【正文】 原料藥效價(jià)測定一般需做雙份樣品平行試驗(yàn)，以使核對(duì)。4:1時(shí)，I=。 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 效價(jià)計(jì)算 按下式計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率b和截距a，從而得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線行性方程。在該品種項(xiàng)下規(guī)定的劑量反應(yīng)線性范圍內(nèi)，選擇2個(gè)或3個(gè)劑量，劑量間的比例應(yīng)適宜（二劑量通常為2:1或4:1，三劑量通常為1:）。 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 標(biāo)準(zhǔn)品溶液 按中國藥典該品種含量測定項(xiàng)下的要求，制成一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。目前，已有一些種類的市售干燥培養(yǎng)基，如營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，改良馬丁培養(yǎng)基等，使用方便。 分光光度計(jì)用吸收池 方形玻璃吸收池或石英吸收池，透光面1cm，用硝酸－硫酸混合液（取濃硫酸95ml，加濃硝酸3～5ml，混勻）浸泡1～48小時(shí)（浸泡時(shí)間視是否能去除附著污物而定），先后用水、去離子水（蒸餾水）沖洗干凈，晾干，備用。 玻璃大試管 ，應(yīng)大小一致，厚薄均勻，玻璃質(zhì)地相同，使用同一品牌和批號(hào)。個(gè)別品種標(biāo)準(zhǔn)如同時(shí)收載了糖衣片和薄膜衣片，可能規(guī)定薄膜衣片也取整片制備供試品溶液。 水針劑（注射液） 即抗生素的滅菌水溶液，標(biāo)示量一般按每毫升含效價(jià)單位計(jì)。9 操作要點(diǎn) 不含輔料的藥物制劑原料，一般其效價(jià)以純度（u/mg或181。 可信限率 考核試驗(yàn)的精密度。4:1時(shí)，I=。 滴加完畢，用陶瓦蓋覆蓋雙碟，平穩(wěn)置于雙碟托盤內(nèi)，雙碟疊放不可超過3層，以免受熱不均，影響抑菌圈大小。鋼管放妥后，應(yīng)使雙碟靜置5～10分鐘，鋼管在瓊脂上沉穩(wěn)后，再開始滴加抗生素溶液。 雙碟制備 雙碟的制備應(yīng)在半無菌室或潔凈室內(nèi)進(jìn)行，并注意避免微生物及抗生素的污染。 用于溶解及稀釋標(biāo)準(zhǔn)品或供試品的容量瓶和移液管等玻璃量器，應(yīng)按“常用玻璃量器國家計(jì)量檢定規(guī)程”進(jìn)行標(biāo)定，符合A級(jí)的要求。 供試品與標(biāo)準(zhǔn)品 的稱量應(yīng)使用用一架天平；對(duì)于吸濕性較強(qiáng)的抗生素，應(yīng)在稱量前1～2小時(shí)更換天平內(nèi)干燥劑。 藤黃微球菌[Micrococcus luteus CMCC（B）28 001]懸液 取藤黃微球菌工作用菌種營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，用1ml培養(yǎng)基Ⅲ將菌苔洗下，用吸管移至盛有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的扁培養(yǎng)瓶中，均勻攤布，將培養(yǎng)瓶倒置于培養(yǎng)箱中26～27℃培養(yǎng)24小時(shí)取出，用吸管吸取培養(yǎng)基Ⅲ%滅菌氯化鈉溶液5ml至培養(yǎng)瓶中，將菌苔洗下，合并菌液至滅菌大試管中備用。培養(yǎng)后放入4℃冷藏箱內(nèi)保存，一般1～3個(gè)月轉(zhuǎn)種一次。 菌種的接種與保存 準(zhǔn)備需用的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基應(yīng)新鮮制備，如斜面已無冷凝水者，不宜再使用。另外，市售干燥培養(yǎng)基的質(zhì)量也存在差異，注意選擇合適的產(chǎn)品。12H2O），加水使成1000ml，濾過。 抑菌圈直徑（面積）測量儀 應(yīng)符合“抑菌圈測量儀檢定規(guī)程”的規(guī)定。洗滌瀝干后在吸口處塞入脫脂棉（松動(dòng)，透氣），置適宜容器中，在120℃以上干熱滅菌2小時(shí)或121℃蒸氣滅菌30分鐘，烘干備用。雙碟升降平穩(wěn)。）mm，高（177。半無菌操作室應(yīng)設(shè)有紫外線滅菌燈，并附設(shè)空氣凈化（空氣凈化級(jí)別為100級(jí)～10，000級(jí)）及空調(diào)設(shè)備，控制室溫在20～25℃之間，達(dá)到無菌或半無菌狀態(tài)。中國藥典也采用這兩種方法。抗生素微生物檢定管碟測定法系瓊脂擴(kuò)散法，是利用抗生素在攤布特定試驗(yàn)菌的固體培養(yǎng)基內(nèi)成球面形擴(kuò)散，形成含一定濃度抗生素球形區(qū)，抑制了試驗(yàn)菌的繁殖而呈現(xiàn)出透明的抑菌圈。操作臺(tái)應(yīng)穩(wěn)固，臺(tái)面用玻璃板，并用水平儀調(diào)節(jié)至水平。）mm；外徑（177。應(yīng)保持清潔，防止抗生素污染。 玻璃容器 包括定量移液管、刻度吸管、容量瓶等，均應(yīng)符合“常用玻璃量器國家計(jì)量檢定規(guī)程”的規(guī)定。 游標(biāo)卡尺 ，長度125mm。 磷酸鹽緩沖液（） ，加水使成1000ml，濾過。5 試驗(yàn)菌 菌種的復(fù)蘇 檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌種為冷凍干燥品，由中國藥品生物制品檢定所提供。在標(biāo)簽上注明菌名及接種日期。 菌懸液的制備 枯草芽孢桿菌[Bacillus subtilis CMCC（B）63 501]懸液 取枯草芽孢桿菌工作用菌種營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，加滅菌水1～2ml將菌苔洗下，制成懸液，用吸管將此懸液接種至盛有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的扁培養(yǎng)瓶內(nèi)，均勻攤布，在35～37℃培養(yǎng)7天。置4℃冰箱中保存，可使用1～2個(gè)月。 標(biāo)準(zhǔn)品與供試品的稱量盡量一次取樣稱取，不得將已取出的稱取物倒回原容器內(nèi)。每步稀釋，量取量不得少于2ml，稀釋步驟一般不超過3步。培養(yǎng)基應(yīng)在水浴中或微波爐內(nèi)融化，避免直火加熱。 滴加抗生素溶液 每批供試品取不少于6個(gè)雙碟，滴加溶液用滅菌毛細(xì)滴管或微量加樣器（調(diào)節(jié)加樣量約為200～300181。將雙碟托盤水平平穩(wěn)地移入培養(yǎng)箱中間位置，在35～37℃或該藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的溫度下培養(yǎng)至所需時(shí)間。舉例 乳糖酸紅霉素效價(jià)測定結(jié)果計(jì)算（見表1）表1 抑菌圈面積測量結(jié)果 抑菌圈面積碟數(shù) S1 S2 T2 T11 1571 1276 1581 12682 1481 1199 1523 11733 1523 1302 1497 12634 1518 1214 1533 12265 1573 1237 1543 12686 1546 1219 1580 12247 1495 1260 1526 12408 1530 1237 1548 12639 1605 1256 1593 129310 1649 1272 1608 1320∑ 15491 12472 15532 12528估計(jì)效價(jià)（AT）=603u/mg劑距（I）=P=log1[15532+125281549112472 ]100%=%15491+155321247212528效價(jià)（PT）=PAT=603u/mg%= 三劑量法計(jì)算公式P=log1[（T3+T2+T1－S3－S2－S1）]100% S3+T3－S1－T1式中 S3為標(biāo)準(zhǔn)品高濃度所致抑菌圈直徑（或面積）的總和； S2為標(biāo)準(zhǔn)品中間濃度所致抑菌圈直徑（或面積）的總和； S1