【正文】 ? 用體重 140~160 g地鼠，用含 70%蔗糖、 %酪蛋白、5%麻油、 5%混合鹽、 10%微晶纖維素、 1%復(fù)合維生素和 %氯化膽堿的飼料喂養(yǎng) 6周，造模成功率為 80%。 膽結(jié)石 膽管結(jié)石 膽囊結(jié)石 2022/6/23 任立群 193 依據(jù)人類膽石形成的主要誘發(fā)因素，如 膽汁理化狀態(tài)的改變、膽汁淤滯、膽道感 染、膽道異物、代謝因素等，采用單一或復(fù) 合因素造模。 ? L精氨酸的劑量十分關(guān)鍵，應(yīng)先摸索劑量。 ? 除胰管逆行注射?；悄懰徕c外，還可注射自體膽汁、膽汁酸、胰酶等誘發(fā)急性胰腺炎。取血測定血清淀粉酶水平。 2. 上腹正中切口進(jìn)入腹腔，提起胃和十二指腸，顯露出胰腺，辨認(rèn)膽胰管走向，于肝門處用微型無損傷動(dòng)脈夾夾閉膽總管，以防藥液逆流進(jìn)入肝臟。 苯巴比妥加速 CCl4模型 2022/6/23 任立群 164 壞死后性肝硬化 2022/6/23 任立群 165 門脈性肝硬化 （假小葉） 靈長類肝小葉 2022/6/23 任立群 166 壞死后肝硬化（假小葉） 2022/6/23 任立群 167 A：正常肝小葉 (Mallory染色 )； B， C：肝硬化 (Masson trichrome) 2022/6/23 任立群 168 第 九 節(jié) 胰腺炎動(dòng)物模型 2022/6/23 任立群 169 引起胰腺自身消化 其他酶反應(yīng) 引起胰蛋白酶被激活的原因： （ 1）膽汁反流； （ 2）胰液分泌亢進(jìn)； （ 3）病毒感染、外傷、藥物等造成腺泡的損傷。該模型可靠， 復(fù)制時(shí)間較短，肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定，適合于肝纖 維化、肝硬化發(fā)生發(fā)展過程的動(dòng)態(tài)研究，是值得 應(yīng)用的一種模型。 酒精 酒精能增強(qiáng) CCl4的毒性作用，可直接引起肝細(xì)胞線粒體損傷。 結(jié) 果 CCl4肝纖維化肝硬化 模型 2022/6/23 任立群 151 二、四氯化碳復(fù)合因素模型 2022/6/23 任立群 152 ? 采 用皮下注射 CCl4，喂飼玉米面、高脂、高膽固醇食物和飲用酒精等復(fù)合因素復(fù)制肝纖維化肝硬化模型。動(dòng)物自由飲水進(jìn)食。 ? 藥物作用的觀察多采用預(yù)防給藥，即從注射 CCl4之前 3~4 d開始，每日 1次，連續(xù) 3個(gè)月。 ? Con A所致肝損害，無需預(yù)先致敏，一次性尾靜脈注射后 2 h即可見肝細(xì)胞損害， 8 h肝損害達(dá)高峰，制作快速、簡便。 ? 與 Con A誘發(fā)肝損害相關(guān)因素： T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞因子釋放。 ? 另取一塊肝組織做形態(tài)學(xué)檢查。 結(jié) 果 170~250gWisar大鼠 D半乳糖胺急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 127 ? D半乳糖胺與 CCl4所致肝損傷的組織學(xué)改變明顯不同。 3． CCl4是無色澄清的有毒液體，難溶于水，一般用花生油、橄欖油、豆油等植物油混合成所需濃度。 ? Cag A是 Hp 很重要的毒力因子，故本模型選用 Cag A 陽性 Hp 。 隨著時(shí)間的延長，炎癥細(xì)胞浸潤加重，可形成淋巴濾泡。 幽門螺桿菌胃潰瘍 2022/6/23 任立群 105 ? BALB/c小鼠： 在胃大彎竇部粘膜掛上帶有 腐蝕性藥物 的棉線，造成胃潰瘍，在此基礎(chǔ)上感染幽門螺桿菌，加重病變程度。 醋酸誘發(fā)慢性胃潰瘍 大鼠慢性胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 101 ? 形態(tài)觀察：甲醛固定后測量潰瘍面積，或用微量注射器注水測體積； ? 與干預(yù)措施有關(guān)的檢測：胃酸測定、胃蛋白酶消化力測定等。潰瘍一 般呈圓形、橢圓形或不規(guī)則形，中心凹陷，四周 微隆起，密布毛細(xì)血管。 （ 2）術(shù)后 24h給予受試藥。 ? 胃損傷程度與動(dòng)物體質(zhì)、禁食時(shí)間、吲哚美辛劑量、給予后的時(shí)間等有關(guān)。 ? 前列腺素 E通過增加粘液和碳酸氫鹽分泌、促進(jìn)粘膜血流增加、細(xì)胞保護(hù)等機(jī)制，在維持胃黏膜防御和修復(fù)功能中起重要作用。 利血平法致急性胃潰瘍 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 操作方法 2022/6/23 任立群 83 損傷主要發(fā)生在腺胃部，可呈條索狀出 血點(diǎn)、瘀血斑或糜爛灶。 也可參照下表進(jìn)行評分，以評分總和確定 損傷程度。 2. 細(xì)胞內(nèi)鈣超載和細(xì)胞凋亡。 結(jié) 果 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 70 Shay等創(chuàng)立的模型，方法簡單，潰瘍發(fā)生快，發(fā)生率達(dá) 97%，主要用于觀察藥物對潰瘍形成的預(yù)防作用?？p合腹壁切口，用紗布包扎切口。 2022/6/23 任立群 61 二、幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 62 幽門結(jié)扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度 胃液在胃中潴留，損傷胃黏膜造成胃潰瘍。中樞抑制劑、抗膽堿藥、制酸藥對其有明顯 對抗作用。 ? 水浸泡 7h后取出，處死動(dòng)物，立即開腹檢查。 多用雌性。 ? 本法胃黏膜萎縮的程度較綜合法輕，可加大氨水濃度和延長造模時(shí)間以加重病變。 ? 過碘酸 希夫（ PAS）染色 操作方法 注意事項(xiàng) ? 氨水要新鮮配制。 慢性胃炎 模型 2022/6/23 任立群 27 綜合法三 采用去氧膽酸鈉、酒精、氨水和吲哚 美辛等因素對胃黏膜進(jìn)行較長時(shí)間的刺激， 造成胃黏膜慢性損傷，形成慢性萎縮性胃炎。 ? 注意飼養(yǎng)、衛(wèi)生環(huán)境。 造模機(jī)制 慢性胃炎 模型 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 體重 200~250g 雄性 Wistar大鼠。 一、膽汁或?；悄懰峁辔阜晕秆啄Ｐ? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 用人膽汁與甘油（ v/v,1:1）的混合液灌胃，每周 1 次，每次 4ml，連續(xù)灌胃 10周后處死大鼠，切除全胃，用 10%甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋切片， HE染色和刀豆蛋 白 A異染，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，重點(diǎn)觀察幽門腺和胃底 腺的變化。本法取上部小腸的堿性腸液注入已結(jié)扎幽門的同種大鼠胃內(nèi)，使之對胃黏膜產(chǎn)生持續(xù)刺激，形成胃炎。 胃黏膜表面有淺表糜爛、出血，粘膜層內(nèi)見中性粒細(xì)胞浸潤。 4. 肉眼觀察并計(jì)數(shù)整個(gè)胃黏膜出血點(diǎn)數(shù)，作為損傷指數(shù)。 2022/6/23 任立群 15 慢性萎縮性胃炎模型 2022/6/23 任立群 16 三、 大鼠慢性萎縮性胃炎模型 ? 病因 :酗酒、用藥不當(dāng)、飲食習(xí)慣不良、幽門螺桿菌感染、自身免疫。 陽性對照藥可用維酶素， ，或三九胃泰，2~4g/kg體重，灌胃給予。 ? 熱糊灌胃 :每隔 1d灌胃給予 55℃ 熱糊 10ml/kg體重，連續(xù) 90d。 慢性胃炎 模型 2022/6/23 任立群 29 體重 180~220g Wistar大鼠。同時(shí)測定下列指標(biāo)： 檢測指標(biāo) 慢性胃炎 模型 2022/6/23 任立群 35 檢測指標(biāo) 1 胃腺管長度 2 胃黏膜 PAS染色陽性層厚度測量 pH值測定 4 3 壁細(xì)胞計(jì)數(shù) 慢性胃炎 模型 2022/6/23 任立群 36 檢測指標(biāo) 1 胃腺管長度 2 胃黏膜 PAS染色陽性層厚度測量 pH值測定 4 3 壁細(xì)胞計(jì)數(shù) 烏拉坦腹腔注射麻醉下開腹，在腺 胃部開一個(gè)小口，將 pH計(jì)玻璃電極 插入胃內(nèi)測量胃體部及幽門部胃黏 膜表面 pH值。 ? 潰瘍的形成主要由于 防御因素 和 致潰瘍因素 的平衡失調(diào)所致。 ? 胃的固定及處理。 應(yīng)激性胃潰瘍模型 操作方法 2022/6/23 任立群 54 水浸 3h，胃黏膜即發(fā)生損傷； 7~8h胃黏膜可出現(xiàn)多發(fā)性、出血性糜爛小點(diǎn)； 20h胃黏膜病變相當(dāng)嚴(yán)重，但潰瘍改變不超過粘膜肌層，且以 腺胃 （含胃體和胃竇）為重。 。在左側(cè)肋緣部位用手指輕輕上推暴露胃。 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 66 病變程度的評價(jià) 2— 潰瘍指數(shù) 可計(jì)數(shù) 前胃 部潰瘍面積，以其總和作為潰瘍指數(shù)。 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 模型評價(jià)與注意事項(xiàng) ，動(dòng)物應(yīng)預(yù)先給 藥或同時(shí)給藥，若粗制劑可采用灌胃給藥，應(yīng)確 認(rèn)胃內(nèi)已排空后方能結(jié)扎幽門。 乙醇法致急性胃潰瘍 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 操作步驟 2022/6/23 任立群 77 15min后即可造成明顯的胃黏膜損傷， 且時(shí)間越長損傷越嚴(yán)重。 利血平法致急性胃潰瘍 造模機(jī)制 利血平是外周交感神經(jīng)阻滯藥 2022/6/23 任立群 82 體重 160~180g的 Wistar大鼠，雄雌各半。大劑量吲哚美辛顯著抑制環(huán)氧合酶活性，致使胃黏膜防御因素減弱而形成潰瘍。此溶液為等張溶液， pH值 ~。 醋酸浸漬法 2022/6/23 任立群 93 禁食不禁水 24h，醚麻，開腹暴露胃。 也可在腺胃部前壁的竇體交界處將內(nèi)徑 5mm、長 30mm的玻璃管垂直放置于漿膜面上，向管腔內(nèi)加入冰醋酸，使其接觸漿膜面 。 醋酸誘發(fā)慢性胃潰瘍 2022/6/23 任立群 98 注意事項(xiàng) ? 操作過程應(yīng)嚴(yán)格消毒，籠具也應(yīng)消毒，以免術(shù)后感染，影響藥物的觀察治療。 幽門螺桿菌胃潰瘍 造模機(jī)制 2022/6/23 任立群 104 ? 單純 給動(dòng)物灌服一定量的 Hp菌液，只能在感染動(dòng)物的胃黏膜造成炎癥反應(yīng)，很少引起胃黏膜破損、潰瘍。 ? 胃黏膜肉眼觀察 感染后第 8周未見胃黏膜糜爛、出血和潰瘍等病變。 ? 為便于資料間的比較，最好使用目前國際公認(rèn)的 Hp NCTC 11637菌株。 結(jié) 果 CCl4急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 115 1. 根據(jù)所用 CCl4劑量和時(shí)間的不同，肝臟的損傷程度不同 ； 2. 一般在給予 CCl4后 16~24 h血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ AST）活性升高，并能反映肝損傷的程度 ； 3. 形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為 肝小葉中央?yún)^(qū)壞死和脂肪變性。 模型評價(jià)與注意事項(xiàng) CCl4急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 123 二、 D半乳糖胺急性肝損傷模型 2022/6/23 任立群 124 ? D半乳糖胺是肝細(xì)胞磷酸尿嘧啶核苷的干擾劑，進(jìn)入體內(nèi)后與磷酸尿苷結(jié)合，形成磷酸尿苷 半乳糖胺復(fù)合物，致使磷酸尿苷耗竭，從而使依賴其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物質(zhì)的合成受抑制，限制了細(xì)胞器及酶的生成和補(bǔ)充，細(xì)胞器、生物膜受損、鈣離子內(nèi)流，從而造成肝細(xì)胞損傷。 造模機(jī)制 硫代乙酰胺急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 130 ? 硫代乙酰胺，劑量一般按 50~200 mg/kg體重，腹腔注射。 ? 長時(shí)間喂飼小劑量硫代乙酰胺可造成慢性肝損傷模型，也可在食物和飲水中加入一定量硫代乙酰胺， 2周后出現(xiàn)肝細(xì)胞變性，甚至出現(xiàn)肝硬化或肝癌。 ? 光鏡下可見肝內(nèi)大量 T淋巴細(xì)胞浸潤，在門管區(qū)尤為明顯，部分門管區(qū)淋巴細(xì)胞浸潤呈“套袖”樣改變，肝竇內(nèi)紅細(xì)胞淤積。 造模機(jī)制 CCl4慢性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 139 ? 每周皮下注射遞增濃度的 CCl4（劑量為 ml/kg） 1次，濃度由低向高逐漸增加，依次為 5%、 10%、 20%和 30%，每 2~3周遞增一個(gè)濃度，連續(xù) 3個(gè)月。 肝纖維化的形成，主要是由于肝星狀細(xì)胞激活，ECM成分生成過多，降解相對不足，膠原等 ECM在肝內(nèi)大量沉積所致。 ? 第 6周 ： 肝臟纖維間隔進(jìn)一步增厚，有假小葉形成。 CCl4復(fù)合因素 模型 2022/6/23 任立群 154 玉米面 蛋白質(zhì) 含量只 能滿足 大 鼠正常蛋白質(zhì)需要量的一半，且缺乏色氨酸和蛋氨酸，這些氨基酸均屬于趨脂物質(zhì)，它們的缺乏會(huì)導(dǎo)致肝脂肪變，以致纖維化。 ? 第 4周為纖維增生改變，除肝細(xì)胞變性壞死外，肝內(nèi)開 始有纖維間隔形成。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 操作步驟 苯巴比妥加速 CCl4模型 2022/6/23 任立群 162 給予 CCl4后 8~10周形成小結(jié)節(jié)型肝硬化，死亡率在 40%左右； 16~20周可復(fù)制肝硬化腹水模型，腹水成功率高達(dá) % ，但動(dòng)物死亡率較高，有時(shí)達(dá) %。但當(dāng)膽總管阻塞時(shí)，膽道內(nèi)的膽汁可被壓入主胰管，引起急性胰腺炎。 。 結(jié) 果 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 177 ? 本模型在病因、發(fā)病機(jī)制及胰腺病變等方面與人類急性胰腺炎相似，是目前被公認(rèn)的、比較常用的復(fù)制急性胰腺炎的方法。 ? 光鏡檢查 ：注射后 12h，胰腺輕度充血水腫， 24h明顯充血， 48h胰腺實(shí)質(zhì)大片凝固性壞死，間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤，72h 胰腺組織模糊。常為單個(gè)，體積較大，歐美多見