腫瘤的分子診斷-免費(fèi)閱讀
【正文】 下午4時(shí)10分9秒下午4時(shí)10分16:10:0924.11.17 每天都是美好的一天，新的一天開(kāi)啟。16:10:0916:10:0916:1011/17/2024 4:10:09 PM 做一枚螺絲釘，那里需要那里上。2024年11月17日星期日下午4時(shí)10分9秒16:10:0924.11.17 嚴(yán)格把控質(zhì)量關(guān)，讓生產(chǎn)更加有保障。2024年11月17日星期日4時(shí)10分9秒Sunday, November 17, 2024 相信相信得力量。16:10:0916:10:0916:10Sunday, November 17, 2024 安全在于心細(xì)，事故出在麻痹。 北京：科學(xué)出版社，1998；p185 限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析 Kressner U, et al. Br J Cancer, 1998。 16: 325 雜合雙鏈分析法 White MB, et al Genomics, 1992。,需解決的問(wèn)題如： 建立費(fèi)用低廉、結(jié)果可靠、操作方便的分子診斷技術(shù)； 建立標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)操作程序和標(biāo)準(zhǔn)化的分子診斷實(shí)驗(yàn)室，實(shí)現(xiàn)分子診斷標(biāo)準(zhǔn)化； 除了要在診斷技術(shù)方面逐步實(shí)行標(biāo)準(zhǔn)化外，對(duì)腫瘤診斷指標(biāo)也要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。,端粒的長(zhǎng)度不能作為衡量端粒酶活性的可靠標(biāo)記，而端粒酶活性表達(dá)的高低可作為惡性腫瘤發(fā)展的衡量指標(biāo)。,第五節(jié) 端粒酶與腫瘤的關(guān)系及檢測(cè),一、端粒酶與腫瘤 染色體端粒（telomere）是位于細(xì)胞染色體末端的一種有220kb串聯(lián)的短片段重復(fù)序列(TTAGGG)n及一些結(jié)合蛋白組成的特殊結(jié)構(gòu)。最常見(jiàn)的為雙核苷酸重復(fù)，即(AC)n和(TG)n。精確位點(diǎn)的RFLP分析還是發(fā)現(xiàn)新的腫瘤基因的有效研究手段。,（十）DNA序列分析（DNA sequencing） 應(yīng)用各種突變檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)到的基因突變，最后都需要用DNA序列分析才能確定突變的類型及突變的位置 。,（六）等位基因特異性寡核苷酸分析法 (allelespecific oligonucleotide ASO) 設(shè)計(jì)一段20bp左右的寡核苷酸片段，其中包含了發(fā)生突變的部位，以此為探針，與固定在膜上的經(jīng)PCR擴(kuò)增的樣品DNA雜交。 HA對(duì)一些不能用SSCP檢出的突變有互補(bǔ)作用，二者結(jié)合使用，可使突變檢出率提高近100%。,（一） PCRSSCP法 單鏈構(gòu)像多態(tài)性 (singlestrand conformational polymorphism, SSCP) 基本原理： 單鏈DNA在中性條件下會(huì)形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，這種二級(jí)結(jié)構(gòu)依賴于其堿基組成，在非變性聚丙烯酰胺凝膠上，短的單鏈DNA和RNA分子依其堿基序列不同而形成不同構(gòu)象，一個(gè)堿基的改變將影響其構(gòu)象而導(dǎo)致其在凝膠上移動(dòng)速度改變，不同的二級(jí)結(jié)構(gòu)而出現(xiàn)不同的遷移象。基因缺失與腫瘤的臨床病理及生物學(xué)行為密切相關(guān)。,注意問(wèn)題： 提取組織或細(xì)胞中的RNA，不需酶切而直接采用電泳。組織細(xì)胞分布和雜交電鏡的亞細(xì)胞 定位研究。,第一節(jié) 腫瘤基因過(guò)表達(dá)及其檢測(cè),一、基因過(guò)表達(dá)的形式 癌基因一般為單拷貝基因，有其編碼的蛋白質(zhì)，在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的一些癌基因在DNA復(fù)制過(guò)程中形成多個(gè)拷貝，形成雙微粒染色體和均染區(qū)，各種基因的擴(kuò)增常產(chǎn)生基因產(chǎn)物過(guò)表達(dá)，表現(xiàn)為RNA和蛋白質(zhì)量的增加。,Southern雜交： 一種DNA特定序列定位技術(shù)。,一、基因突變的形式 點(diǎn)突變（point mutation） 基因缺失(gene losses) 基因異位或重排 （gene translocation and rearrangment）,（一）點(diǎn)突變（point mutation） 指基因在特異位置發(fā)生一個(gè)核苷酸的改變，使相應(yīng)蛋白質(zhì)的一個(gè)氨基酸改變，繼而改變了蛋白質(zhì)的空間構(gòu)型和生物學(xué)功能。 細(xì)胞癌基因的編碼序列在DNA分子上是不連續(xù)的，由內(nèi)含子分隔，其中有些序列起到促進(jìn)子和調(diào)節(jié)基因的作用，如染色體出現(xiàn)易位、重排等改變時(shí)，可使細(xì)胞癌基因于正常的抑制子分開(kāi)而被置于活化DNA序列的控制之下，其中具有代表性的例子為Burkitt淋巴瘤。 應(yīng)用PCRSSCP檢測(cè)點(diǎn)突變已見(jiàn)報(bào)道于人類大部分的腫瘤組織或細(xì)胞，檢測(cè)的基因包括多種癌基因及抑癌基因，也是檢測(cè)抑癌基因p53突變最常用的方法。,該法檢出率很高，也是檢測(cè)片段最長(zhǎng)的方法。 該法可用于12kb的大片段進(jìn)行檢測(cè)，并能確定突變位點(diǎn)。,人類基因組中含有一些復(fù)雜序列家族，有些重復(fù)序列分散在基因組中，有些是以一系列短的重復(fù)序列排列組成高變區(qū)，其串聯(lián)重復(fù)序列拷貝數(shù)可相差很多，出現(xiàn)可變數(shù)的串聯(lián)重復(fù)，約占單倍體DNA的10%，基本上位于非編碼區(qū)，重復(fù)單位以670bp為多，重復(fù)次數(shù)約6100次，稱為數(shù)量可變的串聯(lián)重復(fù)序列（variable number of tandem repeat, VNTR）。,第四節(jié) 微衛(wèi)星不穩(wěn)定性分析,一、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與腫瘤 小衛(wèi)星DNA（minisatellite DNA），又稱VNTR。,二、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的檢測(cè) 基本方法為首先用PCR技術(shù)擴(kuò)增所需的雙核苷酸重復(fù)序列，然后用凝膠電泳分析DNA序列。端粒酶為由RNA和蛋白質(zhì)組成的一種核糖核蛋白復(fù)合物（RNP），含有端粒重復(fù)序列的模板，即以自身RNA組分為模板，復(fù)制合成端粒序列。 該法省時(shí)簡(jiǎn)便。 7: 423 Southern blot Northern blot 許良中，實(shí)用腫瘤病理方法學(xué)。 86: 6230 DNA芯片技術(shù) Yershov G, et al. Pioc Natl Acad Sci USA,1996
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