【正文】 ? IL2的功能比較廣泛，對 T細胞和 B細胞， NK、巨噬細胞等都有作用，因此 IL2可通過不同作用環(huán)節(jié)調(diào)節(jié)和增強 DNA免疫效應，發(fā)揮佐劑作用。近年來，重組質(zhì)粒表達的細胞因子在核酸疫苗研究領域引起了人們廣泛的興趣與關(guān)注。我們在膜上涂上一層基質(zhì)膠，模仿細胞外基質(zhì)，于是細胞要把基質(zhì)消化了才可以從低營養(yǎng)的培養(yǎng)液跑到高營養(yǎng)的培養(yǎng)液里面，最后我們檢測高營養(yǎng)的培養(yǎng)液里細胞量就可以知道細胞的侵襲能力了 。 WST8是一種類似于 MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的 formazan (參考圖 1)。研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者血清 IL IL IL1β 等，且與抑郁癥的嚴重程度有關(guān) 。 （ 2） T：促進 T細胞增殖、活化： IL2, 7, 18； 促分化： IL12, IFNγ :Th0 Th1； IL4:Th0 Th2； TGFβ ， IL6： Th0 Th17； TGFβ ： Th0 Treg。 （ 2） Mo/M248。 細胞因子可調(diào)節(jié)細胞因子受體的表達： IL IL IL6等可促進 IL2受體的表達； IL1能降低 TNF受體的密度，細胞因子與生物活性 之間的相互影響。 抑制血管生長的因子 ,能抑制 ELRCXC誘導的內(nèi)皮細胞趨化。 downregulation Sylvia Julien Grille et al., “The Protein Kinase Akt Induces Epithelial Mesenchymal Transition and Promotes Enhanced Motility and Invasiveness of Squamous Cell Carcinoma Lines,” Cancer Res 63, no. 9 (May 1, 2022): 21722178. AKT STABLE shRNA A549穩(wěn)轉(zhuǎn)株 遷移能力顯著增強 Cltr.B Cltr.C Cltr.E sh sh3.C sh3.E 0H 24H 36H 0H 24H 36H 細胞因子受體 細胞因子發(fā)揮廣泛多樣的生物學功能是通過與靶細胞膜表面的受體相結(jié)合并將信號傳遞到細胞內(nèi)部。 對細胞表型的調(diào)節(jié)：抑制 IL2誘導 T細胞表達 IL2R， TfR等，抑制 IFNγ 誘導黑色素細胞表達 MHCII抗原 促進 Treg,Th17細胞的增殖分化。 趨化運動是指細胞向高濃度刺激物方向的定向運動。 ? IFNα 治療病毒感染性疾?。喝绫? (Tumor necrosis factor, TNF) ? 1975年發(fā)現(xiàn)的一種能使腫瘤發(fā)生出血壞死的物質(zhì)，該因子對多種腫瘤細胞系具有細胞毒作用，而且在多種動物模型中可引起腫瘤壞死，將其命名為腫瘤壞死因子（ Tumor Necrosis Factor， TNF）。 生物學活性 IFNα 和 IFNβ 抗病毒活性：誘導抗病毒蛋白： ? 25A合成酶 催化寡核苷酸 PPP活化 RNaseL降解病毒 RNA； ? 蛋白激酶 PKR肽起始因子 eIF2磷酸化而滅活，抑制病毒蛋白的合成。 TRF3 ( Tcell replacing factor3 )。 PFCEA ( plaque forming cell enhancing factor )。 32 35(均為異源二聚體結(jié)構(gòu) ) ? IL17家族： IL17A、 B、 C、 D、 E和 F[1]。 20 9 細胞因子的分類 根據(jù)產(chǎn)生細胞因子的細胞種類分類： 淋巴因子 (lymphokines) 單核因子 (monokines) 非淋巴因子、非單核因子 /巨噬細胞產(chǎn)生的細胞因子：基質(zhì)、血管內(nèi)皮、成纖維細胞等 根據(jù)細胞因子的結(jié)構(gòu)和功能分類 白細胞介素 (Interleukin, IL) 集落刺激因子 (ColonyStimulating Factor, CSF) 干擾素 (Interferon, IFN) 腫瘤壞死因子 (TumorNecrosis Factor, TNF) 趨化因子 (Chemokine, CK) 生長因子 (Growth Factor, GF) 轉(zhuǎn)化生長因子家族（ TGFb) (Interleukin, IL) 1979年第二屆國際淋巴因子專題討論會上命名的，將由白細胞產(chǎn)生的又在白細胞之間發(fā)揮作用的細胞因子統(tǒng)一命名為白細胞介素，正式命名的有 IL1IL35。 細胞因子研究歷史 ? 1957年，發(fā)現(xiàn)干擾素（ IFN） ? 1969年，提出淋巴因子（ lymphokine）的概念 ? 1974年，定名細胞因子（ cytokine） ? 近年來，細胞因子發(fā)展迅猛，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn) 200多種細胞因子，成立專門的細胞因子學會，如國際細胞因子學會（ international cytokine society）；創(chuàng)辦研究細胞因子的專門雜志，如 《 Cytokine》 等。 篩選潛在的細胞因子的策略 ? 未知蛋白的生物信息學分析： – 無功能性文章報道或無免疫相關(guān)的功能性報道 – 具有潛在的信號肽或被證實為分泌蛋白 – 蛋白氨基酸數(shù)目少于 300個 – 主要在免疫系統(tǒng)和造血系統(tǒng)中表達 5 獲得的基因， ORF克隆連接在真核表達載體 轉(zhuǎn)染 293T細胞，檢測其分泌表達 ? 正常細胞： – 未活化時，產(chǎn)生很少； – 活化后，產(chǎn)量可提高成百上千倍；如活化的淋巴細胞、活化的單核 /巨噬細胞、 NK細胞、成纖維細胞、上皮細胞、內(nèi)皮細胞等。 33 ? IL2 家族： IL2 30 29 (結(jié)構(gòu)相似 ) ? IL12 家族 IL12 11 ? IL8（趨化因子） ? 其它 IL： IL 13 LMF ( lymphocyte mitogenic factor )。 TMF ( thymocyte mitogenic factor )。 ? 1957年從病毒感染細胞培養(yǎng)中分離到一種生物活性物質(zhì)，因它可以干擾其它病毒的復制而被命名為干擾素。 病毒 病毒復制 抑制病 毒復制 信號轉(zhuǎn)導 IFNa IFN誘導蛋白 誘導刺激 胞核 胞核 I型干擾素 α：抗病毒 10 –12 g干擾素能在培養(yǎng)組織中保護一百萬個細胞免受一千萬個病毒顆粒的感染 ? IFN與臨床： ? 自身免疫?。捍傺?/抑炎，一些實驗表明 IFNγ 通過抑制 Th17的分化，從而調(diào)節(jié)炎癥和自身免疫性疾病。 ? 與自身免疫?。? ? 與腫瘤：引起腫瘤組織缺氧，血管損傷和血栓形成，誘發(fā)局部炎癥，促進 T細胞、 NK細胞和巨噬細胞的細胞毒作用，提高宿主免疫力，抑制腫瘤生長。 幾乎所有腫瘤細胞均可檢測到 TGFβmRNA 。 ? EMT的生物學意義： ? 發(fā)育 ? 腫瘤 ? 器官纖維化等 上皮間質(zhì)變遷與癌細胞演變 癌癥的傳統(tǒng)定義是上皮組織的惡性細胞病變。 ? TNFR I（ P55， CD120a）：胞內(nèi)同源序列即 “ 死亡結(jié)構(gòu)域 ” ? TNFR II（ P75， CD120b）不含死亡結(jié)構(gòu)域 L 腫瘤壞死因子受體可發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用 ? 腫瘤壞死因子受體家族的 CD40和 FAS具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用 : – CD40 B細胞，巨噬細胞 – CD40L， FASL效應 T細胞 – CD40L+B細胞 CD40— B細胞增生， Ig類別轉(zhuǎn)換 – CD40L+巨噬細胞 CD40巨噬細胞分泌 TNF – FAS+FASL表達 FASL的 CTL可清除表達 FAS的淋巴細胞，這是一種重要的免疫應答的負反饋調(diào)節(jié)機制。 (sCKR) ? 產(chǎn)生方式： – 大部分為膜受體脫落，如 SIL1R、 SIL 2R、 sTNFR、sIFNrR、 sGMCSFR、 sIL5R、 sIL6R等 – 小部分為分泌型，如 sIL4R、 sGCSFR、 sIL5R、 sIL6R ? 生物學活性： – 膜受體正常代謝途徑 – 膜受體相應配體 “ 競爭抑制劑 ” ? 應用： – 檢測，治療 sCKR與臨床： ? 檢測： – sIL2R：惡性腫瘤、自身免疫性疾病、病毒感染與其他傳染性疾病、移植排斥反應等 – sIL6R：炎癥與自身免疫性疾病、感染性疾病、腫瘤和白血病等 – sTNFR：炎癥與自身免疫性疾病、感染性疾病、腫瘤和白血病、骨髓移植等 ? 治療 ： ? 大多數(shù) sCKR與細胞因子結(jié)合后阻斷細胞因子與膜受體結(jié)合，從而抑制細胞因子的生物學活性。 淋巴樣干細胞： IL7。 （ 6） γδ T：激活（ IL1， 7， 12， 15）。如 IL 1 1 TNFα 、 IFNγ 等。於 37℃ CO2 培 養(yǎng) 箱 2天後，加入 1 μCi/well 3H胸腺嘧啶（ thymidine） ， 繼續(xù)培養(yǎng) 8小 時后 ，以 cell harvester 收集 細 胞 于濾紙 上， 風干后 以 閃爍計數(shù)儀測 3Hthymidine 含量， 計算細胞增殖 能力。 ? 腫瘤細胞遷移實驗 、 ，上室種腫瘤細胞，下室加入 FBS或某些特定的趨化因子，腫瘤細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑，計數(shù)進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的遷移能力。 ： DAB389IL2免疫毒素治療 T細胞淋巴瘤