【正文】 2）將盛有消毒劑平皿置 20℃177。（5）各管試驗(yàn)菌與消毒劑混合液經(jīng)加中和劑作用 10min 后，分別吸取 ，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種 2 個(gè)平皿即可。所得結(jié)果代表菌液原有濃度，以其作為計(jì)算殺滅對數(shù)的初始濃度。按測試目的有兩種選擇。（6）TSA培養(yǎng)基：見附錄A。（2）消毒劑溶液除有特殊規(guī)定者外，應(yīng)使用無菌硬水配制。在第 1 組無菌生長時(shí)，第 2 組平均每個(gè)平板 （或?yàn)V膜） 上生長菌落不少于 5 個(gè)?；靹蚝?，置20℃177。 稀釋液試管中，混勻。 物理去除方法的鑒定（1）分組方法如下：1）消毒劑 + 菌懸液 → 培養(yǎng)觀察消毒劑對試驗(yàn)菌有無殺滅或抑制作用。（3）鑒定試驗(yàn)中，消毒后去除殘留消毒劑組無微生物生長，不能表明去除處理后細(xì)菌是否復(fù)蘇。（3）吸附柱、分子篩柱（主要供病毒滅活試驗(yàn)用）。（5）連續(xù) 3 次試驗(yàn)取得合格評價(jià)。 評價(jià)規(guī)定試驗(yàn)結(jié)果符合以下全部條件，所測中和劑可判為合格:（1） 第 1 組無試驗(yàn)菌，或僅有極少數(shù)試驗(yàn)菌菌落生長。吸取稀釋液 于無菌小平皿內(nèi)，將其置 20℃177。 ml 中和劑試管中，用電動(dòng)混合器混合20s，或?qū)⒃嚬苷翊?0 次，混勻。（2）第 2 組。應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。作用10min，吸取該最終樣液 ，用中和產(chǎn)物溶液做 10 倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，各吸取 ，分別接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。（3）第 3 組。作用至預(yù)定時(shí)間，吸此樣液 加于含有 稀釋液的試管中，混勻。將消毒劑按所需濃度配制好后，置20℃177。50%X）以內(nèi)，可進(jìn)行正式的鑒定試驗(yàn)。當(dāng)用其他特定微生物進(jìn)行殺滅試驗(yàn)時(shí)，均應(yīng)以該特定微生物進(jìn)行中和劑的鑒定試驗(yàn)。（3）試驗(yàn)中所用消毒劑的濃度應(yīng)以殺菌試驗(yàn)中使用的最高濃度為準(zhǔn)。 試驗(yàn)器材（1）試驗(yàn)菌菌懸液和菌片（見 ）。 注意事項(xiàng)（1）處理時(shí)應(yīng)嚴(yán)守?zé)o菌操作要求，所有試液須無菌，接觸樣本和試液的器材（如吸管、平皿、試管、濾材等）亦均須經(jīng)滅菌，以免污染樣本，影響試驗(yàn)結(jié)果。本除藥方法應(yīng)按擬進(jìn)行試驗(yàn)具體情況，經(jīng)鑒定合格后再使用。（4）必須按規(guī)定方法進(jìn)行鑒定試驗(yàn)，并認(rèn)為合格者方可在相應(yīng)的消毒試驗(yàn)中使用。（8）為提高試驗(yàn)成功率，最好先用濁度計(jì)對原菌液含菌量做出估計(jì)，盡可能在首次試驗(yàn)時(shí)所取的有限稀釋范圍內(nèi)（2個(gè)～3個(gè) 稀釋度）即有長菌在 15cfu～300cfu 之間的平板。（2）認(rèn)真檢查試驗(yàn)器材有無破損（要特別注意試管底的裂痕和破洞），以防丟失樣本和污染環(huán)境。以菌落數(shù)在15cfu～300cfu的平板為準(zhǔn)，每個(gè)稀釋度 3 個(gè)平板生長菌落數(shù)全合乎上述標(biāo)準(zhǔn)，則以該3個(gè)平板的菌落平均值作為結(jié)果；若有2個(gè)符合上述標(biāo)準(zhǔn)，則以該合格的兩個(gè)平板菌落的平均值為結(jié)果。平皿加樣前，應(yīng)先按組編號，以免弄混。各組由左向右，逐管標(biāo)上 1010103......等。其操作程序如下。（4）配制菌懸液和制備菌片時(shí)，嚴(yán)格按無菌要求操作，以防污染雜菌，影響隨后殺菌試驗(yàn)的結(jié)果。用10μl移液器接滅菌塑料吸頭滴染菌液，并用接種環(huán)涂勻整個(gè)載體表面。此法制成的載體大小一致，且無毛邊。載體應(yīng)根據(jù)消毒對象選擇，常用的有金屬、玻璃、濾紙、線、棉布等。再離心和重新懸浮清洗，先后共3遍。芽孢呈綠色，菌體呈紅色。否則，應(yīng)繼續(xù)在室溫下放置一定時(shí)間，直至達(dá)到上述芽孢形成率后再進(jìn)行以下處理。5）懷疑有污染時(shí)，應(yīng)以菌落形態(tài)、革蘭染色與生化試驗(yàn)等法進(jìn)行鑒定。取含 ml～ 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管，滴入少許菌種懸液，置37℃培養(yǎng)18h～24h。（8）芽孢染色液：見附錄A。 試驗(yàn)器材（1）菌種:金黃色葡萄球菌ATCC 653銅綠假單胞菌ATCC 1544大腸桿菌809枯草桿菌黑色變種ATCC 937龜分枝桿菌膿腫亞種ATCC 9332白色葡萄球菌803白色念珠菌ATCC1023黑曲霉菌ATCC16404。嚴(yán)格區(qū)分已消毒和未消毒的物品，勿使已消毒的物品被再次污染。2）應(yīng)主動(dòng)取得病家合作和相關(guān)人員的配合。14)對傳染源密切接觸者進(jìn)行人員衛(wèi)生處理。9)如系呼吸道傳染病，應(yīng)對室內(nèi)空氣進(jìn)行消毒。穿隔離服、膠鞋，戴上口罩、帽子。7)填報(bào)消毒工作記錄，必要時(shí)進(jìn)行消毒效果評價(jià)。 技術(shù)要求 (1)疫區(qū)消毒1)消毒范圍和對象：以傳染源排出病原體可能污染的范圍為依據(jù)確定消毒范圍和對象。（5）在醫(yī)院中對傳染病病人的終末消毒由醫(yī)院安排專人進(jìn)行。(2) 紫外線、微波消毒：應(yīng)避免對人體的直接照射。應(yīng)遵循以下基本原則：1）耐高溫、耐濕度的物品和器材，應(yīng)首選壓力蒸汽滅菌；耐高溫的玻璃器材、油劑類和干粉類等可選用干熱滅菌。3）低度危險(xiǎn)性物品，一般可用低水平消毒方法，或只作一般的清潔處理即可，僅在特殊情況下，才作特殊的消毒要求。（5）分枝桿菌，例如結(jié)核分枝桿菌、龜分枝桿菌等。例如，呼吸機(jī)管道、胃腸道內(nèi)窺鏡、氣管鏡、麻醉機(jī)管道、子宮帽、避孕環(huán)、壓舌板、喉鏡、體溫表等。這類消毒方法應(yīng)能殺滅一切細(xì)菌繁殖體（包括結(jié)核分枝桿菌）、病毒、真菌及其孢子和絕大多數(shù)細(xì)菌芽孢。對于二元或多元包裝的消毒劑，以按比例混合配制后作為消毒劑原形。根據(jù)消毒劑的成分，估計(jì)可能有致敏作用者，還需增做皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)。首先必須做急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)和一項(xiàng)致突變試驗(yàn)(反映體細(xì)胞基因水平或染色體水平類型的試驗(yàn)) ；若消毒劑（皮膚黏膜消毒劑）直接用于人體，并有可能重復(fù)接觸的，還必須增做亞急性毒性試驗(yàn)。(1)第一類消毒劑：指我國首創(chuàng)或根據(jù)國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道首次生產(chǎn)的消毒劑。每批取1個(gè)樣品平行測定2次，取平均值報(bào)告結(jié)果。將滴定管中滴定液補(bǔ)足至全量后滴定。采用百分?jǐn)?shù)表述含量時(shí)有下列2種含義：①液體和液體之間為體積百分?jǐn)?shù)，用“%”表示，即100 ml溶液中含溶質(zhì)若干ml，或100 ml消毒劑中含有效成分若干ml；②固體和固體之間為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)，用“%”表示，即100 g消毒劑中含有效成分若干g；對固體和液體之間采用質(zhì)量濃度表示（mg/L、g/L等），即1L溶液中含溶質(zhì)若干mg或g，或1L消毒劑中含有效成分若干mg或g等。（3）實(shí)用劑量應(yīng)對人體和環(huán)境無危害，對物品無損害。并用文字簡要敘述所得的結(jié)果。一次試驗(yàn)填寫一份表格。 最終評價(jià)的要求由于影響消毒與滅菌鑒定試驗(yàn)結(jié)果的因素很多，其中也包括試驗(yàn)的準(zhǔn)確性和設(shè)計(jì)的科學(xué)性，所以在根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行最終評價(jià)時(shí)應(yīng)綜合分析。（5）模擬現(xiàn)場和現(xiàn)場試驗(yàn)用于消毒及滅菌的器械均須進(jìn)行模擬現(xiàn)場試驗(yàn)。物理因子包括熱、微波、紫外線等。（6）模擬現(xiàn)場試驗(yàn)與現(xiàn)場試驗(yàn)：根據(jù)不同消毒對象按如下要求選擇模擬現(xiàn)場或現(xiàn)場試驗(yàn):用于、空氣消毒的消毒劑須進(jìn)行現(xiàn)場試驗(yàn)。（4）金屬腐蝕性試驗(yàn)：用于金屬物品消毒的消毒劑應(yīng)進(jìn)行本項(xiàng)檢測，試驗(yàn)濃度應(yīng)選擇最高使用濃度。所有化學(xué)消毒劑均應(yīng)進(jìn)行本項(xiàng)檢測。使用濃度低，作用時(shí)間短者與使用濃度高和作用時(shí)間長者同時(shí)存在時(shí)，以前者為準(zhǔn)。（3）用于評價(jià)醫(yī)療器械滅菌的消毒劑和消毒器械滅菌的功能鑒定試驗(yàn)應(yīng)用載體定性法，試驗(yàn)應(yīng)重復(fù)5次。 無菌操作的基本要求 （1）試驗(yàn)開始前，應(yīng)以濕式方法清潔臺(tái)面和打掃室內(nèi)地面，然后以紫外線或其他方法對實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣進(jìn)行消毒；（2）實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)穿戴工作服、口罩、帽子；進(jìn)行無菌檢驗(yàn)時(shí)，需經(jīng)風(fēng)淋后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，然后，正確穿戴好無菌隔離衣、帽和口罩；（3）每吸取一次不同樣液應(yīng)更換無菌吸管，接種環(huán)（針）需在火焰上燒灼滅菌后，才可再次使用；（4）要求無菌的試劑，如蒸餾水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、培養(yǎng)基、牛血清白蛋白、標(biāo)準(zhǔn)硬水、中和劑等，均需滅菌或過濾除菌；（5）無菌器材和試劑，使用前須檢查容器或包裝是否完整，有破損者不得使用；（6）正在使用的無菌器材和試劑不得長時(shí)間暴露于空氣中；（7）移液或接種時(shí)，應(yīng)將試管口和瓊脂平板靠近火焰，防止污染；（8）所有用過的污染器材，應(yīng)立即放入盛有消毒液的容器中，以防止對周圍環(huán)境和清潔物品造成污染；（9）若不慎發(fā)生微生物培養(yǎng)物摔碎或其他試驗(yàn)微生物泄漏事故時(shí)，不論是否具有致病性，均應(yīng)立即對污染及可能波及的區(qū)域進(jìn)行消毒處理；（10）全部試驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)按常規(guī)對室內(nèi)空氣和環(huán)境表面進(jìn)行消毒處理。又稱作用時(shí)間、處理時(shí)間。如，設(shè)定SAL為106，即經(jīng)滅菌處理后在一百萬件物品中最多只允許有一件物品存在活微生物。 自然菌 natural bacteria在消毒試驗(yàn)中，指存在于某一試驗(yàn)對象上非人工污染的細(xì)菌。 高效消毒劑 highefficacy disinfectant指可殺滅一切細(xì)菌繁殖體（包括分枝桿菌）、病毒、真菌及其孢子等，對細(xì)菌芽孢（致病性芽孢菌）也有一定殺滅作用，達(dá)到高水平消毒要求的制劑。本規(guī)范含總則、消毒檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)范、醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范和疫源地消毒技術(shù)規(guī)范四個(gè)部分。 生物指示物 biological indicator將適當(dāng)載體染以一定量的特定微生物，用于指示消毒或滅菌效果的制品。 中和劑 neutralizer在微生物殺滅試驗(yàn)中，用以消除試驗(yàn)微生物與消毒劑的混懸液中和微生物表面上殘留的消毒劑，使其失去對微生物抑制和殺滅作用的試劑。 殺滅率 killing rate， KR在微生物殺滅試驗(yàn)中，用百分率表示微生物數(shù)量減少的值。 無菌檢驗(yàn) sterility testing 證明滅菌后的物品中是否存在活微生物所進(jìn)行的試驗(yàn)。 消毒產(chǎn)品功效檢驗(yàn)的基本原則和要求 消毒產(chǎn)品檢驗(yàn)的基本要求 消毒實(shí)驗(yàn)室的基本要求檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取封閉式布局，建筑應(yīng)便于清潔、消毒。（3）化學(xué)指示物、生物指示物、滅菌包裝、衛(wèi)生用品和1次性使用醫(yī)療用品，送檢單位應(yīng)送檢3批樣品。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)不同作用時(shí)間，第二時(shí)間為最短作用時(shí)間。（7）鑒定和監(jiān)測多用途消毒劑與消毒器械消毒效果時(shí)，現(xiàn)場或模擬現(xiàn)場試驗(yàn)的消毒對象原則上是在類似物品中最難達(dá)到消毒合格者，如醫(yī)療器械消毒或滅菌選用止血鉗；皮膚消毒選擇人體前臂屈面皮膚；織物消毒選擇棉布；一般物品表面（包括木質(zhì)、塑料、橡膠、玻璃）消毒選擇木質(zhì)表面；餐具消毒選用竹(木)筷，不用于筷子消毒的可選用瓷質(zhì)碗盤；地面消毒選擇水泥地面；手消毒選擇五指屈面；對于特指消毒對象而又在上述物品中不能選出有代表性物品時(shí)，則需用該特指對象進(jìn)行試驗(yàn)。對于需調(diào)節(jié)pH后使用的消毒劑則應(yīng)在pH調(diào)節(jié)劑加入前后分別測定pH值。若特指對某微生物有效時(shí)，則需進(jìn)行相應(yīng)微生物的殺滅試驗(yàn)。 消毒器械鑒定測試項(xiàng)目的確定消毒器械應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品功能與用途要求選擇以下項(xiàng)目進(jìn)行檢測。（3）實(shí)驗(yàn)室殺滅微生物試驗(yàn)用于消毒的器械，應(yīng)采用定量殺滅試驗(yàn)。 對重復(fù)試驗(yàn)的要求對所要求的重復(fù)性試驗(yàn)，并不是只在同次試驗(yàn)中增加菌片數(shù)，或多作幾份樣本，而是應(yīng)分期分批進(jìn)行。 試驗(yàn)記錄的要求實(shí)驗(yàn)室對所進(jìn)行的試驗(yàn)，必須按計(jì)量認(rèn)證（或?qū)嶒?yàn)室認(rèn)可）要求認(rèn)真觀察試驗(yàn)結(jié)果，作好原始記錄。凡是檢驗(yàn)方法與本規(guī)范不一致或有更改者，必須詳細(xì)敘述補(bǔ)充或刪改的部分，以便閱讀者了解檢驗(yàn)工作的全過程，對檢驗(yàn)樣品的質(zhì)量作出恰如其分的評價(jià)。在確定實(shí)用劑量時(shí)需考慮的因素主要有：污染微生物的種類和數(shù)量；有機(jī)物的含量；殺菌因子的穩(wěn)定性；環(huán)境的溫濕度變化；腐蝕性的強(qiáng)弱；酸堿度；消毒對象的性質(zhì)；允許使用的濃度；允許作用的時(shí)間；殺菌因子的穿透能力；對人體和環(huán)境的危害等。文內(nèi)規(guī)定滴定時(shí)所取樣本的質(zhì)量或容量(包括濃度)，均根據(jù)此原則設(shè)定。摩爾(mole， mol) 為物質(zhì)量的單位，當(dāng)分子、1023時(shí)即為 1 mol。所用容量瓶和量筒等不能加熱。 消毒產(chǎn)品毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)基本要求為了確保消毒劑的安全性，消毒劑除在配方組分或雜質(zhì)（污染物）含量方面必須達(dá)到國家有關(guān)部門頒發(fā)的相關(guān)技術(shù)法規(guī)或強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)對它們的禁用或限用的要求外，消毒劑還需進(jìn)行相應(yīng)的安全性毒理學(xué)評價(jià)。首先必須做急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、亞急性毒性試驗(yàn)和兩項(xiàng)致突變試驗(yàn) (包括反映基因水平和染色體水平兩種類型試驗(yàn))。如果偶爾使用或間隔數(shù)日使用的消毒劑，采用一次完整皮膚刺激試驗(yàn)；如果每日使用或連續(xù)數(shù)日使用的消毒劑，采用多次完整皮膚刺激試驗(yàn)。（3）進(jìn)行安全性毒理學(xué)評價(jià)用受試物根據(jù)不同毒理學(xué)試驗(yàn)的目的，采用相應(yīng)的受試物。（1）滅菌：可殺滅一切微生物（包括細(xì)菌芽孢）達(dá)到滅菌保證水平的方法。 醫(yī)用物品對人體的危險(xiǎn)性分類醫(yī)用物品對人體的危險(xiǎn)性是指物品污染后造成危害的程度。（2）細(xì)菌繁殖體。1）高度危險(xiǎn)性物品，必須選用滅菌方法處理。4）對存在較多有機(jī)物的物品消毒時(shí)，應(yīng)加大消毒藥劑的使用劑量和/或延長消毒作用時(shí)間。普通病人用過的物品，可先清洗后消毒。（2）對乙類傳染病中的病毒性肝炎、細(xì)菌性痢疾、傷寒和副傷寒、脊髓灰質(zhì)炎、白喉、布魯菌病、炭疽、鉤端螺旋體病、流行性出血熱、淋病、梅毒等和丙類傳染病中肺結(jié)核，必須按照當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制和監(jiān)督機(jī)構(gòu)提出的衛(wèi)生要求，由病人陪護(hù)人或所在單位進(jìn)行消毒處理或由當(dāng)?shù)丶膊】刂茩C(jī)構(gòu)組織進(jìn)行消毒處理。(2)防護(hù)用品：工作服、隔離服、防護(hù)眼鏡、口罩、防鼠疫口罩、帽子、手套、長筒膠靴、毛巾、污物袋、手電筒、皮卷尺、雨衣、長柄毛刷、裝工作衣的布袋（30cm30cm40cm）、肥皂盒、皮膚消毒盒（瓶）。5)不明傳染病疫源地的消毒：應(yīng)根據(jù)流行病學(xué)指征確定消毒范圍和對象，采取最嚴(yán)格的消毒方法進(jìn)行處理。(3)疫點(diǎn)的終末消毒程序1)在出發(fā)前，應(yīng)檢查所需消毒用具、消毒劑和防護(hù)用品，做好準(zhǔn)備工作。6)測量房屋、家具及地面需消毒的面積和體積，估算需消毒的污水量。作擦拭消毒時(shí)，必須反復(fù)擦拭2次～3次。17)填寫疫點(diǎn)終末消毒工作記錄。4)消毒過程中，不得隨便走出消毒區(qū)域，禁止無關(guān)人員進(jìn)入消毒區(qū)內(nèi)。按此方法進(jìn)行的試驗(yàn)，只是對消毒劑的殺菌能力的重要方面進(jìn)行驗(yàn)證，側(cè)重反映消毒劑的實(shí)用劑量與殺菌能力。（5）稀釋液：見附錄A。（13）離心機(jī)。3）初步制成的菌懸液，先用細(xì)菌濃度比濁測定法粗測其含菌濃度，然后以稀釋液稀釋至所需使用的濃度。2） ml～ 第 3代～5代的18h～24h 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物，接種于羅氏瓶中營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面，將其搖動(dòng)使菌液布滿營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的表面，再將多余肉湯培養(yǎng)物吸出，將羅氏瓶置于37℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 5d～7d。取出，去濾紙，用自來水沖洗殘留孔雀綠溶液。6）用無菌棉花或紗布過濾芽孢懸液，清除其中的瓊脂凝塊。10）芽孢懸液在使用時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。