華中科技大學(xué)發(fā)酵工程第二章工業(yè)用微生物菌種-免費(fèi)閱讀
【正文】 （ 3）構(gòu)建代謝旁路 （ 4）改變能量代謝途徑 代謝工程育種思路 2. 擴(kuò)展代謝途徑 （ 1） 在引入外源基因后 ， 使原來的代謝途徑向后延伸 ， 產(chǎn)生新的末端代謝產(chǎn)物 。 ? 代謝網(wǎng)絡(luò)分流處的代謝產(chǎn)物稱為節(jié)點(diǎn) ， 其中對(duì)終產(chǎn)物合成起決定作用的少數(shù)節(jié)點(diǎn)稱為主節(jié)點(diǎn) 。 選擇性分離 選擇性分離原理和技術(shù) ? 生長條件的選擇與控制原理 ? 控制營養(yǎng)成分 ? 控制培養(yǎng)基酸堿度 ? 添加抑制劑 ? 控制培養(yǎng)溫度 ? 控制通氣條件 ? 選擇性分離技術(shù) ? 富集液體培養(yǎng)技術(shù) ? 固體培養(yǎng)技術(shù) 施加選擇壓力，進(jìn)行定向篩選 ? 增加混合菌群中所需菌株數(shù)量的一種技術(shù) ? 技術(shù)特點(diǎn)：給混合菌群提供一些有利于目的菌株生長或不利于目的菌以外的其他菌型生長的條件 ? 培養(yǎng)方式 ? 分批培養(yǎng)方式：以最大比生長速率 （ μmax）篩選，存在選擇壓力的控制、移種時(shí)間和次數(shù)等問題 ? 連續(xù)培養(yǎng)方式：以比生長速率（ μ）篩選 μ A B S0 基質(zhì)濃度對(duì) A、 B兩種菌的比生長速率（ μ）的影響 當(dāng) SS0時(shí)，富集什么菌株？ 當(dāng) SS0時(shí)，富集什么菌株？ 連續(xù)富集培養(yǎng)技術(shù)分離菌株的優(yōu)點(diǎn) ? 分離的菌株特別適合連續(xù)發(fā)酵生產(chǎn)過程 ? 有利于分離具有某種工業(yè)生產(chǎn)特性的菌株 ? 可以篩選出能共生的穩(wěn)定混合培養(yǎng)物 B. 固體培養(yǎng)技術(shù) ? 常用于分離某些酶產(chǎn)生菌 ? 選擇壓力：在選擇培養(yǎng)基中加入所需酶的基質(zhì) 隨機(jī)分離原理與技術(shù) ? 從產(chǎn)物入手，通過設(shè)計(jì) 高產(chǎn)培養(yǎng)基 和建立快速靈敏專一的篩選方法，從隨機(jī)分離的菌落中篩選出所需的目的菌。 本章內(nèi)容 一、 常用的工業(yè)微生物 二、 發(fā)酵工業(yè)菌種篩選的原則與基本技術(shù) 三、 發(fā)酵工業(yè)菌種改良 對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行菌種篩選時(shí)，有兩條經(jīng)驗(yàn) ： ? 進(jìn)化上向上兼容； ? 次生代謝在進(jìn)化上后移，芽孢菌以上才有篩選意義。 ? 技術(shù) 關(guān)鍵：產(chǎn)物合成條件的選擇與控制及相應(yīng)篩選方法的確定。 ? 根據(jù)節(jié)點(diǎn)下游分支的可變程度 ， 節(jié)點(diǎn)分為： 柔性節(jié)點(diǎn) ： 解除一個(gè)分支的反饋抑制可提高該分支下游產(chǎn)物的產(chǎn)量 。 （ 2） 使原來的代謝途徑向前延伸 ， 可以利用新的原料生物合成代謝末端產(chǎn)物 。 （ 1）加速限速反應(yīng) （ 2）改變分支代謝途徑流向： 提高代謝分支點(diǎn)的某一分支代謝途徑酶系的活力，在與另外的分支代謝途徑的競爭中占有優(yōu)勢(shì)，可以提高目的代謝末端產(chǎn)物的產(chǎn)量。 代謝工程 發(fā)展基礎(chǔ) ? 代謝網(wǎng)絡(luò)理論：是把細(xì)胞的生化反應(yīng)以網(wǎng)絡(luò)整體 ， 而不是孤立地來考慮 。 ? 從保藏機(jī)構(gòu)獲取菌種進(jìn)行分離篩選有兩個(gè)好處： 經(jīng)濟(jì)性 指導(dǎo)性 設(shè)計(jì)篩選方案時(shí)必須考慮兩個(gè)要點(diǎn) ?選擇性 ?靈敏度 3. 新種分離與篩選的步驟 調(diào)查研究 （ 包括資料查閱 ） 試驗(yàn)方案設(shè)計(jì) 含微生物樣品的采集 （ 如何使樣品中含所需微 生物的可能性大 ？ ） 樣品預(yù)處理 （ 如何在后續(xù)的操作中使這種可 能性實(shí)現(xiàn) ） 菌種分離 根據(jù)目的菌株及其
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