【正文】 ? 1993年 Ulmer等證實(shí)小鼠肌肉注射含有編碼甲型流感病毒核蛋白（ NP）的重組質(zhì)粒后，可有效地保護(hù)小鼠抗不同亞型、分離時(shí)間相隔 34年的流感病毒的攻擊。 ?(2) 將 HBV的 DNA片段插入到牛痘病毒 ,再由此病毒重組體感染細(xì)胞 ,可分泌 HBsAg。 顆粒內(nèi)部： DNA和 DNA多聚酶 。 第五節(jié) 重要生物制品的制備 ?乙型肝炎疫苗的制備 ? 乙型肝炎病毒（ hepatitis B virus， HBV） 屬嗜肝 DNA病毒科（ hepadnaviridae）。 細(xì)菌類疫苗對(duì)菌體進(jìn)一步加工 類毒素對(duì)細(xì)菌分泌的外毒素加工 疫苗和類毒素制備工藝流程 菌種的選擇 ① 抗原性 ② 典型形態(tài)，培養(yǎng)特性和理化特性 ③ 易于在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)，不產(chǎn)生毒素 ④ 培養(yǎng)過(guò)程中毒性小或無(wú)毒力回復(fù) ⑤ 制備毒素時(shí)澤培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生大量的典型毒素 ? ? 碳、氮源和無(wú)機(jī)鹽等必需外，有時(shí)需添加生長(zhǎng)因子。廣泛用于病毒培養(yǎng)。 ?國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品，由 WHO制備、審定和分發(fā) ?國(guó)家生物標(biāo)準(zhǔn)品，由 國(guó)家鑒定機(jī)構(gòu) 制備、審定和分發(fā) 種類： ?國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品 ?國(guó)際參考品 ?國(guó)際生物參考試劑 種類： ?國(guó)家生物標(biāo)準(zhǔn)品 ?國(guó)家生物參考品 ?國(guó)家生物參考試劑 ? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 是指來(lái)源清楚或遺傳背景明確，符合微生物控制指標(biāo)要求，用于生物制品生產(chǎn)、檢定及科研的動(dòng)物。 疫苗的發(fā)展前景 ?治療性疫苗 大劑量高度純化的微生物抗原和能提高免疫功能的其他組分組合而成的治療性疫苗，抗原量大，免疫原性強(qiáng) ，對(duì)免疫系統(tǒng)有較強(qiáng)的刺激作用，而且疫苗通過(guò)不同的途徑把微生物抗原遞呈給免疫系統(tǒng)，能更有效地誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，且可消除免疫耐受。 ?接種對(duì)象：年齡為 12月齡以上的水痘易感者 。 ?接種對(duì)象： 1周歲以上的甲肝易感者 ， 我省免疫程序規(guī)定為 2— 3周歲接種 。 上臂外側(cè)三角肌附著處皮膚用７５ ％ 酒精消毒 ， 待干后皮下注射 。 ?用法和劑量：口服 ， 每次一粒 。一般人群 (包括新生嬰兒 )正常接種：上臂三角肌肌肉注射，全程注射三次，每次注射 10μg，第一次注射后隔三個(gè)月和六個(gè)月注射第二次和第三次。 ?基因工程技術(shù)使疫苗研制方法發(fā)生了革命性的變化。 ?佐劑 ，能 增強(qiáng) 抗原的 特異性免疫應(yīng)答 。 抗病血清 ? 抗病血清是抗菌，抗病毒、抗毒血清的總稱。 1 接種目的及作用 ?接種目的 防止病原體進(jìn)入機(jī)體 建立抗感染免疫 ?口服或注射疫苗 激發(fā)宿主產(chǎn)生抗病原體的抗體 暴露于病原體也不會(huì)生病 進(jìn)入機(jī)體的病原體被抗體失活 2 疫苗的種類 ? 從疫苗研制技術(shù)又可將疫苗分為 傳統(tǒng)疫苗 和 新型疫苗兩大類。 ?２ ８０年代病毒野毒株不能在 Vero Bsc1細(xì)胞中培養(yǎng)。最后 1針間隔 612個(gè)月，可加強(qiáng) 2次。 滅活疫苗 ?優(yōu)點(diǎn)：安全、有效。 疫苗和其它藥物的不同點(diǎn) ?疫苗是藥物，有特殊性： 1 用于預(yù)防。 缺點(diǎn)：其機(jī)制和安全性尚不完全清楚，一些問題有待解決。 優(yōu)點(diǎn)：主要誘導(dǎo)特異性抗體產(chǎn)生，安全 缺點(diǎn)：不能繁殖，需多次刺激，注射局部和全身反應(yīng)嚴(yán)重 2）減毒活疫苗 （ liveattenuated Vaccine） 用人工定向變異或從自然界篩選得到的 毒力高度減弱或基本無(wú)毒 的病原微生物制成的預(yù)防制劑。 主動(dòng)免疫和被動(dòng)免疫互補(bǔ)性免疫方法 ?主動(dòng)免疫：抗原接種人體產(chǎn)生主動(dòng)免疫，一般一個(gè)月內(nèi)產(chǎn)生，持續(xù)數(shù)年。 ?常用的幾個(gè)概念： 消毒；滅菌；無(wú)菌；防腐。 ? ： 由特定抗原免疫動(dòng)物所得血漿制成的抗毒素或免疫血清，如破傷風(fēng)抗毒素、抗狂犬病血清等，用于治療或被動(dòng)免疫預(yù)防。 ? 1870年 ，法國(guó)科學(xué)家 巴斯德 發(fā)明了第一個(gè)細(xì)菌減毒活疫苗 —— 雞霍亂疫苗。 ?一、生物制品概述 ?二、疫苗研究及其研制策略 ?三、生物制品的一般制造方法、質(zhì)量要求 與檢定 ?四、重要生物制品的制備 ?五、核酸疫苗 第一節(jié)：生物制品概述 ?1 概念及發(fā)展沿革 ?2 生物制品的分類 ?3 制造生物制品的生物學(xué)及免疫學(xué)基礎(chǔ) 1 概念及發(fā)展沿革 ? 概念 ? 凡是從微生物及其代謝產(chǎn)物、原蟲、動(dòng)物毒素、人或動(dòng)物的血液或組織直接加工制成，或用現(xiàn)代生物技術(shù)、化學(xué)方法制成，作為預(yù)防、治療、診斷特定傳染病或其他有關(guān)疾病的 免疫制劑 。 ? 包括各種 疫苗、抗血清、抗毒素、類毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、診斷試劑 等。巴斯德將此歸納為對(duì)動(dòng)物接種什么細(xì)菌就可以使其不受該病菌感染的 免疫接種原理 ，從而奠定了疫苗的理論基礎(chǔ)。 ? ： 如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子（天然或重組的）、紅細(xì)胞濃縮物等。 免疫學(xué)基礎(chǔ) 機(jī)體的抗感染免疫 ? 1)先天性免疫 （非特異性免疫） 包括： ① 體表屏障 ，如皮膚粘膜屏障； ② 血腦屏障 ，防御病原微生物及其毒性產(chǎn)物從血流侵入腦組織； ③ 細(xì)胞吞噬作用 ； ④ 正常體液和組織中的抗菌物質(zhì) 。主動(dòng)免疫包括體液免疫（抗體）細(xì)胞免疫，如麻疹疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、百白破疫苗等。 優(yōu)點(diǎn)：一次免疫即可獲得長(zhǎng)久免疫力，類似自然狀態(tài)下的輕型或隱性感染。 重組抗原疫苗 (rebinant antigen vaccine) 是利用 DNA重組技術(shù)制備的只含保護(hù)性抗原的純化疫苗。 2 用于健康人群，尤其是兒童。 ?滅活疫苗是將病原體培養(yǎng)繁殖后殺死病原體，再進(jìn)行純化處理使之完全失去感染性，保留病原體的免疫原性。 甲肝滅活疫苗 ?甲肝病毒分離后用細(xì)胞株增殖，再用甲醛滅活、純化。 ?３ ８０年代病毒野毒株 HN蛋白基因有漂移，其中 H蛋白和疫苗株相比有５６個(gè)核苷酸變異， N蛋白和疫苗株相比有７６個(gè)核苷酸變異。 ? ? 1）疫苗 （ 1）活疫苗：減毒活疫苗（卡介苗） （ 2）死疫苗（百日咳、霍亂等） ? 2）類毒素 破傷風(fēng)類毒素、白喉類毒素 ? 3）自身疫苗 由病人自身病灶中分離出的病原體制成的死疫苗。 ? 凡是用細(xì)菌免疫馬或其他大動(dòng)物所取得的免疫血清，稱為抗菌血清。目前常用的有 鋁佐劑 和 油制佐劑 。 5 疫苗的研制策略 ?當(dāng)代疫苗 ?滅活疫苗 ?殺死的病原體 ?減活疫苗 ?活的，無(wú)毒力的病原體 生產(chǎn)過(guò)程 ?組織培養(yǎng)病原體 ?純化病原體 ?失活或減活 ?并沒失去激發(fā)免疫的能力 局限性 ?不是所有的病原體都能用組織培養(yǎng) ?細(xì)胞培養(yǎng)價(jià)格昂貴 ?產(chǎn)量、生產(chǎn)率低 ?需要特殊的安全預(yù)防措施 ?失活或減活都必須 100％ ?保存期限短，需低溫保藏 ?不能預(yù)防所有的疾病 rDNA技術(shù)對(duì)疫苗研究的促進(jìn) ?減活疫苗通過(guò)清除致病基因?qū)崿F(xiàn) ?基因工程疫苗，無(wú)致病性載體攜帶致病病原體的抗原性決定簇 ?非組織培養(yǎng)，克隆基因和過(guò)量表達(dá)蛋白作為疫苗（亞單位疫苗） 多種基因工程疫苗研制策略 ?亞單位疫苗 ?肽疫苗 ?減活疫苗 ?DNA疫苗 亞單位疫苗 ?通常是整個(gè)病原體制備減活或滅活疫苗 ?免疫反應(yīng)的激發(fā)通