基因結(jié)構(gòu)與表達分析的基本策略教材-免費閱讀
【正文】 :04:3312:04:33January 23, 2023 1意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 1月 下午 12時 4分 :04January 23, 2023 1少年十五二十時，步行奪得胡馬騎。 2023年 1月 23日星期一 12時 4分 33秒 12:04:3323 January 2023 1做前，能夠環(huán)視四周；做時，你只能或者最好沿著以腳為起點的射線向前。 113 Western免疫印跡信號檢測原理 114 1. 蛋白質(zhì)樣品制備 2. SDSPAGE分離 3. 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜 Western blot程序 115 4. 抗體與抗原雜交 5. 信號檢測分析 116 謝謝大家！ 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 94 每產(chǎn)生一條 DNA鏈，就切斷一條探針，每切斷一條探針，就產(chǎn)生一個單位信號， 信號強度與結(jié)合探針的 DNA分子數(shù)成正比 。 83 RTPCR原理 84 逆轉(zhuǎn)錄酶 ① AMV（ avian myeloblastosis virus） 酶活性最適溫度 42 ℃ ② MMLV（ Moloney murine leukemia virus）：最適溫度 37 ℃ 85 2. 定量 RTPCR（ QRTPCR） 半定量 RTPCR 以樣本 mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNA，在不同引物對引導(dǎo)下共同 PCR擴增 “看家”基因 和目的基因 cDNA 。 影響因素： ① 引物及 dNTP底物濃度降低。 44 RNA瓊脂糖凝膠電泳 3kb kb Nt 3638 2604 623 Northern blot hybridization 28S 18S 應(yīng)用舉例 45 GAPDH 0d 2d 4d 6d 8d Northern blot 雜交分析 mRNA的表達 靶 mRNA 3磷酸甘油醛脫氫酶 46 三、其他雜交技術(shù) 1. 斑點雜交 (dot blot hybridization） 將 RNA或 DNA變性后直接點樣于硝酸纖維素膜或尼龍膜上，用于基因組中特定基因及其表達的定性及定量研究。 34 34 探針技術(shù) 用放射性核素、生物素或熒光染料標(biāo)記其末端或全鏈的已知序列的多聚核苷酸鏈被稱為 “ 探針 ” 。 19 ddCTP ddATP ddTTP ddGTP dCTP dATP dTTP dGTP 5′ T G A A T G A 3′ A C G C T 20 21 表示一個 SNP位點，該位點出現(xiàn)了雙峰，對應(yīng)的核苷酸分別為 C和 T,因此該位點為 CT雜合型，如果該位點只有一個峰 C或者 T，則該位點基因型為 CC或 TT純合型 22 DNA自動測序步驟 4種不同熒光染料標(biāo)記終止物 ddNTPs Sanger測序反應(yīng) 反應(yīng)產(chǎn)物 同一 泳道電泳分離 激光激發(fā)不同大小 DNA片段上的熒光分子，發(fā)射出四種不同波長的熒光 熒光信號采集、計算機分析與 DNA自動排序 23 Dye labeled dideoxyterminators on ABI 3730 capillaries 24 與末端終止法不同， 化學(xué)降解法是建立在對原有 DNA的化學(xué)降解過程基礎(chǔ)上。 （三）化學(xué)降解法 25 將待測 DNA片段 3′ 或 5′ 端進行同位素標(biāo)記，標(biāo)記的 DNA片段分成五個反應(yīng)，分別用不同的化學(xué)試劑處理，造成堿基特異性切割，使 DNA片段分別于某一種（類）堿基處斷裂。 探針可以與固定在 NC膜上的核苷酸結(jié)合，判斷是否有同源的核酸分子存在。 47 47 （ in situ hybridization） 用標(biāo)記的核酸探針與組織切片或細胞中的待測核酸互補序列雜交，可對核酸進行定性、定位和相對定量分析。 ② 酶與模板比例下降。 86 ① 選擇內(nèi)對照基因 組織中普遍表達、表達量比較恒定的“看家”基因 mRNA。 95 。 , January 23, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 下午 12時 4分 33秒 下午 12時 4分 12:04: 沒有失敗，只有暫時停止成功！。 2023年 1月 23日星期一 12時 4分 33秒 12:04:3323 January 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 2023年 1月 23日星期一 下午 12時 4分 33秒 12:04: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。勝人者有力，自勝者強。 2023年 1月 23日星期一 下午 12時 4分 33秒 12:04: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 2023年 1月 下午 12時 4分 :04January 23, 2023 1行動出成果，工作出財富。 109 DNA芯片（ cDNA芯片）主要技術(shù)流程： 樣品熒光標(biāo)記及芯片制備 雜交反應(yīng)及過程控制 雜交信號檢測 信號分析與解讀 110 C B A Cy5標(biāo)記 cDNA Cy3標(biāo)記 cDNA
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