【正文】 但對(duì)于構(gòu)效關(guān)系顯示有可能具致癌性或致突變性，但在三項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)中為陰性的化學(xué)物，還需要改進(jìn)試驗(yàn)方法或再增加試驗(yàn)項(xiàng)目。陽性結(jié)論，即表明受試物具有致突變性，而不同致突變?cè)囼?yàn)的遺傳學(xué)終點(diǎn)不同，其所表示的含義不一。需要發(fā)展多種體內(nèi)和體外短期試驗(yàn)，用于對(duì)化學(xué)物質(zhì)致癌性進(jìn)行篩檢。 ? 2． S9 S9指經(jīng)酶誘導(dǎo)劑處理后制備的肝勻漿，再經(jīng) 9000g離心分離所得上清液，加上適當(dāng)?shù)木彌_液和輔助因子。例如， Ames試驗(yàn)的陰性對(duì)照可了解所用的細(xì)菌的自發(fā)回復(fù)突變率；證實(shí)除處理因素外無任何使回復(fù)突變率增加或減少的因素。 (his) 正向突變 回復(fù)突變 代謝活化系統(tǒng) 受試物 觀察化學(xué)毒物致突變作用的基本方法 9/15/2020 75 ? 二、常用的致突變?cè)囼?yàn) ? (二 )微核試驗(yàn) 微核 (Micronucleus)的產(chǎn)生與染色體損傷有關(guān)，是染色體或染色單體的無著絲點(diǎn)斷片或紡錘絲受損傷而丟失的整個(gè)染色體，在細(xì)胞分裂后期遺留在細(xì)胞質(zhì)中，末期之后，單獨(dú)形成一個(gè)或幾個(gè)規(guī)則的次核，包含在子細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱微核。 ? ③化學(xué)毒物的致突變性有強(qiáng)，也有弱；有的在某一檢測(cè)系統(tǒng)中是強(qiáng)致突變物，而在另一系統(tǒng)中可能是弱的致突變物。因此，將試驗(yàn)觀察到的現(xiàn)象所反映的各種事件統(tǒng)稱為 遺傳學(xué)終點(diǎn) (geic endpoint)。 ? 2． 整倍體 整倍體 (euploid)指染色體數(shù)目的異常是以染色體組為單位的增減 ， 如形成三倍體 (triploid)、 四倍體 (tetroploid)等 。 9/15/2020 50 ? 致突變作用或誘變作用 (mutagenesis) 廣義概念是外來因素，特別是化學(xué)因子引起細(xì)胞核中的遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的能力，而且此種改變可隨同細(xì)胞分裂過程而傳遞。 。 即使化學(xué)毒物以相等的時(shí)間間距恒速地吸收入血液 ， 該物質(zhì)在一定劑量范圍內(nèi)在機(jī)體的蓄積量也不呈直線無限地增加 ， 而是呈曲線形上升并有一定的極限 。一般來說，在試驗(yàn)第 2l天也可結(jié)束試驗(yàn)，因?yàn)檫@之前如果動(dòng)物沒有死亡或死亡數(shù)不足一半，說明其累積劑量已達(dá) ，即 K＞ 5。 ? 蓄積毒性試驗(yàn)是研究化學(xué)毒物基礎(chǔ)毒性的重要內(nèi)容之一 ， 目的是通過試驗(yàn)求出蓄積系數(shù) K， 了解化學(xué)毒物蓄積毒性的強(qiáng)弱 ， 并為慢性毒性試驗(yàn)及其他有關(guān)毒性試驗(yàn)的劑量選擇提供參考 。根據(jù)試驗(yàn)需要可進(jìn)一步擴(kuò)大觀察項(xiàng)目．如體溫、心電圖、腦電圖或進(jìn)行某些生化指標(biāo)測(cè)定等。 1 2 3 4 5 6 ? LgLD0 LgLD0+i LgLD0+2i LgLD0+3i LgLD0+4i ??? 急性毒性作用 9/15/2020 18 二、急性毒性試驗(yàn) ? （ 五）試驗(yàn)周期與毒效應(yīng)觀察 ? 急性毒性作用 9/15/2020 19 二、急性毒性試驗(yàn) ? （五）試驗(yàn)周期與毒效應(yīng)觀察 : ?在觀察試驗(yàn)動(dòng)物中毒癥狀的過程中，應(yīng)同時(shí)觀察體重的變化。 急性毒性作用 9/15/2020 16 二、急性毒性試驗(yàn) ? （四）染毒劑量與分組 : ? 2． 預(yù)試驗(yàn) ?① 設(shè)定以此預(yù)期值作為待測(cè)化學(xué)物的中間劑量組 ， 并在該劑量的上下各設(shè)計(jì) l一 2個(gè)劑量組作為預(yù)試驗(yàn)劑量 。 急性毒性作用 9/15/2020 11 二、急性毒性試驗(yàn) ? ： ? 大、小鼠等小動(dòng)物 每組 10只 ? 狗等大動(dòng)物 每組 6只 ? 分組原則 —— 隨機(jī)化原則 ? ： ? 經(jīng)消化道染毒時(shí)，要求試驗(yàn)前對(duì)動(dòng)物禁食 ? 大鼠、小鼠 —— 隔夜進(jìn)食；染毒后禁食 4h ? 大動(dòng)物 —— 每日上午喂食前染毒 ? 染毒后繼續(xù)禁食 2~4h，但在禁食時(shí)要保障飲水。 ? 急性皮膚毒性試驗(yàn)可選用成年大鼠 、 豚鼠或家兔 ，優(yōu)先考慮白色家兔 。 ? ② 并通過觀察動(dòng)物中毒表現(xiàn)和死亡的情況 ， 了解急性毒作用性質(zhì) 、 可能的靶器官和致死原因 ， 提供化學(xué)毒物的急性中毒資料 、 初步評(píng)價(jià)對(duì)人體產(chǎn)生損害的危險(xiǎn)性 。9/15/2020 1 第六章 化學(xué)毒物的一般毒性作用 衛(wèi)生毒理學(xué)教研室 9/15/2020 2 第六章 基礎(chǔ)毒性 ? 167。 ? ③ 探求化學(xué)毒物急性毒性的劑量 —反應(yīng)關(guān)系與中毒特征 。 而急性吸入毒性試驗(yàn)和經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)則優(yōu)先考慮大鼠 。 ? ： ? 選擇健康動(dòng)物 ? 1~2周的檢疫期 急性毒性作用 9/15/2020 12 二、急性毒性試驗(yàn) （二）試驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)環(huán)境 ? 恒定的溫度： 22177。 ?② 根據(jù)確定的劑量組進(jìn)行染毒 。 體重可以反映動(dòng)物中毒后的整體變化。 急性毒性作用 9/15/2020 21 二、急性毒性試驗(yàn) ? （ 五）試驗(yàn)周期與毒效應(yīng)觀察 ? ?重點(diǎn)觀察和記錄每只動(dòng)物死亡的時(shí)間，特別是最早出現(xiàn)死亡的時(shí)間以及各個(gè)劑量組動(dòng)物的死亡數(shù)。 蓄積作用及其評(píng)價(jià) 9/15/2020 29 ? (一 )蓄積系數(shù)法 ? 蓄積系數(shù) (accumulation coefficient)是多次染毒使半數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)效應(yīng) (或死亡 )的累積劑量[ED50(n)]與一次染毒使半數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)相同效應(yīng)(或死亡 )的劑量 [ED50(1)]的比值 ， 即： K＝ ED50(n)/ED50(1) K＝ LD50(n)/LD50(1) 蓄積作用及其評(píng)價(jià) 二、蓄積毒性試驗(yàn)方法及其評(píng)價(jià) 9/15/2020 30 1．固定劑量法： 一般常選用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法進(jìn)行染毒。使用本方法時(shí)要注意染毒期間定期 (每4天一次 )給動(dòng)物稱重，按實(shí)測(cè)體重，調(diào)整化學(xué)毒物的染毒絕對(duì)量。 這是因?yàn)榛瘜W(xué)物質(zhì)吸收進(jìn)入機(jī)體的同時(shí)體內(nèi)也發(fā)生著代謝轉(zhuǎn)化及清除的過程 (包括血中化學(xué)毒物向組織臟器的分配過程 )。 供依據(jù) 。簡(jiǎn)單地說，突變的發(fā)生及其過程即為致突變作用。在人體 ， 3n為 69條染色體 ， 4n為 92條染色體 。 9/15/2020 71 觀察化學(xué)毒物致突變作用的基本方法 ? 一、觀察項(xiàng)目的選擇 ? 遺傳學(xué)終點(diǎn)分為 5類： ?① DNA完整性的改變 (形成加合物，斷裂，交聯(lián) )； ?② DNA重排或交換； ?③ DNA堿基序列改變； ?④染色體完整性改變； ?⑤染色體分離改變。對(duì)于弱致突變物在某些系統(tǒng)中比較容易漏檢，即出現(xiàn)假陰性。 在細(xì)胞質(zhì)中微核來源有二：斷片或無著絲粒染色體在細(xì)胞分裂后期不能定向移動(dòng)，而遺留在細(xì)胞質(zhì)中；有絲分裂毒物的作用使個(gè)別染色體或帶苔絲粒的染色體環(huán)和斷片在細(xì)胞分裂后期被留在細(xì)胞質(zhì)中。 ? 2．陽性對(duì)照 是用某種已知能產(chǎn)生陽性反應(yīng)的物質(zhì)作為對(duì)照。它主要含有混合功能氧化酶 (MFO)，是國內(nèi)常規(guī)應(yīng)用于體外致突變?cè)囼?yàn)的代謝活化系統(tǒng)，其缺點(diǎn)是 S9隨實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬或器官不同而有差異；S9含有的大量親核物質(zhì)有可能影響試驗(yàn)的敏感性。 觀察化學(xué)毒物致突變作用的基本方法 9/15/2020 83 ? 三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問題 ? (四 )試驗(yàn)結(jié)果在毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)中的作用 ? 陰性結(jié)果判定條件： ? ①最高劑量應(yīng)包括受試物溶解度許可或灌胃量許可的最大劑量。如基因突變是具有導(dǎo)致遺傳性疾病的突變， DNA修復(fù)的實(shí)際后果尚不明確。對(duì)于在三項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)中為陰性，但致癌試驗(yàn)顯示有致癌效應(yīng)，又無明確的證據(jù)說明該化學(xué)物是通過非遺傳毒性機(jī)制發(fā)揮作用時(shí)，為了了解其作用方式，可再進(jìn)行改變代謝活化系統(tǒng)的體外試驗(yàn)或應(yīng)用腫瘤發(fā)生的靶器官進(jìn)行遺傳損傷試驗(yàn) (如肝臟 UDS試驗(yàn)、 DNA加合物檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因突變檢測(cè)、腫瘤相關(guān)基因的遺傳改變檢測(cè) )。對(duì)于在三項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)中為陰性的化學(xué)物，通?？烧J(rèn)為其無遺傳毒性作用。 觀察化學(xué)毒物致突變作用的基本方法 9/15/2020 84 ? 三、致突變?cè)囼?yàn)中的一些問題 ? (四 )試驗(yàn)結(jié)果在毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)中的作用 ?陽性結(jié)果應(yīng)具有劑量 — 反應(yīng)關(guān)