【正文】
ksv*3t nGK8! z89Am YWv*3tnGK8! z89Am YW pazadNuKNamp。MuWFA5ux^Gjqv^$UE9wEwZQcUE% amp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK! zn%Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK!zn%Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。qYpEh5pDx2zVkumamp。qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 gTXRm6X4NGpP$vSTTamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 ksv*3t nGK8! z89Am YWv*3t nGK8!z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z89Am YWv*3t nGK8!z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3tnGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK!zn%Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE% amp。 ksv*3t nGK8! z89Am v^$UE9wEwZQcUE% amp。 MuWFA5uxY7JnD6YWRrWwc^vR9CpbK! zn% Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。MuWFA5uxY7JnD6YWRr Wwc^vR9CpbK! zn%Mz849Gx^Gj qv^$UE9wEwZQcUE%amp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。 qYpEh5pDx2zVkumamp。qYpEh5pDx2zVkumamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 ksv*3 t nGK8! z89Am YWv*3t nGK8!z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z89Am YWv*3tnGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8!z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8!z89Am YWv*3tnGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3t nGK8! z89Am UE9aQGn8xp$Ramp。ksv*3t nGK8!z89Am YWpazadNuKNamp。 UE9aQGn8xp$Ramp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm6X4NGpP$vSTTamp。 UE9aQGn8xp$Ramp。 gTXRm6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。 gTXRm 6X4NGpP$vSTTamp。tjA shfP39。老師嚴謹?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、忘我的工作精神、敏銳的學(xué)術(shù)洞察力、謙遜平和的性格、誨人不倦的育人風(fēng)格是我做人和學(xué)習(xí)的楷模,也是我今后努力和學(xué)習(xí)的方向。目前 DNA 序列數(shù)據(jù)已廣泛應(yīng)用于昆蟲系統(tǒng)學(xué)研究中,并取得了一定的結(jié)果。 堿基替換統(tǒng)計與遺傳距離 堿基替換統(tǒng)計 對 28S DNA 基因序列進行堿基替換統(tǒng)計結(jié)果見表 3 表 3 28S rDNA基因序列堿基替換統(tǒng)計表 Domain ii si sv R TotalDomainInfo Avg 1022 21 12 1st 342 7 3 1st Pos Data 2nd 338 10 7 2nd Pos Data 3rd 342 5 4 3rd Pos Data 對 28S rDNA 基因序列進行堿基替換統(tǒng)計結(jié)果見表 4 13 表 4 Cytb DNA基因序列堿基替換統(tǒng)計表 Domain ii si sv R TotalDomainInfo Avg 412 106 137 1st 141 33 41 1st Pos Data 2nd 131 42 46 2nd Pos Data 3rd 139 31 50 3rd Pos Data ii 表示不變位點 ii = Identical Pairs si 表示轉(zhuǎn)換位點 si = Transitionsal Pairs sv 表示顛換位點 sv = Transversional Pairs R 表示轉(zhuǎn)換與顛換的比值 R = si/sv Domain 表示統(tǒng)計內(nèi)容 Total 表示總長 Domain Info 表示統(tǒng)計所包括的位點 利用表 3中統(tǒng)計結(jié)果計算出 28S DNA 轉(zhuǎn)換取代 (transition)的速率為 %,顛換取代 (transversion)的速率為 %,顛換取代的速率略低于轉(zhuǎn)換取代的速率,轉(zhuǎn)換速率與顛換速率之比 R=。本 文選用 NJ、 ME 和 MP 分析法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。這個程序基于漸進比對的思想,得到一系列序列的輸入,對每兩個序列進行成對比對 (pairwise alignment)并且計算結(jié)果。 11 自然干燥。 4 在所得溶液加入 2ul 25mg/mlProk(終濃度 100mg/ml)和 223。 主要試劑 溴代十六烷基三甲胺( CTAB); Tris 飽和酚 ;乙二胺四乙酸( EDTA);溴化乙錠( EB); Taq DNA 聚合酶( TakaRa);瓊脂糖; 250bpDNA Marker;其余試劑均為分析純; 實驗所用引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成。 葉蜂總科是廣腰亞目最大的總科,中國己記載 6 個科,分別為三節(jié)葉蜂科Argidae,葉蜂科 Tenthredinidae,松葉蜂科 Diprionidae,錘角葉蜂科 Cimbicidae,筒腹葉蜂科 Pergidae 和茸蜂科 Blasticotomidae。研究葉蜂總科內(nèi)部的系統(tǒng)關(guān)系對解決整個廣腰亞目之間的關(guān)系有至關(guān)重要的作用。鄰接法和轉(zhuǎn)換距離法不包括速率一致的假設(shè),但均采用校正距離矩陣來減少各分支不同速率的影響。所產(chǎn)生的最大簡約樹中,所有類群的性狀狀態(tài)的變化總數(shù)也最小。但是目前在實驗技術(shù)、資料積累、數(shù)據(jù)處理分析以及序列數(shù)據(jù)的可比性等方面還有待于進一步的完善和充實。印紅 [11]將我國直翅目蝗總科 8 科 8 個種和從互聯(lián)網(wǎng) GenBank 中檢索到相關(guān)物種的線粒體基因組 16S rRNA 序列片段 進行同源性比較,計算核苷酸使用頻率,并構(gòu)建分子系統(tǒng)樹。對細胞色素 b 氨基酸組成和結(jié)構(gòu)基因的 脫氧核糖核酸 (DNA)順序研究指出 ,約 68%的氨基酸為非極性的。其中細胞核 DNA 或 mtDNA 的序列分析是一項最急需的技術(shù),它提供了大量的詳細資料。 20年來,昆蟲分子系統(tǒng)學(xué)快速發(fā)展, 目前應(yīng)用核酸序列分析技術(shù)測定昆蟲特定的核苷酸序列,以比較不同昆蟲之間的演化關(guān)系,建立符合自然發(fā)育的分子系統(tǒng)譜系,是昆蟲分子系統(tǒng)發(fā)育方面的主要研究方向之一。 葉蜂總科 (Tenthredinoidea)隸屬于昆蟲綱膜翅目 (Hymenoptera)廣腰亞目 (Symphyta),種類極多,分布廣泛。但隨著學(xué)科的發(fā)展也遇到了一些傳統(tǒng)方法難以解決的困難,例如,一些近緣種很難確定其分類地位,對于種群、生態(tài)型的研究更是如此。 Col 是細胞色素 C氧化酶中最大和最保守的 亞基,葉蜂中 COl 全長 860bp。核基因中含有更加豐富的生物學(xué)信息,用適當(dāng)?shù)暮嘶蜓芯坷ハx的系統(tǒng)發(fā)育,其結(jié)果更有可能比較真實地反映出昆蟲的進化歷史。 mtDNA 基因組中不含間隔區(qū)和內(nèi)含子,無重復(fù)序列和不等交換,在遺傳過程中不發(fā)生基因重組、倒位、易位等突變,并且遵守嚴格的母系遺傳方式,可以簡單地認為 mtDNA 是克隆型。有學(xué)者認為,由于核基因沒有線粒體基因的替代偏異特征,昆蟲分子系統(tǒng)學(xué)應(yīng)該更加關(guān)注核基因數(shù)據(jù)而不是線粒體基因數(shù)據(jù)。②鄰接法( neighber- jointing method)原理是逐漸尋找新的近鄰,使最終生成的分支樹的總長度達到最小。 貝葉斯法 [16]( Bayesain analysis)建立在 ML基礎(chǔ)上的但比 ML更為捷徑的一種統(tǒng)計學(xué)方法,它采用了 ML法的基本原理,同時引進了馬爾科夫鏈蒙特卡洛方法 (the Markov Chain Monthe Carloanlysis, MCMC)途徑,將運算效率提高,大大地縮短運算時間,最終獲得一組似然率最大樹構(gòu)成的合意樹,直接估算貝葉斯后驗概率 (Bayesain Posterior Probabilities)。在進化速率可變的前提下,最大簡約法略差于轉(zhuǎn)換距離法和鄰接法,最大似然法結(jié)果最優(yōu)。蕭剛?cè)嵯壬?1991 年總結(jié)了中國葉蜂的系統(tǒng)分類研究成果 [28]。 以蕨葉蜂亞科 Selandriinae、平背葉蜂亞科Allantinae、巨基葉蜂亞科 Megabelesesinae 及藺葉蜂亞科 Belesesinae 為內(nèi)群,從Genbank 下載 Runaria reducta 的 28S DNA 及 Cytb 基因序列做 為外群。提取具體步驟如下: 1 將 2%CTAB Buffer 預(yù)熱至 60℃ 。 8 在上層清液中加入 2 倍體積無水乙醇(- 20℃)沉降 DNA 過夜。 PCR 產(chǎn)物檢測、純化及測序 PCR 產(chǎn)物檢測 ,取 5ul 的反應(yīng)產(chǎn)物,經(jīng) %瓊脂糖凝膠電泳后 ( 57V, 小時) EB 染色 小時 ,在凝膠成像系統(tǒng)中檢測是否有目標(biāo)條帶并照相;產(chǎn)物的純化和測序均有上海博尚生物技術(shù)公司完成。 系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析 將所得雙向測序結(jié)果輸入 ContigExpress 軟件中,輔以 Bioedit 軟件進行序列拼接和序列編輯。 12 從以上圖 圖 2 可以看出, 28S DNA 的引物擴增結(jié)果特異性強,條帶均清晰,測序長度約在 1050bp。 5 8 Ta x o n u s a t t e n a t u s 2 8 S 1 5 3 A l l a n t u s n i g r o c a e r u l e u s 6 3 L i n o m o r p h a f l a v a 2 8 S 9 1 M e g a b e l e s e s l i r i o d e n d r o v o r a x 1 7 8 A b e l e s e s r u f o t i b i a l i s 2 1 9 B e l e s e s n i g r o a p i c a l i s 1 7 5 N e o s t r o m b o c e r o s n i p p o n i c u s 5 5 E u f o r s i u s p i e l i 2 8 S 8 7 A n e u g m e n u s f r o n t a l i s 2 8 S 1 7 3 A n e u g m e n u s p t e r i d i i R u n a r i a r e d u c t a d o w n l o a d ) 圖 3: 28S rDNA 基因部分序列經(jīng) PAUP 分析產(chǎn)生 ME 樹拓撲結(jié)構(gòu)圖。本實驗所用的是核糖體的基因,測得的序列長度不夠長,在未來的工作中我們可以延長核酸序列的長度,使其包含更大的遺傳信息;可以加入一些編碼蛋白質(zhì)的基因,如 COⅠ和 EF1a 基因這些分子標(biāo)記,把更多的基因聯(lián)合起來分析;另外,本文僅用了NJ 一種方法構(gòu)建分子系統(tǒng)樹,還可結(jié)合 Baysain 和 ML 多種統(tǒng)計學(xué)方法來綜合討論這 些類群之間的關(guān)系。 Kumar S. :Molecular Evolutionary Geics Analysis (MEGA) software version [J]. Molecular Biology and Evolution. 2020, 24: 15961599. [33] 19 項 目 經(jīng) 理項 目 副 經(jīng) 理 項 目 總 工 質(zhì) 安 總 監(jiān)工程管理部物資管理部技術(shù)管理部檢測試驗室質(zhì)安管理部監(jiān) 督 工 程 管 理部 、 物 資 管 理部 、 檢 測 試 驗 室現(xiàn) 場 質(zhì) 檢 員 、 施 工 員施 工 班 組 3N7N承 承 承 承 承 承 承承 承3S7S承 承 承 承 承 承承 承 承3N7N承 承 承 承 承 承 承承 承 承 承3S7S承 承 承 承 承 承承 承 承 承 承3N7N承 承 承 承 承 承 承承 承3S7S承 承 承 承 承 承承 承 承3N7N承 承 承 承 承 承 3S7S承 承 承 承 承 承3N7N承 承 承 承 承 承 承承 承 承 承3S7S承 承 承 承 承 承承 承 承 承 承3N7N承 承 承 承 承 承 承承 承 承3S7S承 承 承 承 承 承承 承 承 承3N7N承 3S7S承 承 承承 承 承3N7N承 承 承 承 承 承 3S7S承 承 承 承 承 承e39。 UE9aQGn8xp$Ramp。 ksv*3t nGK8! z89Am YWpazadNuKNamp。 ksv*3tnGK8! z89Am UE9a