【正文】 ? IL2的功能比較廣泛，對(duì) T細(xì)胞和 B細(xì)胞， NK、巨噬細(xì)胞等都有作用，因此 IL2可通過(guò)不同作用環(huán)節(jié)調(diào)節(jié)和增強(qiáng) DNA免疫效應(yīng)，發(fā)揮佐劑作用。近年來(lái)，重組質(zhì)粒表達(dá)的細(xì)胞因子在核酸疫苗研究領(lǐng)域引起了人們廣泛的興趣與關(guān)注。我們?cè)谀ど贤可弦粚踊|(zhì)膠，模仿細(xì)胞外基質(zhì)，于是細(xì)胞要把基質(zhì)消化了才可以從低營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)液跑到高營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)液里面，最后我們檢測(cè)高營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)液里細(xì)胞量就可以知道細(xì)胞的侵襲能力了 。 WST8是一種類(lèi)似于 MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的 formazan (參考圖 1)。研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者血清 IL IL IL1β 等，且與抑郁癥的嚴(yán)重程度有關(guān) 。 （ 2） T：促進(jìn) T細(xì)胞增殖、活化： IL2, 7, 18； 促分化： IL12, IFNγ :Th0 Th1； IL4:Th0 Th2； TGFβ ， IL6： Th0 Th17； TGFβ ： Th0 Treg。 （ 2） Mo/M248。 細(xì)胞因子可調(diào)節(jié)細(xì)胞因子受體的表達(dá)： IL IL IL6等可促進(jìn) IL2受體的表達(dá)； IL1能降低 TNF受體的密度，細(xì)胞因子與生物活性 之間的相互影響。 抑制血管生長(zhǎng)的因子 ,能抑制 ELRCXC誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞趨化。 downregulation Sylvia Julien Grille et al., “The Protein Kinase Akt Induces Epithelial Mesenchymal Transition and Promotes Enhanced Motility and Invasiveness of Squamous Cell Carcinoma Lines,” Cancer Res 63, no. 9 (May 1, 2022): 21722178. AKT STABLE shRNA A549穩(wěn)轉(zhuǎn)株 遷移能力顯著增強(qiáng) Cltr.B Cltr.C Cltr.E sh sh3.C sh3.E 0H 24H 36H 0H 24H 36H 細(xì)胞因子受體 細(xì)胞因子發(fā)揮廣泛多樣的生物學(xué)功能是通過(guò)與靶細(xì)胞膜表面的受體相結(jié)合并將信號(hào)傳遞到細(xì)胞內(nèi)部。 對(duì)細(xì)胞表型的調(diào)節(jié)：抑制 IL2誘導(dǎo) T細(xì)胞表達(dá) IL2R， TfR等，抑制 IFNγ 誘導(dǎo)黑色素細(xì)胞表達(dá) MHCII抗原 促進(jìn) Treg,Th17細(xì)胞的增殖分化。 趨化運(yùn)動(dòng)是指細(xì)胞向高濃度刺激物方向的定向運(yùn)動(dòng)。 ? IFNα 治療病毒感染性疾病：如丙肝 (Tumor necrosis factor, TNF) ? 1975年發(fā)現(xiàn)的一種能使腫瘤發(fā)生出血壞死的物質(zhì)，該因子對(duì)多種腫瘤細(xì)胞系具有細(xì)胞毒作用，而且在多種動(dòng)物模型中可引起腫瘤壞死，將其命名為腫瘤壞死因子（ Tumor Necrosis Factor， TNF）。 生物學(xué)活性 IFNα 和 IFNβ 抗病毒活性：誘導(dǎo)抗病毒蛋白： ? 25A合成酶 催化寡核苷酸 PPP活化 RNaseL降解病毒 RNA； ? 蛋白激酶 PKR肽起始因子 eIF2磷酸化而滅活，抑制病毒蛋白的合成。 TRF3 ( Tcell replacing factor3 )。 PFCEA ( plaque forming cell enhancing factor )。 32 35(均為異源二聚體結(jié)構(gòu) ) ? IL17家族： IL17A、 B、 C、 D、 E和 F[1]。 20 9 細(xì)胞因子的分類(lèi) 根據(jù)產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞種類(lèi)分類(lèi)： 淋巴因子 (lymphokines) 單核因子 (monokines) 非淋巴因子、非單核因子 /巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子：基質(zhì)、血管內(nèi)皮、成纖維細(xì)胞等 根據(jù)細(xì)胞因子的結(jié)構(gòu)和功能分類(lèi) 白細(xì)胞介素 (Interleukin, IL) 集落刺激因子 (ColonyStimulating Factor, CSF) 干擾素 (Interferon, IFN) 腫瘤壞死因子 (TumorNecrosis Factor, TNF) 趨化因子 (Chemokine, CK) 生長(zhǎng)因子 (Growth Factor, GF) 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子家族（ TGFb) (Interleukin, IL) 1979年第二屆國(guó)際淋巴因子專(zhuān)題討論會(huì)上命名的，將由白細(xì)胞產(chǎn)生的又在白細(xì)胞之間發(fā)揮作用的細(xì)胞因子統(tǒng)一命名為白細(xì)胞介素，正式命名的有 IL1IL35。 細(xì)胞因子研究歷史 ? 1957年，發(fā)現(xiàn)干擾素（ IFN） ? 1969年，提出淋巴因子（ lymphokine）的概念 ? 1974年，定名細(xì)胞因子（ cytokine） ? 近年來(lái)，細(xì)胞因子發(fā)展迅猛，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn) 200多種細(xì)胞因子，成立專(zhuān)門(mén)的細(xì)胞因子學(xué)會(huì)，如國(guó)際細(xì)胞因子學(xué)會(huì)（ international cytokine society）；創(chuàng)辦研究細(xì)胞因子的專(zhuān)門(mén)雜志，如 《 Cytokine》 等。 篩選潛在的細(xì)胞因子的策略 ? 未知蛋白的生物信息學(xué)分析： – 無(wú)功能性文章報(bào)道或無(wú)免疫相關(guān)的功能性報(bào)道 – 具有潛在的信號(hào)肽或被證實(shí)為分泌蛋白 – 蛋白氨基酸數(shù)目少于 300個(gè) – 主要在免疫系統(tǒng)和造血系統(tǒng)中表達(dá) 5 獲得的基因， ORF克隆連接在真核表達(dá)載體 轉(zhuǎn)染 293T細(xì)胞，檢測(cè)其分泌表達(dá) ? 正常細(xì)胞： – 未活化時(shí)，產(chǎn)生很少； – 活化后，產(chǎn)量可提高成百上千倍；如活化的淋巴細(xì)胞、活化的單核 /巨噬細(xì)胞、 NK細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等。 33 ? IL2 家族： IL2 30 29 (結(jié)構(gòu)相似 ) ? IL12 家族 IL12 11 ? IL8（趨化因子） ? 其它 IL： IL 13 LMF ( lymphocyte mitogenic factor )。 TMF ( thymocyte mitogenic factor )。 ? 1957年從病毒感染細(xì)胞培養(yǎng)中分離到一種生物活性物質(zhì)，因它可以干擾其它病毒的復(fù)制而被命名為干擾素。 病毒 病毒復(fù)制 抑制病 毒復(fù)制 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) IFNa IFN誘導(dǎo)蛋白 誘導(dǎo)刺激 胞核 胞核 I型干擾素 α：抗病毒 10 –12 g干擾素能在培養(yǎng)組織中保護(hù)一百萬(wàn)個(gè)細(xì)胞免受一千萬(wàn)個(gè)病毒顆粒的感染 ? IFN與臨床： ? 自身免疫?。捍傺?/抑炎，一些實(shí)驗(yàn)表明 IFNγ 通過(guò)抑制 Th17的分化，從而調(diào)節(jié)炎癥和自身免疫性疾病。 ? 與自身免疫?。? ? 與腫瘤：引起腫瘤組織缺氧，血管損傷和血栓形成，誘發(fā)局部炎癥，促進(jìn) T細(xì)胞、 NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，提高宿主免疫力，抑制腫瘤生長(zhǎng)。 幾乎所有腫瘤細(xì)胞均可檢測(cè)到 TGFβmRNA 。 ? EMT的生物學(xué)意義： ? 發(fā)育 ? 腫瘤 ? 器官纖維化等 上皮間質(zhì)變遷與癌細(xì)胞演變 癌癥的傳統(tǒng)定義是上皮組織的惡性細(xì)胞病變。 ? TNFR I（ P55， CD120a）：胞內(nèi)同源序列即 “ 死亡結(jié)構(gòu)域 ” ? TNFR II（ P75， CD120b）不含死亡結(jié)構(gòu)域 L 腫瘤壞死因子受體可發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用 ? 腫瘤壞死因子受體家族的 CD40和 FAS具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用 : – CD40 B細(xì)胞，巨噬細(xì)胞 – CD40L， FASL效應(yīng) T細(xì)胞 – CD40L+B細(xì)胞 CD40— B細(xì)胞增生， Ig類(lèi)別轉(zhuǎn)換 – CD40L+巨噬細(xì)胞 CD40巨噬細(xì)胞分泌 TNF – FAS+FASL表達(dá) FASL的 CTL可清除表達(dá) FAS的淋巴細(xì)胞，這是一種重要的免疫應(yīng)答的負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制。 (sCKR) ? 產(chǎn)生方式： – 大部分為膜受體脫落，如 SIL1R、 SIL 2R、 sTNFR、sIFNrR、 sGMCSFR、 sIL5R、 sIL6R等 – 小部分為分泌型，如 sIL4R、 sGCSFR、 sIL5R、 sIL6R ? 生物學(xué)活性： – 膜受體正常代謝途徑 – 膜受體相應(yīng)配體 “ 競(jìng)爭(zhēng)抑制劑 ” ? 應(yīng)用： – 檢測(cè)，治療 sCKR與臨床： ? 檢測(cè)： – sIL2R：惡性腫瘤、自身免疫性疾病、病毒感染與其他傳染性疾病、移植排斥反應(yīng)等 – sIL6R：炎癥與自身免疫性疾病、感染性疾病、腫瘤和白血病等 – sTNFR：炎癥與自身免疫性疾病、感染性疾病、腫瘤和白血病、骨髓移植等 ? 治療 ： ? 大多數(shù) sCKR與細(xì)胞因子結(jié)合后阻斷細(xì)胞因子與膜受體結(jié)合，從而抑制細(xì)胞因子的生物學(xué)活性。 淋巴樣干細(xì)胞： IL7。 （ 6） γδ T：激活（ IL1， 7， 12， 15）。如 IL 1 1 TNFα 、 IFNγ 等。於 37℃ CO2 培 養(yǎng) 箱 2天後，加入 1 μCi/well 3H胸腺嘧啶（ thymidine） ， 繼續(xù)培養(yǎng) 8小 時(shí)后 ，以 cell harvester 收集 細(xì) 胞 于濾紙 上， 風(fēng)干后 以 閃爍計(jì)數(shù)儀測(cè) 3Hthymidine 含量， 計(jì)算細(xì)胞增殖 能力。 ? 腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn) 、 ，上室種腫瘤細(xì)胞，下室加入 FBS或某些特定的趨化因子，腫瘤細(xì)胞會(huì)向營(yíng)養(yǎng)成分高的下室跑，計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映腫瘤細(xì)胞的遷移能力。 ： DAB389IL2免疫毒素治療 T細(xì)胞淋巴瘤