腫瘤的分子診斷-預(yù)覽頁
【正文】 腫瘤的不同發(fā)展階段，可能會(huì)涉及多種基因不同形式的突變，說明腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因參與、多步驟的復(fù)雜的生物學(xué)過程?；蛉笔c腫瘤的臨床病理及生物學(xué)行為密切相關(guān)。易位與重排易使癌基因被激活，或是抑癌基因失活，從而使細(xì)胞惡變。,（一） PCRSSCP法 單鏈構(gòu)像多態(tài)性 (singlestrand conformational polymorphism, SSCP) 基本原理： 單鏈DNA在中性條件下會(huì)形成二級結(jié)構(gòu)，這種二級結(jié)構(gòu)依賴于其堿基組成，在非變性聚丙烯酰胺凝膠上，短的單鏈DNA和RNA分子依其堿基序列不同而形成不同構(gòu)象，一個(gè)堿基的改變將影響其構(gòu)象而導(dǎo)致其在凝膠上移動(dòng)速度改變，不同的二級結(jié)構(gòu)而出現(xiàn)不同的遷移象。由于該法的簡便快速，特別適合大樣本基因突變研究的篩選工作。 HA對一些不能用SSCP檢出的突變有互補(bǔ)作用，二者結(jié)合使用，可使突變檢出率提高近100%。,（五）化學(xué)切割錯(cuò)配法 （Chemical cleavage of mismatch,CCM） 基本原理： 將待測含DNA片段與相應(yīng)的野生型DNA片段或RNA片段混合變性雜交，在異源雜合的雙鏈核酸分子中，錯(cuò)配的C能被羥胺或哌啶切割，錯(cuò)配的T能被四氧化鋨切割，經(jīng)變性凝膠電泳可確定是否存在突變。,（六）等位基因特異性寡核苷酸分析法 (allelespecific oligonucleotide ASO) 設(shè)計(jì)一段20bp左右的寡核苷酸片段，其中包含了發(fā)生突變的部位，以此為探針，與固定在膜上的經(jīng)PCR擴(kuò)增的樣品DNA雜交。,（八）RNA酶A切割法 制備RNA探針，與待測DNA或RNA片段雜交，在一定條件下，異源雙鏈核酸分子RNA ：RNA或RNA ：DNA的錯(cuò)配堿基可被RNase A切割，切割產(chǎn)物可通過變性凝膠電泳分離。,（十）DNA序列分析（DNA sequencing） 應(yīng)用各種突變檢測技術(shù)檢測到的基因突變，最后都需要用DNA序列分析才能確定突變的類型及突變的位置 。因?yàn)檫@些特異基因片段是限制性內(nèi)切酶產(chǎn)生的，在不同個(gè)體間可出現(xiàn)不同長度的限制性片段類型，故稱為限制性片段長度多態(tài)性,RFLP的研究可以觀察到同一患者的正常細(xì)胞DNA中存在二個(gè)等位基因，而腫瘤組織DNA中僅存在一個(gè)等位基因，因?yàn)槟[瘤細(xì)胞單條染色體中一個(gè)等位基因缺失，這種改變稱為雜合缺失（loss of heterozygosity, LOH）。精確位點(diǎn)的RFLP分析還是發(fā)現(xiàn)新的腫瘤基因的有效研究手段。 該方法快速、簡便、靈敏度高，以及DNA樣本用量低 。最常見的為雙核苷酸重復(fù)，即(AC)n和(TG)n。 MI可能是腫瘤細(xì)胞的一種重要分子標(biāo)志。,第五節(jié) 端粒酶與腫瘤的關(guān)系及檢測,一、端粒酶與腫瘤 染色體端粒（telomere）是位于細(xì)胞染色體末端的一種有220kb串聯(lián)的短片段重復(fù)序列(TTAGGG)n及一些結(jié)合蛋白組成的特殊結(jié)構(gòu)。,端粒序列的復(fù)制依賴于一種特殊的DNA聚合酶即端粒酶（telomerase）的作用。,端粒的長度不能作為衡量端粒酶活性的可靠標(biāo)記，而端粒酶活性表達(dá)的高低可作為惡性腫瘤發(fā)展的衡量指標(biāo)。,ELISA法 利用端粒酶在生物素標(biāo)記的引物上加入多個(gè)6核苷酸端粒重復(fù)序列，反應(yīng)產(chǎn)物用生物素標(biāo)記的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，再與鏈霉菌抗生物素蛋白包被的微量滴定板結(jié)合，與地高辛標(biāo)記的探針雜交，產(chǎn)生的有色底物用酶標(biāo)儀測量結(jié)果。,需解決的問題如： 建立費(fèi)用低廉、結(jié)果可靠、操作方便的分子診斷技術(shù)； 建立標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)操作程序和標(biāo)準(zhǔn)化的分子診斷實(shí)驗(yàn)室，實(shí)現(xiàn)分子診斷標(biāo)準(zhǔn)化； 除了要在診斷技術(shù)方面逐步實(shí)行標(biāo)準(zhǔn)化外，對腫瘤診斷指標(biāo)也要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。 51: 62 Habeebu SSM, et al. Mol Biol Med, 1990。 16: 325 雜合雙鏈分析法 White MB, et al Genomics, 1992。 91: 1873 等位基因特異性寡核苷酸分析法 Saiki RK, et al. Pioc Natl Acad Sci USA,1989。 北京：科學(xué)出版社，1998；p185 限制性酶切片段長度多態(tài)性分析 Kressner U, et al. Br J Cancer, 1998。 58: 594,樹立質(zhì)量法制觀念、提高全員質(zhì)量意識。16:10:0916:10:0916:10Sunday, November 17, 2024 安全在于心細(xì)，事故出在麻痹。2024年11月下午4時(shí)10分24.11.1716:10November 17, 2024 作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)記得牢，駕輕就熟除煩惱。2024年11月17日星期日4時(shí)10分9秒Sunday, November 17, 2024 相信相信得力量。24.11.1716:10:0916:10Nov2417Nov24 加強(qiáng)交通建設(shè)管理，確保工程建設(shè)質(zhì)量。2024年11月17日星期日下午4時(shí)10分9秒16:10:0924.11.17 嚴(yán)格把控質(zhì)量關(guān)，讓生產(chǎn)更加有保障。24.11.1724.11.1716:1016:10:0916:10:09Nov24 牢記安全之責(zé)，善謀安全之策，力務(wù)安全之實(shí)。16:10:0916:10:0916:1011/17/2024 4:10:09 PM 做一枚螺絲釘，那里需要那里上。2024年11月17日下午4時(shí)10分24.11.1724.11.17 精益求精，追求卓越，因?yàn)橄嘈哦鴤ゴ?。下?時(shí)10分9秒下午4時(shí)10分16:10:0924.11.17 每天都是美好的一天，新的
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