【正文】 陽性室內(nèi)質(zhì)控品：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已 知或未知濃度的陽性室內(nèi)質(zhì)控血清。 b） 觀察是否有光路傳導(dǎo)阻滯或電壓波動(dòng)等機(jī)器原因形成的異常曲線。 點(diǎn) Instrument 可在此頁面設(shè)定熱循環(huán)參數(shù)。 接著打開 PCR儀電源 開關(guān)，預(yù)熱 5分鐘。 b） 環(huán)境溫度保持 68 在 23℃左右，濕度保持在 60％左右。 蓋上燈罩，擰緊螺絲，關(guān)上燈艙門。 關(guān)閉儀器，冷卻 15 分鐘。 測定一個(gè)合乎標(biāo)準(zhǔn)的背景熒光水平。 檢查樣品槽的熒光污染 檢查樣品槽的熒光污染每月 29 日進(jìn)行一次，如有需要隨時(shí)進(jìn)行。如果 ROIs 不能校正，重復(fù) e～ f步。 從 Instrument菜單選擇 Calibrate。 運(yùn)行 25℃ HOLD 程序使樣品槽溫度達(dá)到室溫。 2. 適用范圍 : ABI 7500 型擴(kuò)增儀 3. 操作人員 : 鄭建建 等。 ? 取上清液 500ul，加入等量的異丙醇。 3. RNA 提取 ? 溶血：加 300ul 的肝素或 EDTA 二鈉抗凝的全血到含 RBC Lysis Solution 900ul 的 EP 管 , 室溫靜置 1min,期間，輕輕顛倒混勻 10次。待膠完全凝固后撥出梳子 ,注意不要損傷梳底部的凝膠，然后向槽內(nèi)加入 TBE 稀釋緩沖液至液面恰好沒過膠板上表面。l Taq 酶 1U 最后加入 %DEPC水補(bǔ)充至 23181。 RTmix 的配制 ： 4 dNTPs 2181。 5. 每一個(gè)標(biāo)本必須使用新的帶濾芯的消毒吸嘴。對(duì)不能確定計(jì)劃的醫(yī)療器材，在需要補(bǔ)充或增添時(shí)，按臨時(shí)申購的辦法，按審批權(quán)限報(bào)批后執(zhí)行。 選購儀器質(zhì)量保證 :在設(shè)備、器材請(qǐng)購中把“ 質(zhì)量第一、服務(wù)第二、價(jià)格第三”作為選購決策的主要因素，把好選購儀器質(zhì)量管理程序的四個(gè)關(guān)： 1).制定確切的物資管理規(guī)范，詳細(xì)說明物資的材質(zhì)、顏色、形狀、尺寸、重量、化學(xué)萬分、物理性能等質(zhì)量特性，對(duì)器械設(shè)備還應(yīng)包括用途、使用壽命、功效可靠性等質(zhì)量指標(biāo)，物資管理規(guī)范是物資請(qǐng)購、訂購和驗(yàn)收的依 55 據(jù)。由醫(yī)院或市采購中心組織意見，上交設(shè)備科進(jìn)行醫(yī)院設(shè)備采購程序。 3. 職責(zé)： 各實(shí)驗(yàn)室提交設(shè)備器材請(qǐng)購報(bào)告，參與科室制定請(qǐng)購計(jì)劃、提供選擇供應(yīng)商；由科室提交設(shè)備科制定采購計(jì)劃、選擇供應(yīng)商、核對(duì)證件、簽訂合同；大型儀器采購計(jì)劃由院醫(yī)管會(huì)論證，院領(lǐng)導(dǎo)審批；器 材采購計(jì)劃由醫(yī)院設(shè)備科或市采購中心執(zhí)行；驗(yàn)收由臨床實(shí)驗(yàn)診斷中心配合有關(guān)部門遵循相關(guān)程序和流程。 . 離心管破碎時(shí) 先封存其它標(biāo)本，防止引起標(biāo)本間的污染。調(diào)試實(shí)驗(yàn)通過后，去掉未校準(zhǔn)標(biāo)示牌。 50 ，啟用替用設(shè)備（準(zhǔn)用儀器）。 ： 各種儀器和相關(guān)設(shè)備的性能、要求、維護(hù)和保養(yǎng)、常見故障的排除、尤其要嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作。 48 二十一、實(shí)驗(yàn)室人員培訓(xùn)程序 1. 目的 保證實(shí)驗(yàn)室人員具備開展該類實(shí)驗(yàn)的能力。 8. 每次工作結(jié)束后，用 75％的酒精清潔移液槍一次。 三、 職責(zé)： PCR實(shí)驗(yàn)室人員必須明確造成污染的來源及處理辦法。 檢 查吸頭有無畸形、破損。 ，應(yīng)準(zhǔn)確查詢數(shù)量。提示陽性標(biāo)準(zhǔn)品存在問題。如擴(kuò)增曲線 CT 值大于 27，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)確證試劑污染。 － 20℃冰箱保存。 實(shí)驗(yàn)室在接受電話查詢時(shí)，關(guān)于檢驗(yàn)結(jié)果僅能回答 “某日送檢的某個(gè)項(xiàng)目的檢測已經(jīng)完成（或未完成）。 將病例資料、樣品資料、檢測結(jié)果錄入報(bào)告系統(tǒng)，產(chǎn)生結(jié)果報(bào)告單，經(jīng)本室組長或 經(jīng)相關(guān)培訓(xùn)后獲得上崗資格的工作人員及 高年資檢驗(yàn)人員審核簽名后交工友送門診和各病區(qū)。在記錄借出時(shí)需有實(shí)驗(yàn)室主管、經(jīng)手人、借閱人的簽名方可。 ，須保存多個(gè) SDS 文件，命名時(shí)在后面以 a、 b、 c 等字母標(biāo)識(shí)，如 2020年 9月 10 日做的兩次實(shí)驗(yàn)，分別保存為 。 在移取所需體積的骨髓后，立即蓋緊原始標(biāo)本管蓋，將標(biāo)本繼續(xù)保存于 4℃ 冰箱。 擴(kuò)增反應(yīng)體系的配制、分裝在模板添加區(qū)完成后，由傳遞窗中取出待測樣品，添加模板后，上機(jī)操作。 34 PCR 運(yùn)行程序：利用上下箭頭選擇“ files” 鍵→ “ load” → “ enter” →選擇相應(yīng)的程序→“ exit” → “ save no” → “ exit”→ 打開儀器蓋子，放入裝有反應(yīng)體系的 Eppendorf 管，蓋上蓋子，按“ start” 鍵 →運(yùn)行完相應(yīng)程序→打開儀器蓋子，取出Eppendorf 管，蓋上蓋子→關(guān)機(jī)。 、使用過程中如發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，要立即斷電并進(jìn)行檢修。 4 注意： 32 、儀器在使用中請(qǐng)勿將電泳槽放在電泳儀上工作，嚴(yán)禁濺入電解質(zhì)溶液。按【啟 /?！挎I后儀器鳴響 4 聲，輸出啟動(dòng)，指示燈亮。 將樣品管垂直或略為傾斜地放置在振蕩盤上，開機(jī)振蕩數(shù)秒或數(shù)分鐘直至樣品完全混勻后，關(guān)機(jī)。因此僅以轉(zhuǎn)速表達(dá)離心力是不夠科學(xué)的，近年來主張用相對(duì)離心力（ RCF）來表示比較合理。 按啟動(dòng)鍵，離心機(jī)將執(zhí)行上述參數(shù)進(jìn)行運(yùn)作，到預(yù)定時(shí)間自動(dòng)關(guān)機(jī)。 5． 當(dāng)杯或加樣器有可污染時(shí)，在 121℃ 壓力下消毒 20 分鐘。 改吸不同液體、樣品或試劑前要換新吸嘴；發(fā)現(xiàn)吸嘴內(nèi)有殘液時(shí)要換新吸嘴。按吸嘴彈射器除去吸嘴。等一秒鐘，然后將吸嘴提離液面。 預(yù)洗 當(dāng)裝上一個(gè)新吸嘴（或改變 吸取的容量值）時(shí)應(yīng)預(yù)洗吸嘴，先吸入一次液樣并將之排回原容器中。 P 型 (Pipetman) 加樣器是連續(xù)可調(diào)的、計(jì)量和移液的專用儀器，量度準(zhǔn)確、操作安全。 原始血清 /血漿標(biāo)本在報(bào)告發(fā)出后放入超低溫冰箱 70℃ 保存 1個(gè)星期，以備查。 23 九、標(biāo)本保存程序 1. 檢測前的標(biāo)本保存： 對(duì)于 DNA測定的標(biāo)本分離后，置 4℃后保存，并進(jìn)行編號(hào)。 ，先在統(tǒng)計(jì)簿上填入結(jié)果，作好記錄，再一一把實(shí)驗(yàn)結(jié)果輸入本中心化驗(yàn)單管理軟件系統(tǒng)。 ：全血、血清、血漿用 B 表示、痰用SP、尿用 U、分泌物用 S、各種穿刺物 P、組織用 T表示等。 ，包括用過的一次性手套和工作服置于專門污染袋內(nèi)，送醫(yī)院垃圾處理站并在垃圾處理程序登記表上簽字，污染的非一次性工作衣應(yīng)先消毒后再洗滌。 (如試管、吸頭、離心管等 )，用后放入污物袋內(nèi)交醫(yī)院集中處理。 處 理血液和體液標(biāo)本的工作人員都應(yīng)穿工作服，戴上手套、口罩、工作帽。 3. 職責(zé)： 實(shí)驗(yàn)室組長有責(zé)任保證每一工作人員在上崗前熟悉本程序內(nèi)容，并保證所需設(shè)備、物質(zhì)齊全。 ，在有條件情況下，完成上崗培訓(xùn)，取得上崗培訓(xùn)合格證書。工作人員上崗前必須學(xué)習(xí)掌握 PCR 實(shí)驗(yàn)室管理文件及要求，并由實(shí)驗(yàn)室主管核查。 ,不得吸煙，不得做與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的事。 四、 規(guī)范 : ，做到不遲到，不早退。 ，開啟各區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)，各區(qū)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后打開該區(qū)移動(dòng)紫外燈消毒實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，紫外燈每天開啟 60 分鐘。 了解儀器運(yùn)轉(zhuǎn)情況及 試劑使用情況 ，負(fù)責(zé)儀器的整潔，安全，檢查電源，水龍頭，節(jié)假日應(yīng)指定人員負(fù)責(zé)檢查實(shí)驗(yàn)室的儀器、設(shè)備，確保安全。 60 分鐘，記錄紫外燈使用情況。 。 。 用的離心管、吸頭等需經(jīng)高壓滅菌處理，使用時(shí)應(yīng)在消毒有效期內(nèi)。 ，應(yīng)書寫工整詳細(xì)，使用課題登記記錄本記錄。 0 溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院外科學(xué)實(shí)驗(yàn)室 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 工作 程序 溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院外科學(xué)實(shí)驗(yàn)室 1 溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院外科學(xué)實(shí)驗(yàn)室 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 工作 程序 編制： 審核： 批準(zhǔn)： 發(fā)布日期： 實(shí)施日期： 2 目 錄 文件編號(hào) 名稱 頁碼 修訂頁 45 LABZXFZ1 PCR 實(shí)驗(yàn) 室的設(shè)置及管理 6 9 LABZXFZ2 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理及清潔 1011 LABZXFZ3 實(shí)驗(yàn)室人員行為規(guī)范 1213 LABZXFZ4 PCR 實(shí)驗(yàn)室人員配置及培訓(xùn) 1415 LABZXFZ5 生物防護(hù) 1617 LABZXFZ6 實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理程序 1819 LABZXFZ7 標(biāo)本唯一標(biāo)識(shí)編號(hào)程序 2021 LABZXFZ8 標(biāo)本采集程序 22 LABZXFZ9 標(biāo)本保存程序 23 LABZXFZ10 加樣器操作使用 及校準(zhǔn)程序 2427 LABZXFZ11 離心機(jī)操作使用程序 2829 LABZXFZ12 旋渦振蕩器操作使用程序 30 LABZXFZ13 DYY6C 型電泳儀使用程序 3132 LABZXFZ14 PCR 儀 操作使用程序 3334 LABZXFZ15 PCR 檢測實(shí)驗(yàn)操作程序 3536 LABZXFZ16 PCR 試驗(yàn)記錄的管理 3739 LABZXFZ17 PCR 檢測結(jié)果的報(bào)告程序 4041 LABZXFZ18 試劑質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程 序 4243 3 目 錄 文件編號(hào) 名稱 頁碼 LABZXFZ19 實(shí)驗(yàn)耗材的購買、質(zhì)檢和儲(chǔ)存程序 4445 LABZXFZ20 實(shí)驗(yàn)室的清潔程序 4647 LABZXFZ21 實(shí)驗(yàn)室人員培訓(xùn)程序 48 LABZXFZ22 應(yīng)急處理程序 4951 LABZXFZ23 檢驗(yàn)設(shè)備器材計(jì)劃、請(qǐng)購與驗(yàn)收程序 5257 LABZXFZ24 臨床標(biāo)本處理（核酸純化）程序 5862 LABZXFZ25 ABI 7500 型核酸擴(kuò)增熒光檢測儀操作維護(hù)及分析 程序 6372 4 修訂頁 頁碼 條目 原內(nèi)容 修訂內(nèi)容 修訂者 批準(zhǔn)者 修訂日期 5 修訂頁 頁碼 條目 原內(nèi)容 修訂內(nèi)容 修訂者 批準(zhǔn)者 修訂日期 6 一、 PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及管理 ： 核酸擴(kuò)增檢測實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有專人負(fù)責(zé)，依照實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范實(shí)施全面質(zhì)量管理，保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。 ，封口，在垃圾筐上套好新 的垃圾袋，將垃圾帶出實(shí)驗(yàn)室由衛(wèi)生員統(tǒng)一送交醫(yī)院集中處理。 ，將使用過的離心管、吸頭置于盛有 1％施康消毒液或類似消毒液的廢液缸中，還原實(shí)驗(yàn)臺(tái)面。 8 、類型和標(biāo)本數(shù)量。 60 分鐘，記錄紫外燈使用情況。 ， 9 脫下手套及鞋套置于專用污物桶中，由衛(wèi)生員（經(jīng)培訓(xùn)）每周二、五下午清除。 ： 、干凈，通道要利于通行，沒有無用的物品阻礙。 、關(guān)窗、檢查空調(diào)和儀器的電源是否關(guān)閉。 ,不得擅自離開工作崗位 ,特殊情況需請(qǐng)假。 13 ,舉止文明 ,對(duì)待來訪病人或電話應(yīng)和藹禮貌 ,解釋明確、耐心 ,不得推脫或生硬回絕。實(shí)驗(yàn)室主管具體負(fù)責(zé)實(shí)施技術(shù)培訓(xùn)、考核及管理。 、更新核酸擴(kuò)增方面的相關(guān)知識(shí)，提升自身的理論學(xué)習(xí)水平。 所有工作人員必須在工作中嚴(yán)格遵守本程序各項(xiàng)防護(hù)措施。 在標(biāo)本處理過程中，手或其它部位的皮膚在接觸血液或其它體液后必須立即用自來水充分清洗。 ，如鉗、鑷、接種環(huán)、吸管等，用后均應(yīng)消毒清潔，進(jìn)行微生物檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)重新滅菌，金屬工具可燒灼滅菌或消毒液浸泡；玻璃制品干熱或壓力蒸汽滅菌。污染的紙集中收集焚毀，污染的布可進(jìn)行高壓滅菌。 ，不得隨意作任何涂改；必須時(shí)，在舊標(biāo)識(shí)上劃雙線更改，更改后應(yīng)保持舊標(biāo)識(shí)可辨識(shí)。 驗(yàn)結(jié)果報(bào)告單。 對(duì)于 RNA測定的標(biāo)本分離后置 80℃保存，或 20℃（一周內(nèi)）并進(jìn)行編號(hào)。超過 1 個(gè)星期保存期的標(biāo)本由實(shí)驗(yàn)室主管酌情處理，一般按生物傳染性物品交醫(yī)院統(tǒng)一處理。 P右下角數(shù)字為加樣器最大容量值 ， 代表加樣器的型號(hào)已標(biāo)明在按鈕上。預(yù)洗新吸嘴能有效提高移液的精確度和重現(xiàn)性。用藥用吸紙抹去吸嘴外面可能附著的液滴。（只有改用不同液體時(shí)才需更換吸嘴。新吸嘴使用前要預(yù)洗。各區(qū)的加樣器歸各區(qū)