核酸的結(jié)構(gòu)與功能(7)-免費(fèi)閱讀
【正文】 91 2) 影響因素 : ⑴ DNA濃度高，復(fù)性快 ⑵ DNA分子大， 復(fù)性慢 ⑶ 合適的復(fù)性溫度： Tm25℃ ⑷ 適當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度：一般在 92 圖 326 DNA熱變性過程的兩種冷卻過程示意圖 93 3. 雜交 （ hybridization） 1)概念 具有互補(bǔ)序列的不同來源的單鏈核酸 分子 ,按堿基配對(duì)原則結(jié)合在一起稱 為雜交。 84 2. 酶法 核酸酶 (nucleases) 包括： 核糖核酸酶 (RNase) 脫氧核糖核酸酶 (DNase) 核酸外切 酶 (exonuclease) 核酸內(nèi)切 酶 (endonuclease) 85 3’ p p p p OH 3’ 5’ 限制性內(nèi)切酶 (restriction endonuclease) 5’ G AATT C 3’ 3’ C TTAA G 5’ EcoR I 核酸外切 酶 核酸內(nèi)切 酶 86 三、核酸的變性、復(fù)性與雜交 １ .變性 （ denaturation） 1) 定義： 在一定理化因素作用下，核酸雙螺旋等空 間結(jié)構(gòu)中堿基之間的氫鍵斷裂，變成單鏈 的現(xiàn)象稱為變性（ denaturation）。 2) 核仁小分子 RNA（ small nucleolar RNA， snoRNA）參與 rRNA前體的加工以及核 糖體亞基的裝配。 兩個(gè)括號(hào)是在三級(jí)結(jié)構(gòu)中互補(bǔ)的序列 57 ⑴ tRNA的一級(jí)結(jié)構(gòu) ① tRNA是單鏈分子，含 73~93核苷酸， ② 含有 10%的稀有堿基 ③ 3’ 端為 CCAOH， 5’ 端多為 pG ④ 分子中大約 30%的堿基是不變的或半不 變的 , 決定了它們的二級(jí)結(jié)構(gòu)都是三葉 草型。 ② 三股螺旋 DNA存在于基因調(diào)控區(qū)和其他 重要區(qū)域，具有重要生理意義。 28 ⑶ 堿基對(duì)之間的 距離為 ，并有一個(gè) 36?的夾角， 每一螺旋內(nèi)含 10個(gè) 堿基對(duì) ， 螺距為 . ⑷ 螺旋表面有 大溝 (major groove)和 小溝 (minor groove).是 DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合的部位 29 ⑸ DNA雙螺旋通過中的堿基氫鍵配對(duì)生成。1 第三章 核酸的結(jié)構(gòu)與功能 2 核糖核酸 (ribonucleic acid， RNA) 核酸 (nucleic acid) (多聚核苷酸 ) 脫氧核糖核酸 (deoxyribonucleic acid， DNA) **核酸的構(gòu)件分子是核苷酸 (nucleotide) **DNA是遺傳信息的載體 **RNA轉(zhuǎn)錄遺傳信息，參與蛋白質(zhì)生物合成 目前研究發(fā)現(xiàn) RNA功能廣泛，其核心作用 是基因表達(dá)的調(diào)控。 A與 T 配對(duì)，形成 二 個(gè)氫鍵。 38 圖 314三股螺旋 DNA 嘧啶核苷酸 嘌呤核苷酸 39 2. DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu) —— 超螺旋結(jié)構(gòu) 1） DNA三級(jí)結(jié)構(gòu)是指 DNA鏈進(jìn)一步扭曲盤 旋形成超螺旋結(jié)構(gòu) 2） 大多數(shù)原核生物和病毒的基因組 DNA以雙 鏈環(huán)狀 DNA形式存在。 58 圖 320 tRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)（ a） tRNA三級(jí)結(jié)構(gòu)（ b） 59 ⑵ tRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu) 1） tRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)為 三葉草型 60 2） 四環(huán)四臂 ① 氨基酸臂 a. 7個(gè) bp組成 b. 3’ 末端均為 － NCCAOH3’ 結(jié)構(gòu) c. 攜帶氨基酸 61 ② 二氫尿嘧啶環(huán)（ D環(huán)） 兩個(gè)二氫尿嘧啶 （ DHU） tRNA合成酶 ③二氫尿嘧啶臂 34bp 62 ④ 反密碼環(huán) ，其中 3個(gè)組成 反密碼子 (anticodon) mRNA上相應(yīng)密碼配對(duì) ⑤ 反密碼臂有 5對(duì)堿基組成 63 ⑦ TψC環(huán) a. ７個(gè)堿基組成 b. 含 TψC序列 c. 識(shí)別 rRNA中的 5SrRNA ⑧ TψC環(huán)臂 5對(duì)堿基組成 ⑥ 額外環(huán) a. 由 4~21個(gè) b之間變動(dòng)，又稱可變環(huán) b. 不同 tRNA分子差異較大。 79 3) 胞質(zhì)小分子 RNA（ small cytosol RNA， scRNA） 如： 7S LRNA與蛋白質(zhì)一起組成信號(hào)識(shí)別 顆粒，參與蛋白質(zhì)的合成。 2) 引起核酸變性的常見理化因素有加熱、 酸、堿、尿素和甲酰胺等。雜交可發(fā)生在 DNADNA、 RNARNA和 DNARNA之間。 2)退火
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