【正文】 及吸嘴口。未裝吸頭的加樣器絕不可用來吸取任何液體。這是因為第一次吸取的液體會在吸嘴內(nèi)壁形成液膜，導(dǎo)致計量誤差。如第二次仍不夠準(zhǔn)確，根據(jù)偏差再作調(diào)整。致密及粘稠液體對于密度低于水的液體，可將容量計的讀數(shù)調(diào)到低于所需值來進(jìn)行補償?？烧{(diào)式加樣器應(yīng)在允許容量范圍內(nèi)調(diào)節(jié)。 血清 /血漿標(biāo)本放置超低溫冰箱保存時須有記錄， 按檢測項目分類存放，并由專人負(fù)責(zé)管理。 2. 檢測后的標(biāo)本保存： 提取的核酸標(biāo)本當(dāng)天檢測可置 4℃保存，如當(dāng)天不檢測應(yīng)置 20℃保存。 對于 DNA測定的核酸樣本應(yīng)在 10mmo1/L TriS， 1mmo1/L EDTA緩沖液（ ）中 4℃保存。采集生殖道拭子標(biāo)本，要求病人在采樣 前 2 小時內(nèi)不能排尿，采樣時，將 棉拭子伸入男性尿道及女性宮頸口 2～ 3cm，轉(zhuǎn)動一周以獲得上皮細(xì)胞。 22 八、 標(biāo)本采集程序 。 ，在一張檢驗信紙上按類型、順序排好各標(biāo)本的位置，同時排好陰陽性對照、陽性質(zhì)控品、陽性標(biāo)準(zhǔn)品的位置。 ，根據(jù)編號的基本原則，給當(dāng)天的 21 標(biāo)本編好號，每個標(biāo)本的每 個檢測項目對應(yīng)一個唯一的編號。 ：標(biāo)識由三部分構(gòu)成 檢測項目、標(biāo)本采集日期、該檢測批次的標(biāo)本序號，三部分間無間隔符號，例如： 03 06 01 HBV 01 分別表示年、 月、 日、實驗項目、 序號，序號（ 0199），整個標(biāo)識為 1011位； ，對應(yīng)標(biāo)本唯一性標(biāo)識，產(chǎn)生工作標(biāo)本序號，其組 成有檢驗項目加序號（ 199）。 20 七、標(biāo)本識編號程序 ： 保證標(biāo)本編號的唯一性，也是準(zhǔn)確發(fā)放報告的基礎(chǔ)。 、尿、胸水、腹水、腦脊液、唾液、胃液、腸液、關(guān)節(jié)腔液等用 1%施康消毒液攪勻后作用２小時后，交醫(yī)院集中處理。 、吸管等投入盛有 1%施康消毒液的容器內(nèi)浸泡一晝夜后經(jīng)高壓蒸汽滅菌 再進(jìn)行洗滌。 廢棄物消毒 處理：先用 10%的次氯酸鈉消毒，然后進(jìn)行焚燒處理。 在實驗過程中，病人標(biāo)本（血液、體液）或試劑不慎濺入眼內(nèi)應(yīng)立即用清水沖洗。標(biāo)本采集、運送過程中，應(yīng)保持容器完好，無泄漏。 4． 工作流程 ： 臨床實驗室，工作人員在接觸標(biāo) 本和操作過程中，可能被感染，故工作人員應(yīng)做好防護，防止細(xì)菌和其它病原體感染。在預(yù)防實驗室污染的同時也防止病毒、細(xì)菌和其它病原體交叉感染。特別是在標(biāo)本接收區(qū)采血、接收標(biāo)本的實驗人員，需定期對其進(jìn)行有關(guān)核酸擴增技術(shù)，標(biāo)本采集、保存、運輸?shù)戎R的培訓(xùn)。 12 次參加有關(guān)技術(shù)進(jìn)展或臨床應(yīng)用的國家級繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育項目。 、技術(shù)指導(dǎo)、解決與臨床溝通及技術(shù)疑難問題。因此， PCR 實驗室工作人員應(yīng)具備大專以上學(xué)歷，掌握相關(guān)學(xué)科知識及應(yīng)用能力 （臨床知識、實驗技能、分析能力、溝通能力等）。 。 、認(rèn)真 ,不得同時做與實驗無關(guān)的事情 ,如確有需要 , 應(yīng)暫停工作 ,并記錄下已進(jìn)行的步驟。 。 二、 范圍 : 適用于所有操作核酸擴增檢測項目的實驗人員。 ： ，待紫外燈消毒時間足夠后，依次關(guān)閉各區(qū)紫外燈并記錄。清潔后活塞處可使用一定量的潤滑劑。 ，做到擺放整齊、有序，無用的或使用效率低的物品放置到儲存處，常用的物品要容易尋找到。 （如 PCR 擴增儀）須有專人和使用者負(fù)責(zé)，有使用維護記錄。 10 二、 實驗室內(nèi)務(wù)管理及清潔 ，按時上下班，不遲到、 早退。 ，在室內(nèi)質(zhì)控圖上描點。 ，在緩沖區(qū)脫下專用工作服、將手套及鞋套置于專用污物桶中。 。 ，在超凈工作臺上進(jìn)行加樣，加樣后低速 6000rpm 離心數(shù)秒后，將其放入傳遞窗。 次性鞋套，戴手套，手套需常更換。 。 ，取出當(dāng)天實驗須配制和使用的試劑，其余試劑要立即收好放回冰箱內(nèi)。 ，記錄紫外燈使用情況。 工作制度 工作人員和研究生負(fù)責(zé)采集、接收標(biāo)本 。 ： 本制度適用于所有開展核酸擴增檢測項目的實驗室及相關(guān)人員，并明確了實驗室各項規(guī)章。 驗室分區(qū)設(shè)置 、標(biāo)本制備區(qū)及基因擴增與產(chǎn)物分析區(qū)。 ，將標(biāo)本送入標(biāo)本制備區(qū)。 劑準(zhǔn)備區(qū)工作制度 、一次性鞋套。 ，每周檢查有無過期或?qū)⒔狡诘脑噭?，或作報廢處理或優(yōu)先使用，避免浪費，然后記錄試劑的詳細(xì)保存情況。 ，書寫工整詳細(xì)，應(yīng)使用本室專用的、帶有本室標(biāo)識的記錄本、紙和筆。 。 。 ，關(guān)閉所有儀器，記錄儀器使用時間和運行狀態(tài)。 ，戴手套，手套需常更換。 ，記錄儀器使用時間和運行狀態(tài)。 染。 ，嚴(yán)禁在實驗室內(nèi)抽煙，吃零食。 、柜子、文件類物品要作好標(biāo)記，以方便識別。 生標(biāo)本或試劑外濺，應(yīng)立即用 1%施康消毒液滴上，濾紙蓋上半小時，然后用酒精擦洗，并經(jīng)紫外燈消毒。 ，各區(qū)清潔消毒工具均專用，不可混用，注意按照單一方向流程的原則 來進(jìn)行清潔。 三、 職責(zé) : 在科主任的監(jiān)督，由實驗室負(fù)責(zé)人領(lǐng)導(dǎo)下負(fù)責(zé)實施。 ,工作區(qū)域須穿工作服 ,離開時應(yīng) 換下。 ，做好清潔工作和各項記錄 ,報告單按時發(fā)放 ,原始記錄存檔清晰 ,以備查詢。 ,節(jié)約消耗品 ,減少浪費。 PCR 實驗室人員配置、監(jiān)督質(zhì)量，實驗室所有工作人員在條件許可時，應(yīng)在最短時間內(nèi)獲得上崗培訓(xùn)合格證書。實驗室主管不在崗時，應(yīng)指定臨時負(fù)責(zé)人。實驗室每月進(jìn)行 1 次的業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)和技 15 術(shù)討論。 定期進(jìn)行有關(guān)核酸擴增技術(shù)，標(biāo)本采集、保存、運輸?shù)戎R的培訓(xùn)。 2. 范圍： 醫(yī)科所 PCR室工作人員。 5. 感染途徑： 空氣傳播：如氣溶膠 直接接種：工作中偶然的針刺、碎玻璃劃傷直接引起傳染。工作桌面或 17 地面一但有標(biāo)本污染時，應(yīng)及時用 1:100 稀釋之施康消毒劑清潔桌面及地面。 實驗過程中在使用針具等銳器時，盡量小心防止受傷。 18 六、 實驗室廢棄物處理程序 ，如棉簽、棉球、紗布等應(yīng)在有效期內(nèi)使用，使用后的廢物品應(yīng)及時進(jìn)行無害化處理，不得隨意丟棄。 ，特別是傳染性檢驗標(biāo)本（如肝炎或結(jié)核等）時，應(yīng)戴一次性手套；可反復(fù)使用的容器 ,用后集中消毒。 ，若為一次性使用的紙質(zhì)容器及其外面包被的廢紙，應(yīng)焚毀；對可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器 ，煮沸 15分鐘或加入 1%施康溶液浸泡 2小時，消毒液每日更換，消毒后用洗滌劑及流 19 水刷洗，瀝干，用于微生物培養(yǎng)采樣者，用壓力蒸汽滅菌后備用。 ： 使用核酸擴增熒光檢測實驗室所開展的檢測項目：科研檢測項目。 HBV用 B 表示、 HCV 用 C、 HPV用 P、 HSV用 S、 CMV用 M、 TB 用 T、 NG 用 N、 UU 用 U、 Mh 用 Mh、CT 用 CT表示等。 。 、點樣后，按照 的排布，將反應(yīng)管放入擴增儀上相應(yīng)位置，開始擴增。 ，該醫(yī)護人員均需接受基因診斷實驗室有關(guān)核酸擴增技術(shù)、標(biāo)本采集、保存、運輸知識的學(xué)習(xí)。 注意： 所有上述用于臨床標(biāo)本采集的容器如試管或離心管，均應(yīng)使用前高壓滅菌。用于 RNA測定的核酸樣本應(yīng)在緩沖液中 80℃或液氮中貯存。報告發(fā)出后丟棄。 24 十、加樣器操作使用及校準(zhǔn)程序 責(zé)任人：鄭建建 1. 目的： 保證加樣器加樣的準(zhǔn)確性。 連續(xù)可調(diào)式加樣器容量計讀數(shù)由三位撥號數(shù)字組成（顯示所轉(zhuǎn)移液體容量），從上（最大有效數(shù)字）至下（最小有效數(shù)字）讀取；利用底部刻度可將容量刻度調(diào)節(jié)到更精確的分度。例如：加樣器轉(zhuǎn)移10μl 血清。排放致密或粘稠液體時，宜在第一停點多等一兩秒鐘 25 再壓到第二停點。而同一吸嘴在連續(xù)操作時液膜相對保持不變，故第二次吸液時誤差即可消除。 把按鈕壓至第一停點；緩慢、平穩(wěn)地松開按鈕，吸液 樣。 放液 將吸嘴貼到容器內(nèi)壁并保持 100— 400 傾斜。 松開按鈕。注意移液溫度不得超過 70℃。 連續(xù)可調(diào)式加樣器在取樣加樣過程中應(yīng)注意吸嘴不能觸及其它物品，以免被污 染；吸嘴盒（架子）、廢液瓶、所取試劑及加樣的樣品管應(yīng)擺放合理，以方便操作過程、避免污染為原則。 使用了酸或有腐蝕蒸氣的溶液后，最好拆下套筒，用蒸餾水 27 清洗活塞及密封圈；切勿用油脂等潤滑活塞及密封圈。每年一次送質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局校準(zhǔn)。 2. 適用范圍： 各種普通臺式離心機、高速臺式離心機和低溫冷凍離心機。 根據(jù)離心機功能，設(shè)置各項要求：速度、時間、溫度、加速度及減速度等；帶電腦控制的機器還需按儲存鍵，以便記憶輸入的各項信息。 離心過程中若發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，應(yīng)關(guān)閉電源，報請有關(guān)技術(shù)人員檢修。由于離心力不僅為轉(zhuǎn)速函數(shù) , 亦為離心半經(jīng)的函數(shù)，即轉(zhuǎn)速相同時，離心半經(jīng)越長，產(chǎn)生的離心力越大。 RCF 表示相對離心力，單位用重力加速度 g(g =)。 檢查電源電壓是否匹配后，接通電源。 31 十三、 DYYIII2型電泳儀 使用程序 責(zé)任人：鄭建建 1. 目的： 保證儀器正常使用 2. 適用范圍： 本儀器主要做 DNA 電泳和蛋白質(zhì)電泳的電源設(shè)備 3. 標(biāo)準(zhǔn)操作： ? 開啟儀器的電源開關(guān)。輸出電壓 6600V，輸出電流 4400mA。儀器正常輸出后，設(shè)定值變?yōu)閷嶋H值顯示。 ? 定時到后儀器鳴響。 、本機輸出電壓 較高，開機后人體不宜和電泳槽溶液或樣品接觸，最好關(guān)機后看樣品，以免觸電。 、在儀器工作時勿將物體遮擋后面板，影響散熱。 3 核酸擴增標(biāo)準(zhǔn)程序 每次實驗除了待檢標(biāo)本，還要包括一個陰性對照、一個陽性對照、一個陽性室內(nèi)質(zhì)控品。 3. 編寫 PCR 運行程序：利用上下箭頭選擇“ files” 鍵→ “ edit” → “ enter” →編寫相應(yīng)的程序→ “ exit” → “ save yes” → 用數(shù)字或字母編寫相應(yīng)的程序名稱→ “ enter” → “ exit” 。 3. 職責(zé)： 本程序由 PCR實驗室工作人員負(fù)責(zé)執(zhí)行。 提取和純化后的核酸樣品由傳遞窗轉(zhuǎn)移至擴增間的模板添加工作區(qū)。 標(biāo)本標(biāo)識的傳遞： 檢測過程中 以標(biāo)本唯一性標(biāo)識中的 “序號”為一一對應(yīng)的“工作序號”進(jìn)行傳遞。 工作安排：每 一項目每周至少完成一個批次的檢測。為使資料的記錄、保存狀態(tài)在控，特制訂本文件。 件保存時以當(dāng)天日期命名，如 2020 年 9月 10 日的保存為 。 ： ：在專用實驗記錄簿上記載，不同實驗區(qū)的記錄簿不得混用。 ，不得給他人借閱或復(fù)?。ㄉ婕搬t(yī)療糾紛處理除外）。連同實驗得到檢測結(jié)果，當(dāng)天工作結(jié)束前打印出當(dāng)天的病人、標(biāo)本 信息及檢測結(jié)果匯總表，存檔，保存至少 2 年以上。 4． 職責(zé)： PCR檢驗結(jié)果報告的審核、發(fā)放、管理、查詢和意見的反饋。 41 專業(yè)負(fù)責(zé)人 對報告結(jié)果進(jìn)行審核，審核日期、姓 名。 在現(xiàn)有條件下，目前暫不考慮使用電子文件的形式發(fā)放檢測報告，患者若有類似要求，可在標(biāo)本送檢時，提交與病歷一致的通信地址，檢驗報告以掛號形式發(fā)出。 7. 引用文件： PCR檢測結(jié)果報告單見樣單。 ：外包裝（廠名廠址、檢測項目、批準(zhǔn)文號、批號和有效期等 ）；內(nèi)包裝（試劑瓶完整性、真空包裝完整性、試劑品種完整性、使用說明書有否等）。 1： 在使用前批次試劑進(jìn)行常規(guī)實驗的同時帶上少量新批次的試劑。 43 ，判斷為試劑不合格，不能用于臨床檢測： 。重復(fù)新舊提取液 陽性對照實驗，確定提取液失效問題。 對照檢出，陽性標(biāo)準(zhǔn)品未檢出或擴增曲線明顯系統(tǒng)性 CT值偏大 5個循環(huán)以上。 ： 核酸擴增熒光檢測實驗室常用耗材： 管、 離心管、 、帶濾芯的吸頭。特殊的消耗品放在指定的地方。 :每批隨機抽樣 離心管 50 個用于實驗檢測。 45 離心管 方法、步驟同上。 ，即啟用該批耗材。 二、 范圍：整個 PCR實驗室。 3. 離心管在使用前要經(jīng)高溫消毒滅菌。 7. 實驗用過的 Tip頭、離心管的處理見廢棄物處理程序。 47 Tip 頭等一次性材料污染，應(yīng)立即更換應(yīng)。 13. 10％次氯酸鈉每 1月配制一次， 75%酒精每周領(lǐng)取一次。 4) 屆時根據(jù)部、省臨檢中心培訓(xùn)要求參加相關(guān)的培訓(xùn)學(xué)習(xí)，進(jìn)一步提高理論和實踐水平。 ： 適用于滿足核酸擴增熒光檢測實驗室檢測需要并可能對檢驗結(jié)果造成誤差的儀器設(shè)備和試劑盒。實驗室主管負(fù) 責(zé)在第一時間檢查核實應(yīng)急措施的有效性。用相應(yīng)防塵罩遮蔽儀器。 ，應(yīng)及時與供應(yīng)方會同解決。 。 ： 試劑盒質(zhì)量發(fā)生問題，經(jīng)核實后，及時通知供貨商迅速更換另一批次試劑，使用前需先作質(zhì)量檢測，合格后方可使用。 51 在工作中停電時，應(yīng)馬上通知維修間及時發(fā)電 ，維修間若不