【正文】 用于提取傳統(tǒng)中藥厚樸中厚樸酚與和厚樸酚，有多種方法，如 堿 提酸沉法，水提取法，乙醇提取法，聚酰胺分離提取法， 堿提樹脂工藝，超臨界 CO2 萃取等。厚樸是我國特有的珍貴中藥材，對其栽培技術(shù)研究很少，為了保護(hù)和發(fā)展厚樸資源，建議要把厚樸的科學(xué)研究作為中藥資源開發(fā)工作的一項(xiàng)重要措施來抓，近期內(nèi)加強(qiáng)厚樸生產(chǎn)技術(shù)研究，加強(qiáng)厚樸種源保護(hù)和收集，加強(qiáng)以利用為主的綜合開發(fā)研究以發(fā)揮厚樸的多種經(jīng)濟(jì)效益。 4． 抽濾過后的濾液由于時(shí)間不足，有需要過夜才旋蒸的，在旋蒸前要加熱下錐形瓶，使其中由于溫度降低析出的厚樸酚重新溶解，再轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中進(jìn)行旋蒸，避免浸膏的損失。植物的許多部位都含有葉綠素，葉綠素在醇提過程中，會(huì)被大量的提取出來，使抽濾液變?yōu)榫G色干擾試驗(yàn)，并且會(huì)使實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。 xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 22 頁 浸膏得率對提取次數(shù)做趨勢圖，如圖 所示。 表 驗(yàn)證試驗(yàn)設(shè)計(jì)表 實(shí)驗(yàn)號 因素 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 A B C D 浸膏得率（ %） 1 2 3 1 2 2 2 2 1 3 3 1 2 1 3 通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得到，如預(yù)期分析的一樣， A2B2C1D3 為最優(yōu)方案， A1B2C1D3為較優(yōu)方案。各因素優(yōu)水平的確定與試驗(yàn)指標(biāo)有關(guān)，若指標(biāo)越大越好，則應(yīng)選取指標(biāo)較大的水平，即各列 Ki 中最大的那個(gè)值對應(yīng)的水平；反之，若指標(biāo)越小越好，則應(yīng)選取使指標(biāo)小的那個(gè)水平。 ki=Ki／ s，其中 s 為任一列上各水平出現(xiàn)的次數(shù)，所以 ki 表示任一列上因素取水平 i時(shí)所得試驗(yàn)結(jié)果的算術(shù)平均值。 表 因 素水平表 水平 因素 A 提取時(shí)間（ min） B 乙醇濃度（ %） C 乙醇用量（倍） D 提取次數(shù) 1 60 65 6 1 2 120 70 8 2 3 180 75 10 3 表 厚樸 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 實(shí)驗(yàn)號 因素 A B C D 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 鑒定 薄層層析過程如下，結(jié)晶品的甲醉液在硅膠 G 板上點(diǎn)樣，分別用苯 甲醇（ 27： 1）和石泊醚 乙酸乙酯（ 9： l）展開，碘液顯色。先加入 95%乙醇xml，再加 入蒸餾水至刻度線，混合均勻。并且 可為深入研究厚樸的藥理活性提供物質(zhì)基礎(chǔ)， 對于厚樸藥材有效成分的提取和進(jìn)一步深入研究具有一定的指導(dǎo)意義。一定時(shí)間后，有效成分通過分離柱降壓解析，得淡黃色膏狀物，總厚樸酚提取率為80%。結(jié)果表明此方法厚樸酚含量高，厚樸浸膏收率高，是傳統(tǒng)的工業(yè)提取方法 [18]。但受熱易破壞的成分不宜用此法，且溶劑消耗量仍大，操作亦麻煩。 （ 1） 浸漬法 浸漬法是將處理過的藥材，用適當(dāng)?shù)娜軇┰诔鼗驕責(zé)幔?6080℃ ）的情況下浸漬一溶出七種成分。生物堿是親脂性化合物，而生物堿鹽，能夠離子化，加大了極性，就變成了親水性化合物。近年來，物理方法，如色譜、逆流分溶進(jìn)展很快，縮短了對中藥有效成分研究的周期。如此則腑易通，氣乃順，血得和而諸癥愈。） h、（ 177。 4． 厚樸湯治療頸淋巴結(jié)腫大 頸淋巴結(jié)腫大，多由氣、郁、痰、火互結(jié)所致。特別是變形鏈球菌有更加顯著的抗菌作用，其抗菌活性強(qiáng)于典型的抗菌生物堿，而且 [6]。 6． 抗腫瘤作用 厚樸酚與和厚樸酚在體內(nèi)和體外均被發(fā)現(xiàn)可以抑制新生血管及腫瘤生長，并且在有效劑量范圍內(nèi)能夠被宿主很好的耐受，其作用機(jī)制是在人的內(nèi)皮細(xì)胞通過干擾血管內(nèi)皮生長因子受體 2（ VEGFR2）的磷酸化來抑制血管生成 [27,28]。 厚樸酚與和厚樸 酚具有明顯抗真菌作用。和厚樸酚具有鎮(zhèn)靜、抗焦慮作用。厚樸乙醇提取物 5 g／ kg、 15 g／ kg均有明顯鎮(zhèn)痛作用，明顯減少乙酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高，并明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳腫及角叉菜膠引起的小鼠足跖腫脹。其余生物堿類成分主要為厚樸堿（ Mcurarine），此外還有木蘭花堿（ Salicifoline）、武當(dāng)木蘭堿（ magnosprengerine）、白蘭花堿（ michelarbine）、木蘭箭毒堿（ magnocurarine）等 [12， 14]。同時(shí)他們發(fā)現(xiàn)同一厚樸株，枝皮的揮發(fā)油含量最高，枝、干、根皮依次降低；不同樹齡問，五年生與二十年生厚樸的揮發(fā)油含量較高，十年生與十五年生的含量較低。據(jù)現(xiàn)代藥理研究表明，厚樸有中樞鎮(zhèn)靜、抗痙攣及抗鏈球菌等多方面藥理作用，并證明 這些作用的有效成分為厚樸酚和 β桉油醇。 2． 顯微鑒別 厚樸橫切面為落皮層黃棕色，由外向內(nèi)分別是老的木栓層、木栓形成層、栓內(nèi)層（石細(xì)胞環(huán)）和皮層薄壁細(xì)胞及皮層石細(xì)胞；有時(shí)新周皮于栓內(nèi)層（石細(xì)胞環(huán)）發(fā)生，無老皮層。外表面灰棕色或灰褐色，粗糙，有時(shí)呈鱗片狀，較易剝落，有明顯橢圓形皮孔和縱皺紋，刮去粗皮者顯黃棕色。厚樸是木蘭屬中分布較廣、而且較原始的種類，對研究東亞和北美的植物區(qū)系及木蘭科分類有科學(xué)意義。 分布區(qū)年平均溫 1420℃ ， 1 月平均溫 39℃ ，年降水量 8001400 毫米。果期 910 月，聚合果長橢圓狀卵形，長912 厘米，直徑 厘米，心皮排列緊密，成熟時(shí)木質(zhì)，頂端有彎尖頭；種子三角狀倒卵形，外種皮紅色。 關(guān)鍵詞： 厚樸酚，提取工藝；正交試驗(yàn)法；醇提法。 （ 1 周 ） 第三部分 準(zhǔn) 備實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備，藥材，試劑，藥品 。 學(xué)生應(yīng)完成的任務(wù) （ 1）查閱文獻(xiàn)資料，撰寫綜述部分； （ 2）列出實(shí)驗(yàn)方案及所需的藥品，試劑并擬定實(shí)驗(yàn)方案； ____（ 3）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)； ____（ 4）翻譯一篇與實(shí)驗(yàn)內(nèi)容相關(guān)的英文文獻(xiàn)； ____（ 5）結(jié)果分析，撰寫論文。 本論文以 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)為工具，以浸膏得率作為質(zhì)量指標(biāo)，考察 醇法提取 厚樸中厚樸酚與和厚樸酚的提取工藝條件，著重 探討 乙醇濃度、回流時(shí)間、提取次數(shù)、乙醇用量等因素對浸膏得率的影響， 結(jié)果表明其 較優(yōu)的提取工藝條件為提取時(shí)間120min，乙醇濃度 70%， 乙醇 用量 6 倍，提取次數(shù) 3 次，浸膏得率可達(dá)到 %， 同時(shí) 借助極差分析、方差分析等實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析手段，得到 各因素的主次關(guān)系為 乙醇濃度 ﹥ 提取次數(shù) ﹥ 乙醇用量 ﹥ 提取時(shí)間 。聚合果長橢圓狀卵圓形 或圓柱狀，長 1012 厘米，直徑 厘米；蓇葖本質(zhì)，頂端有向外彎的椽；種于倒卵圓形，有鮮紅色外種皮。在土層深厚、肥沃、疏松、腐殖質(zhì)豐富、排水良好的微酸性或中性土壤上生長較好，常混生于落葉闊葉林內(nèi)，或生于常綠闊葉林緣。 5 年生以前生長較慢， 20 年生高達(dá) 15 米，胸徑達(dá) 20 厘米， 15 年開始結(jié)實(shí)， 20 年后進(jìn)入盛果期。皮孔為橢圓形皮孔，縱向排列，氣味香，味辛辣，微苦。質(zhì)硬，較易折斷，斷面纖維性。厚樸的顯微鑒別圖如圖 所示。 圖 厚樸顯微圖 1． 揮發(fā)油 厚樸樹皮揮發(fā)油主要成分為桉葉油醇及其異構(gòu)體，約占揮發(fā)油總量的 40％ 55％，其次是聚傘花素，約占揮發(fā)油總量的 10％ 20％ [2]。此外，還有厚樸木脂素 F等雙木脂素 [15]。厚樸酚提取物明顯對抗番瀉葉性小鼠腹瀉，對大 鼠膽汁流量有明顯促進(jìn)作用，表明厚樸與溫里藥一樣具有促進(jìn) 消化系統(tǒng)的作用。厚樸酚在 l100μmol／ L可以增加趨化三肽激活的大鼠中性粒細(xì)胞的超氧陰離子，在大于 10 mol／ L時(shí)可以明顯地抑制激活的中性粒細(xì)胞葡萄糖苷酸酶和溶菌酶的釋放。對冠脈結(jié)扎 4 h的大鼠， 10 10 109g／ kg各劑量的厚樸酚能顯著減少心肌梗死范圍 [5]。 Ho等人的研究表明，厚樸酚與和厚樸酚對牙周致病菌伴放線放線桿菌、牙齦卟啉菌、中問普氏茵、藤黃微球菌以及枯草芽孢桿菌的最小抑制濃度為 mg／ mL，具有良好的開發(fā)牙周保健藥物的潛力。 臨床研究 1． 厚樸防齲 齲病是一種多因素的慢性細(xì)菌性疾病，口腔內(nèi)主要致齲細(xì)菌為 變形鏈球菌，對主要致齲菌為變形鏈球菌有抑制作用的中藥，其中作用力最強(qiáng)的是厚樸。慢性咽炎突出癥狀表現(xiàn)均有咽中異物感、舌苔白膩、脈弦滑等 ， 而這些癥狀正是半夏厚樸湯的辨證要點(diǎn)。） h，術(shù)后體重下降（ 177。方中厚樸行氣導(dǎo)滯，再加理氣的延胡索、木香使之與厚樸相得益彰；白芍緩急止痛；桃仁善治下焦蓄血；失笑散活血止痛。得粗提物干燥后，用環(huán)己烷，索氏提取，提取液濃縮后放冷析出白色結(jié)晶 [16]。溶劑可分為水、親水性溶劑和親脂性有機(jī)溶劑。這一問題在復(fù)方研究中更為突出。 （ 3） 煎煮法 煎煮法是將中藥粗粉加水加熱煮沸，將中藥成分提取出來的方法。L1的堿溶液，放置 24 h，離心過濾，將濾液用乙醚萃 取 3次，水層用稀 HCl溶液調(diào)至 pH23，用乙醚再萃取 5次，合并醚液后用 2%Na2CO3洗滌并用無水乙醇 Na2SO4干燥，放置過夜，揮去醚液得結(jié)晶。將藥液過樹脂柱，用 95%、 75%乙醇先后洗脫（最后洗脫液近無色），合并洗液，濃得結(jié)晶。 厚樸酚與和厚樸酚 (honokiol)為其主要活性成分之一，它具有多種藥理作用，包括抗炎，抗心律失常，抗癲癇，抗血小板，抑制肌肉收縮和抗菌作用，此外還可以抑制氮的氧化產(chǎn)物，抑制腫瘤壞死因子 α的表達(dá)活性等。 主要試劑 95%乙醇（分析純），蒸餾水。 xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 17 頁 5.． 提取厚樸酚， 計(jì)算厚樸浸膏收率。 表 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)號 因素 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 A B C D 浸膏得率（ %） 浸膏重量 /g 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 11 K1 K2 K3 k1 k2 k3 極差 R 因素主 → 次 B D C A 結(jié)果 分析 1. 極差分析 ， 確定因素的主次順序 首先解釋表 中引入的三個(gè)符號 Ki， ki，R。 一般來說，各列的極差是不相等的，這說明各因素的水平改變對試驗(yàn)結(jié)果的影響是不相同的，極差越大，表示該列因素的數(shù)值在試驗(yàn)范圍內(nèi)的變化，會(huì)導(dǎo)致試驗(yàn)指標(biāo)在數(shù)值上更大的改變，所以極差最大的那一列，就是因素的水平對試驗(yàn)結(jié)果影響最大的因素，也就是最主要的因素。 3． 進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，作進(jìn)一步的分析 上述優(yōu)方案是通過理論分析得到，但它實(shí)際上是不是真正的優(yōu)方案還需要作進(jìn)一步的驗(yàn)證。 圖 效應(yīng)曲線圖，因素為乙醇濃度 由趨勢圖可以看出，隨乙醇濃度水平的變動(dòng)，浸膏得率在提高， 70%時(shí)最高，之后得率降低。 表 原料的目數(shù)的篩選對比試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)號 因素 目數(shù) A B C D 1 1 1 1 1 20 2 1 1 1 1 40 3 1 1 1 1 80 注 實(shí)驗(yàn)號 1 中即 20 目的提取實(shí)驗(yàn)采用 200ml 的乙醇用量，因?yàn)?120ml 的乙醇不能將藥品充 xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 23 頁 分浸泡，會(huì)產(chǎn)生糊化。 2． 由于藥材粘度大，在抽濾時(shí)，濾紙可能會(huì)破，經(jīng)過與同學(xué)的探討，發(fā)現(xiàn)解決辦法可以 在抽濾時(shí)增加濾紙層數(shù)。目前，雖厚樸栽培面積大，資源分布豐富，由于生長速度慢，樸林更新時(shí)間長，加之社會(huì)需求量大，目前市場 供應(yīng)日趨緊張，現(xiàn)狀一時(shí)難以滿足。具有高經(jīng)濟(jì)效益，小環(huán)境污染，設(shè)備易維護(hù)等優(yōu)點(diǎn)。 本 論文 采用乙醇回流提取的方法對厚樸進(jìn)行了提取和分離 ， 以 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)為工具，采用 4 因素 3 水平 9 次實(shí)驗(yàn)來對各個(gè)因素進(jìn)行研究，以浸膏得率作為質(zhì)量指標(biāo)，考察 醇法提取 厚樸中厚樸酚與和厚樸酚的提取工藝條件，著重研究乙醇濃度、回流時(shí)間、提取次數(shù)、乙醇用量等因素對浸膏得率的影響，得到其較優(yōu)的提取工藝條件為提取時(shí)間 120min，乙醇濃度 70%，乙醇用量 6 倍。藥理活性上，主要集中在厚樸酚與和厚樸酚上，而對厚樸中其它成分藥理活性的研究不夠深入，因此，應(yīng)加強(qiáng)厚樸的化學(xué)成分研究，同時(shí)對除厚樸酚與和厚樸酚外的化合物