胞 ， 簡(jiǎn)稱 B細(xì)胞 ， 參與 體液免疫 。 成熟的 T細(xì)胞經(jīng)血流輸至全身 ， 參與 細(xì)胞免疫 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 64 某些病毒感染 (如傳染性囊病 )及某些化學(xué)藥物 (如注射睪丸酮 )等均能使囊萎縮 ， 如果雞場(chǎng)存在傳染性囊病則易導(dǎo)致免疫失敗 。 副皮質(zhì)區(qū) 為淋巴小結(jié)和髓質(zhì)之間 。 鵝 、 鴨等水禽類 有兩對(duì)淋巴結(jié) ， 即頸胸淋巴結(jié)和腰淋巴結(jié) 。 （ 2）滯留淋巴細(xì)胞的作用 當(dāng)抗原進(jìn)入脾臟后，淋巴細(xì)胞的滯留。 5. 骨髓 既是一級(jí)淋巴器官 ， 同時(shí)也是體內(nèi)最大的外周免疫器官 。 課件 002 獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)課件 73 一 、 T細(xì)胞和 B細(xì)胞 1. 來(lái)源 、 分布與作用 T細(xì)胞和 B細(xì)胞均來(lái)源于 骨