基因工程制藥-免費閱讀
【正文】 原位雜交檢測 根據(jù)插入 DNA片段的序列設(shè)計并合成 探針 ，以此搜尋篩選含有目的基因的目的重組子。 （ IPTG 存在下 ） α 互補的檢測 IPTG：異丙基硫代半乳糖苷 誘導(dǎo)物 Xgal: 5溴 4氯 3吲哚 β半乳糖苷 ? 如果載體 DNA中含有 β半乳糖苷酶（ LacZ），那末，當(dāng)培養(yǎng)基含有 XGtal底物 + IPTG誘導(dǎo)物時，宿主細(xì)胞就會形成藍(lán)色菌落。 插入片段的大小： 對質(zhì)粒載體而言， 插入片段越大 ， 轉(zhuǎn)化效率越低 受體細(xì)胞的性質(zhì)： 不同菌株轉(zhuǎn)化效率有較大差異 受體細(xì)胞與載體的匹配： 受體細(xì)胞必須與載體相匹配，如： pBR322轉(zhuǎn)化大腸桿菌 JM83株轉(zhuǎn)化率很低；但對大腸桿菌 ED8767株的轉(zhuǎn)化率則較高。 （ 2）電穿孔法 將待轉(zhuǎn)化的質(zhì)?；?DNA重組連接液加在 電穿孔轉(zhuǎn)化儀 的樣品池中，兩極施加高壓電場。 產(chǎn)品名稱 治療功能與醫(yī)藥范圍 1. 人胰島素 治療糖尿病 2. 人生長激素 治療侏儒癥 ， 加速創(chuàng)口愈合 3. α 干擾素 治療癌癥 、 病毒感染 4. β 干擾素 治療帶狀皰疹 ， 眼結(jié) 、 角膜炎 5. γ 干擾素 治療癌癥 、 病毒感染 6. 人組織纖溶酶原激活因子 (tPA) 溶解血栓 ， 治療急性心肌梗塞 7. 紅細(xì)胞生成素 (Epo) 治療腎病性貧血 ， 增加紅細(xì)胞及血色素水平 8. 超氧化物歧化酶 清除超氧化物 ， 治療關(guān)節(jié)炎 ， 緩解心肌壞死 9. 凝血因子 Ⅷ 治療 A型血友病 10. 乙型肝炎疫苗 防治肝炎 11. 神經(jīng)生長因子 維持神經(jīng)元細(xì)胞存活 、 生長和分化 12. 腦啡膚 鎮(zhèn)痛 13. 降鈣素 治療骨質(zhì)疏松癥 （二）基因工程所生產(chǎn)的產(chǎn)品 基因工程生產(chǎn)胰島素的原理（示意圖） （三）基因工程 的發(fā)展方向 第一代基因工程 蛋白多肽的高效表達(dá) 經(jīng)典基因工程 第二代基因工程 蛋白編碼基因的定向誘變 改造基因 第三代基因工程 代謝信息途徑的修飾重構(gòu) 改造個體 第四代基因工程 基因組或染色體的轉(zhuǎn)移 基因組工程 第二節(jié)、基因工程基本技術(shù)與策略 一、切 二、接 三、轉(zhuǎn) 四、增 五、檢 一、 切 （一）定義 限制性內(nèi)切酶切及與載體連接 （二）關(guān)鍵問題 限制性內(nèi)切酶的選擇及連接末端的設(shè)計。它源于中國人基因，最適于黃種人使用。 （ 2） 細(xì)胞因子 各種干擾素、白細(xì)胞介素、集落刺激生長因子、表皮生長因子、凝血因子、促紅細(xì)胞生成素。 （三）、基因工程的載體 常用載體 (vector) 來源分類 ：質(zhì)粒載體 噬菌體載體 病毒載體 人工染色體載體 用途分類 ：克隆載體 表達(dá)載體 穿梭載體 克隆載體 (cloning vector) 能使插入的外源 DNA序列被復(fù)制 、 擴(kuò)增而不能表達(dá) ， 這樣的載體為 克隆載體 。 DNA連接酶的用途 （ 1） 兩個雙鏈 DNA片段連接起來 5ˊ ACG AATTCGT3ˊ T4DNA連接酶 5ˊ ACGAATTCGT3ˊ 3ˊ TGCTTAA GCA5ˊ 3ˊ TGCTTAAGCA5ˊ （ 2） 修補帶有缺口的雙鏈 DNA分子 T4DNA連接 酶 （ alkaline phosphatase） 能夠催化水解去除 DNA或 RNA5’ 端的磷酸基團(tuán)。539。339。 339。 339。 E. coli DNA pol. Ⅰ 催化缺口平移 * T * T * T * T Mg 2+ D N a s e I 539。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + Bam HⅠ ?與甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的 限制 修飾系統(tǒng) ：限制外源 DNA， 保護(hù)自身 DNA， 穩(wěn)定細(xì)菌遺傳性狀 。 在體外外來遺傳物質(zhì)與載體 DNA結(jié)合成具自我復(fù)制的 DNA分子，通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞、篩選出轉(zhuǎn)化子細(xì)胞，再擴(kuò)增提取獲得大量同一 DNA分子，即 DNA克隆又稱重組 DNA。這些工作為基因工程載體系統(tǒng)的建立打下基礎(chǔ)。這一重大發(fā)現(xiàn)大大地促進(jìn)了現(xiàn)代生物科學(xué)的發(fā)展。 為了使 DNA片段能在宿主細(xì)胞中得以擴(kuò)增，須將其接到一個特定能夠進(jìn)行自我復(fù)制的載體分子上。 基因工
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