rgkaaa細(xì)胞凋亡與免疫-免費(fèi)閱讀
【正文】 一切動(dòng)植物的生長(zhǎng)發(fā)育都是依靠細(xì)胞增殖 、 分化與凋亡來實(shí)現(xiàn)的 。 目前 ,流式細(xì)胞儀常用作群體細(xì)胞凋亡的定量分析 ,但在檢測(cè)中的漏檢率和錯(cuò)檢率都很高。將 AnnexinV進(jìn)行熒光素（ FITC、 RPE）或 biotin標(biāo)記，以標(biāo)記了的 AnnexinV作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡以及共聚焦激光掃描顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。測(cè)定方法主要有 流式細(xì)胞儀 檢測(cè)法、 蛋白印跡法 及 免疫組織化學(xué)染色法 等。 75 76 77 ? 缺點(diǎn) : ? ① 只能標(biāo)記中期及晚期的凋亡細(xì)胞。 DNA ,則在 3′端出現(xiàn)一段帶有標(biāo)記物的寡核苷酸 ,通過 熒光顯示或其他顯色反應(yīng) ,可以 原位地較特異地顯示發(fā)生凋亡的細(xì)胞 。此外 ,用電子顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞凋亡 ,樣品制備步驟繁瑣、耗時(shí)、昂貴。 61 62 ? ? 2） 熒光顯微鏡觀察： ? 熒光染料吖啶橙 (AO) 、碘化丙啶 (PI) 、溴化乙錠 (EB) 等染色 ,在熒光顯微鏡下可觀察到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核改變和凋亡小體的形成。 AICD ? T細(xì)胞 53 ? B細(xì)胞 ? （ 1）凋亡與骨髓中 B細(xì)胞發(fā)育： ? （ 2）凋亡與成熟 B細(xì)胞 54 ? ： ? 有胞毒作用的淋巴細(xì)胞主要有 CTL、 NK、 LAK細(xì)胞等。 ? 成熟的 Smac蛋白產(chǎn)生一個(gè)新的 N基端 ,這個(gè)N基端的前面 4個(gè)氨基酸可以與 lAP的 BIR結(jié)構(gòu)域結(jié)合。 35 死亡受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) (1).參與死亡受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的接頭蛋白 ： （ 死亡結(jié)構(gòu)域蛋白 death domain protein） ? TRADD： TNF受體相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白 TNF+TNFRI（死亡結(jié)構(gòu)域） + TRADD 細(xì)胞凋亡 ? FADD： Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白 FasL+Fas （死亡結(jié)構(gòu)域） +FADD 細(xì)胞凋亡 ? RIP：受體相互作用蛋白 ? CRADD：含有死亡結(jié)構(gòu)域的 caspase和 RIP接頭蛋白 ? MADD：活化 MAP激酶的死亡結(jié)構(gòu)域蛋白 36 (2).死亡受體通路 受體多聚化和構(gòu)像改變 死亡受體 /配體/FADD/Caspase8或 10 +FADD ?FASL+FAS ?凋亡誘導(dǎo)復(fù)合物（ DISC） ?胞質(zhì)中游離的 caspase8聚集到這個(gè)復(fù)合物上 細(xì)胞有足夠 caspase8 細(xì)胞 caspase8濃度不夠 死亡受體活化， 細(xì)胞凋亡 切割 Bid tBid從胞質(zhì)到線粒體 CtyC 釋放 線粒體途徑 37 FasL/ /Fas 38 (3).死亡受體途徑的調(diào)控機(jī)制 ? FLIP [FADDlikeIL1βconvertingenzyme(FLICE) inhibitory protein] ? 近年發(fā)現(xiàn)的含 DED的凋亡抑制蛋白 ? 廣泛存在于真核生物、哺乳動(dòng)物細(xì)胞和病毒中 ? 包括：病毒基因編碼的 FLIP(vFLIP) ? 細(xì)胞 FLIP(cFLIP):cFLIPS或 cFLIPL ? 功能：抑制 Caspase8結(jié)合到 DISC上，從而抑制 起始 Caspase激活。 ? 破壞細(xì)胞抗凋亡因素 ? 破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu) ? 影響核酸的結(jié)構(gòu)與功能 ? Caspase的效應(yīng)機(jī)制 32 破壞細(xì)胞抗凋亡因素 ? 正?；罴?xì)胞內(nèi)核酸酶處于無活性狀態(tài) 。 15 細(xì)胞凋亡時(shí)的形態(tài)學(xué)變化 16 ? 細(xì)胞凋亡 與 細(xì)胞壞死 特征 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞壞死 誘導(dǎo)因素 生理及弱刺激 強(qiáng)烈刺激 受累范圍 單個(gè) 細(xì)胞丟失 成群細(xì)胞死亡 膜完整性 保持到晚期 早期即喪失 細(xì)胞體積 減少 、 固縮 增大腫脹 染色質(zhì) 凝聚成半月形 稀疏成網(wǎng)狀 細(xì)胞器 無明顯變化 腫漲破壞 溶酶體 保持完整 破壞外溢 細(xì)胞形狀 形成凋亡小體 破裂成碎片 基因組 DNA 有控降解 隨機(jī)降解 大分子合成 一般需要 不需要 基因調(diào)控 有 無 后果 不引起炎癥反應(yīng) 引起炎癥反應(yīng) 意義 生理死亡方式 病理死亡方式 17 18 19 DNA 39。 Sculpting the digits in the developing mouse paw by apoptosis. Tissue remodeling. The resorption of the tadpole tail at the time of its metamorphosis into a frog occurs by apoptosis. Elimination of transitory ans and tissues. 細(xì)胞凋亡參與皮膚更新 2. 細(xì)胞凋亡的生物學(xué)特征 ? 形態(tài)學(xué)變化 ? 生物化學(xué)變化 胞內(nèi) Ca++濃度增高 DNA片段化 大分子的合成 (凋亡相關(guān)蛋白質(zhì)及 RNA合成） tTG（組織轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶）的積累并達(dá)到較高的水平。 大多數(shù)情況下程序性細(xì)胞死亡是以凋亡的方式進(jìn)行，但并不是所有的程序性死亡都采取凋亡的方式。 2 主要內(nèi)容 ? 細(xì)胞凋亡概述（ 基本概念、意義、 生物學(xué)特征、調(diào)節(jié)、信號(hào)傳遞等） ? 細(xì)胞凋亡與免疫生理 ? 細(xì)胞凋亡與免疫病理 ? 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法 ? 細(xì)胞凋亡研究相關(guān)展望 3 一 細(xì)胞凋亡概述 1. 基本概念及生物學(xué)意義 ： 凋亡（ apoptosis） 一詞于 1972年 Kerr（英國(guó)阿伯丁大學(xué)病理學(xué)教授） 引入，是一個(gè)希臘語(yǔ)合成詞 ,原意指花瓣或樹葉的自然脫落（ Apo脫落＋ ptosis飄零=Apoptosis）。因此 對(duì)細(xì)胞凋亡的研究有助于某些疾病的闡明與治療 。 ? 細(xì)胞凋亡 與 細(xì)胞程序性死亡 細(xì)胞程序性死亡 （ programmed cell death， PCD） PCD最初是 1956年發(fā)育生物學(xué)中提出的概念，是個(gè)功能性概念，一般指生理性細(xì)
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