從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌實驗方案說明-免費閱讀
【正文】 不同培養(yǎng)基各有配制特點，要注意具體操作。確定在40℃ 5min內(nèi)水解1mg淀粉的酶量為一個活力單位。若培養(yǎng)基仍為綠色則為陰性反應(yīng)，以“－”表示【8】。吲哚試驗 試管標(biāo)記 取裝有蛋白胨水培養(yǎng)液的試管，編號。觀察記錄：與對照管比較，若接種培養(yǎng)液保持原有顏色，其反應(yīng)結(jié)果為陰性，表明該菌不能利用該種糖，記錄用“－”表示；如培養(yǎng)液呈黃色，反應(yīng)結(jié)果為陽性，表明該菌能分解該種糖產(chǎn)酸，記錄用“＋”表示。糖類發(fā)酵試驗（葡萄糖、木糖和乳糖發(fā)酵）用小砂輪輕輕切割發(fā)酵管沒有標(biāo)簽和標(biāo)識的另外一端，注意保留標(biāo)簽和糖的名稱。1℃培養(yǎng)2448h，或于20℃培養(yǎng)5天。制片干燥后用油鏡觀察。媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。將純化得到的單菌落分為兩部分，其中一部分接種到培養(yǎng)基內(nèi)，用以保存菌種，另一部分用來做染色實驗。④涂布平板 用一支新的無菌槍頭，由低濃度開始，從各濃度土壤稀釋液中各吸取100ul，對號較均勻地放入已寫好稀釋度的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上，用灼燒冷卻后的無菌玻璃涂棒涂勻。芽孢染色：5%孔雀綠溶液, 石炭酸復(fù)紅液。:體積比一般病源菌分子大四倍數(shù)，占據(jù)空間優(yōu)勢，抑制有害菌的生長繁殖。平板分離法普遍用于微生物的分離與純化。由于芽孢桿菌屬是一類好氧或兼性厭氧、產(chǎn)生抗逆性內(nèi)生抱子的桿狀細(xì)菌，許多為腐生菌，主要分布于土壤和植物體表面及水體中【4】。它們廣泛存在于微生物、植物和動物體中。從紡織工業(yè)到廢水處理，這些酶都有不同規(guī)模的應(yīng)用【1】。土壤中微生物的數(shù)量因土壤類型、季節(jié)、土層深度與層次等不同而異?？莶菅挎邨U菌和地衣芽孢桿菌在糖發(fā)酵試驗用阿拉伯糖，木糖和甘露糖代替葡萄糖可產(chǎn)酸；作為營養(yǎng)生長的最低限培養(yǎng)基是無維生素的，但含有葡萄糖、檸檬酸鹽和一個氨態(tài)鹽作為唯一的碳源和氮源【6】。 配制營養(yǎng)明膠培養(yǎng)基（%）：蛋白胨 、調(diào)pH ~（%）：①蛋白胨1 氯化鈉2 ～ 蒸餾水 ②蛋白胨1 氯化鈉10 ～ 蒸餾水 ③蛋白胨1 氯化鈉20 ～ 蒸餾水 ④蛋白胨1 氯化鈉25 ～ 蒸餾水 加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，～。取已稀釋成101土壤液，用無菌的移液器吸取1mL土壤懸液加入102的無菌水的試管中，并在試管內(nèi)輕輕反復(fù)吹吸數(shù)次，使之充分混勻，即成102土壤稀釋液。劃線完畢，蓋上皿蓋，倒置于28~29176。否則繼續(xù)進(jìn)行劃線分離，培養(yǎng)后再經(jīng)革蘭氏染色鏡檢直至得到純種桿菌后進(jìn)行芽孢染色。取37℃培養(yǎng)18～24h的枯草芽孢桿菌涂片，干燥，固定。進(jìn)行斜面接種操作，加塞、包扎好到37℃培養(yǎng)箱里培養(yǎng)24h。（“—”不生長，“+”生長較差 ， “++”生長一般，“+++”生長良好。培養(yǎng)基pH必須為中性或微酸性。接種后，每一管外包一層無菌紙，以防污染。 觀察記錄 取出以上試管，充分振蕩2min。以不加酶液（加同樣體積的緩沖液）的管為對照。嚴(yán)格無菌操作，防止污染情況的發(fā)生。在芽孢染色中，應(yīng)注意溫度的控制，避免染料在玻片上蒸騰，否則影響實驗結(jié)果。要嚴(yán)格按照培養(yǎng)基配方配
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