植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告-免費(fèi)閱讀
【正文】 5) 吸取營養(yǎng)液、細(xì)胞懸液及其它各種用液時(shí)，均應(yīng)分別使用吸管，不能混用，以防擴(kuò)大污染或?qū)е录?xì)胞交叉污染。注意外植體也不要放得太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。如圖所示，隨NAA濃度的增加，波斯菊生根越多，長勢越好(七) 生芽實(shí)驗(yàn)(2016/5/6)1. 生芽培養(yǎng)基配制（方法同（二）培養(yǎng)基的配制與滅菌）生芽培養(yǎng)基（MS）組別6BANNA貯備液Ⅰ貯備液Ⅱ貯備液Ⅲ貯備液Ⅳ蔗糖瓊脂一5%%15g5g二5%%三4%%四4%%2. 無菌苗和外植體的處理（同上）1) 無菌苗處理從培養(yǎng)瓶中取出無菌苗，用無菌水洗凈培養(yǎng)基，葉片較大的進(jìn)行裁剪，置于無菌培養(yǎng)皿備用；2) 外植體處理a 將野外植物洗干凈塵土并用洗衣粉刷干凈；b 將洗凈植物除葉留芽，切成長約2 cm，流水沖洗30min；c 將外植體置于培養(yǎng)瓶中，用75%酒精持續(xù)消毒滅菌18s，然后用無菌水沖洗d 用1%升汞處理12~15min，然后用無菌水沖洗3~4次，放入無菌培養(yǎng)皿中，置于酒精燈火焰下方，用無菌解剖刀切去兩端后進(jìn)行接種。移液管不能灼燒，培養(yǎng)瓶口、塑料材料、橡膠材料過火焰不能時(shí)間太長。使用氨水應(yīng)在工作前2小時(shí)進(jìn)行。甲醛的用量通常按每立方米空間26毫升計(jì)算，高錳酸鉀的用量是甲醛的一半。在98 kPa、 ℃下，滅菌20 min。5) 培養(yǎng)基分裝完畢后，應(yīng)及時(shí)封蓋瓶口。然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸餾水定容至500 mL，攪拌均勻。6H2O 0. 25 表11) 每種母液中的幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，定容。7H2O500mLFeSO4此外，它還能顯著改善其他激素。常用的植物組培激素種類主要有生長素類、細(xì)胞分裂素類、赤霉素。瓊脂的用量一般在4—10克／升之間。用于進(jìn)行組織培養(yǎng)的組織、器官和細(xì)胞稱為外植體。在組培中外植體都死帶菌的，在接種前必須進(jìn)行表面消毒，這時(shí)取得培養(yǎng)成功的最基本和重要的前體。瓊脂的凝固能力除與原料、廠家的加工方式等有關(guān)外，還與高壓滅菌時(shí)的溫度、時(shí)間、pH值等因素有關(guān)，長時(shí)間的高溫會(huì)使凝固能力下降，過酸過堿加之高溫會(huì)使瓊脂發(fā)生水解而喪失凝固能力，存放時(shí)間過久，瓊脂變褐，也會(huì)逐失去凝固能力。1) 生長素的生理作用主要是促進(jìn)細(xì)胞分裂和生長，有利于外植體脫分化并啟動(dòng)細(xì)胞分裂，有利于形成愈傷組織。離體培養(yǎng)中，細(xì)胞分裂素能夠促進(jìn)不定芽的發(fā)生，與生長素協(xié)調(diào)使用能有效調(diào)控培養(yǎng)物的生長與分化。7H2O 278 100mLNH4NO3 Na2EDTA2) 貯備液III需加熱溶解。3) 調(diào)pH：用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時(shí)用精密的pH試紙（～）測培養(yǎng)基的pH，（）。最后在組培瓶外壁貼上標(biāo)簽。滅菌后取出培養(yǎng)瓶，讓其中的培養(yǎng)基自然冷卻凝固。室內(nèi)準(zhǔn)備妥當(dāng)后，把稱好的高錳酸鉀放在瓷碗或燒杯內(nèi)(最好在碗或杯下面鋪一張報(bào)紙，以利清洗)，然后將甲醛也倒入碗或杯內(nèi)，立即出屋關(guān)門。對(duì)有材料的培養(yǎng)室，也可以采用乙二醇加熱熏蒸2. 準(zhǔn)備組培室將組培室打掃干凈，調(diào)至適宜溫度3. 超凈工作臺(tái)處理1) 材料準(zhǔn)備用75%酒精擦拭，準(zhǔn)備好超凈工作臺(tái)內(nèi)物品，包括酒精棉球、75%和90%酒精、廢液缸、打火機(jī)、酒精燈、支架、鑷子、解剖刀、解剖剪等2) 滅菌處理實(shí)驗(yàn)開始前先用75%酒精擦拭工作臺(tái)面，然后開啟紫外燈，紫外照射20min30min。(四) 無菌苗的培養(yǎng)(2016/3/11)1. 培養(yǎng)基配制（方法同（二）培養(yǎng)基的配制與滅菌）種子的萌發(fā)采用1/2MS培養(yǎng)基1/2MS培養(yǎng)基貯備液Ⅰ貯備液Ⅱ貯備液Ⅲ貯備液Ⅳ蔗糖瓊脂15g5g2. 馬齒莧（番茄）種子處理1) 洗去浮塵和上漂的種子，挑選飽滿種子，置于培養(yǎng)瓶中流水沖洗30min后倒掉水備用；2) 將種子置于培養(yǎng)瓶中，用75%酒精消毒滅菌30~60s，用無菌水沖洗干凈；3) 用1%升汞處理8~10min，然后用無菌水沖洗3~4次，放入無菌培養(yǎng)皿中，置于酒精燈火焰下方，用無菌接種器械進(jìn)行分離接種。3. 接種及培養(yǎng)（同無菌苗的建立）4. 剔除長菌嚴(yán)重的培養(yǎng)瓶，其余繼續(xù)培養(yǎng)5. 觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)結(jié)果：組別材料染菌率枯死率
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