【正文】 （ 3） 一親本細胞（ HGPRT或 TK—骨髓瘤細胞） +另一親本（具有合成 DNA 的兩條途徑，不能在體外長期分裂繁殖的淋巴細胞） =融合的雜種細胞，可通過補救合成 DNA，存活。 1基因工程抗體種類？ （ 1） 大分子抗 體：①嵌合抗體；②重構抗體（ CDR 植入抗體）； （ 2） 小分子抗體：① Fab抗體；②單鏈抗體（ ScFv）：雙功能（雙特異性）抗體，催化抗體。 三、填空題 動物細胞工程研究主要內容 生物技術復習題 07437 18 動物細胞培養(yǎng)技術；細胞融合技術；單克隆抗體技術（即雜交瘤技術）；動物大規(guī)模培養(yǎng)技術；基因及細胞器染色體的改造和轉移；核轉移技術；胚胎干細胞技術 動物細胞所需營養(yǎng)因素 ① 氨基酸：氮源； ② 鹽類：鈉，鉀，鎂，鈣，硫酸根，碳酸氫根離子等； ③ 葡萄糖：碳源，供能； ④ 緩沖系統(tǒng)： CO2 緩沖系統(tǒng)或 HEPES； ⑤ 生長因子： EGF（表皮生長因子）等； ⑥其他成分：維生素，微量元素，有機補充物，激素生長因子，嘌呤，谷胱甘肽等。能分化為體內所有組織的能力。 細胞單層培養(yǎng)法： 動物組織塊經消化分散成單個細胞或細胞團塊后，粘附于培養(yǎng)容器表面培養(yǎng)成新生細胞 單層的培養(yǎng)法。 ？可以分為幾類？ 代謝網絡分流處的代謝產物稱為節(jié)點，其中對終產物起決定作用的少數節(jié)點稱為主節(jié)點。因此，必須在融合體再生后，進行幾 代自然分離、選擇，才能確定是否生物技術復習題 07437 15 獲得了真正融合子 ？ （ 1）烷化劑類化合物： 它能與一個或幾個核酸堿基起反應，引起 DNA 復制時堿基配對的轉換而發(fā)生遺傳變異，這是一類在誘變育種中普遍使用的化學誘變劑。天然培養(yǎng)基的特點是營養(yǎng)豐富，適合于微生物的生長繁殖和目的產物的合成。 次級代謝產物是指微生物代謝過程中所產生的其自身生長繁殖所不需要的物質。并憑借定向選擇（篩選）方法，獲得具有某些預期特征的進化酶，從而排除其它方向的突變體。 ② 共價結合法 ： 酶分子的活性基團與載體表面活潑基團之間經化學反應形成共價鍵的連接法 常用基團： 氨基、羧基、酚基及咪唑基等 優(yōu)點： 酶與載體結合牢固，操作穩(wěn)定性良好。極端環(huán)境指普通微生物不能生存的環(huán)境，如高溫、低溫、低 PH、高 PH、高鹽、高輻射、含抗代謝物、有機溶劑、低營養(yǎng)、重金屬及有毒有害物等環(huán)境條件 二、 填空題 酶分子的 主鏈修 飾 、 酶分子的 側鏈基團修飾 、 酶分子的 化學交 聯修飾 、 酶分子的 大 分子修飾 、 酶分子的 親 和標記修飾 、 酶分子的 基 因修飾 和 與輔助因子相關的修飾 。 ：①目的抗原基因的選擇和獲得（構建 cDNA 文庫， PCR 擴增，人工合成）；②選擇合適的表達載體；③對在表達載體上的基因序列進行測定。無法控制外源基因插入方向 ； B. 銜接物 連接法 :優(yōu)點 ：克隆后還可回收原插入片斷 ； 缺點 ： 如果待克隆的 DNA 片段或基因的內部也含有與所加的銜接物相同的限制位點，這樣在酶切消化銜接物產生粘性末端的同時，也會把所克隆的基因切成不同的片段，從而對后繼的亞克隆及其他操作造成麻煩。 的加工與基因高效表達 :絕大多數較高等的真核基因含有內含子，這些內含子在 mRNA的加工過程中，在細胞核中被加工去除而產生成熟的 mRNA。多的重組體中篩選出特定的基因 . 名原則是什么 ? 凡能識別并切割雙螺旋 DNA 分子內特定核苷酸順序的酶統(tǒng)稱為限制酶。 ⑥ 聚合酶鏈反應技術（ PCR） :優(yōu)點： 。：盲目性大，陽性片段不一定正好是基因，樣本多，可能會漏。 片段的連接方法 平頭 雙鏈 DNA 分子的連接（ T4DNA 連接酶）；粘性末端 DNA 片段的連接（ DNA 連接酶）；平末端 DNA 片段的連接（同聚物加尾法，銜接物連接法， DNA 接頭連接法）。裝卸手續(xù)簡單 。這些阻遏物的存在可以抑制 Lac 操縱子的表達。 ： 是指用化學方法合成的一段由 1012 個核 苷酸組成，具有一個或數個限制酶識別位點的平末端的雙鏈寡核苷酸段片斷。 : 是指通過蛋白質化學、晶體學和動力學的研究，獲取關于蛋白質物理、化學等各方面的信息，在此基礎上，對編碼該蛋白質的基因進行有目的的改造，并 通過基因工程等手段將其進行表達和分離純化，最終得到比天然蛋白質更好的產物。 （ 作用：一是保護自身的 DNA不受限制，二是破壞外源 DNA 使之迅速降解。 生物技術復習題 07437 4 基因工程 一． 專業(yè)符號 Tetr 四環(huán)素抗性 R/M 體系 限制與修飾現象 Ampr 氨芐青霉素抗性 pBR322 質粒載體 M13 單鏈 DNA 噬菌體載體 cosmid 科斯質粒 IPTG 異丙基 β D 硫代半乳糖苷 DNA ligase DNA 連接酶 EcoRI 限制性 酶 切位點 host 宿主 Plasmid 質粒 Ori 復制起始位點 vector 載體 cDNA 反轉錄互補 DNA southern blot DNA 印跡轉移技術 MCS 多克隆位點 二． 名詞解釋 bioengineering ： 利用生物有機體（包括微生物和動、植物）或其組成部分（包括器官、組織、細胞、細胞器）和組織成分（包括 DNA、 RNA、蛋白質、酶、多糖 、抗體等），形成新的技術手段來發(fā)展新產品和新工藝的一種技術體系。 3)胚狀體再發(fā)育成完整植株 ： 在外觀上，這種方式和不定芽均有光滑、圓形突起的形狀。 （ 1）直接發(fā)生：（具有初生分生能力的）外植體直接分化成器官的過程。廣泛應用于細胞、原生質體及融合產物的培養(yǎng)。在 TDNA 區(qū)和 Vir 區(qū)基因的協(xié)同作用下，農桿菌完成侵染植物細胞和轉移 TDNA 的過程。 看護培養(yǎng)法 ： 用一塊愈傷 組織或植物離體組織看護單細胞使其生長增殖的一種單細胞培養(yǎng)方法。有兩種發(fā)生方式：（ 1）直接發(fā)生：（具有初生分生能力的）外植體直接分化成器官的過程。用途：主要用來增殖細胞。特點：能在顯微鏡下追蹤單細胞分裂增殖形成細胞團的全過程；培養(yǎng)基少，營養(yǎng)和水分難以保持， pH 值變動幅度大，培養(yǎng)細胞僅能短期分裂。 2)胚狀體形成 ： 在植物有性生殖中，精于和卵子結合形成合子，合子進一步發(fā)育成胚。 優(yōu)點： 是融合成本低，勿需特殊設備；融合子產生的異核率較高；融合過程不受物種限制。長度一般 1040 個殘基。 ： 識別順序與切割方式均相同者，為之同裂酶。 : 根據核酸雜交原理，利用基因探針檢出培養(yǎng)板上重組 轉 化體菌落位置的技術稱之為原位雜交技術。 ： 位點上核苷酸順序通常呈雙重旋轉對 稱結構，即呈回文結構。 : DNA蛋白質篩選法是用來專門檢測同 DNA特異結合的蛋白質因子的中的外源 DNA編碼一種能專門同某一特定 DNA 序列結合的 DNA 結合蛋白質 . 三、 填空題 : 。 ① 有效的轉錄起始； ② mRNA 的穩(wěn)定性； ③ 有效地翻譯啟始； ④ 遺傳密碼應用的偏倚性； ⑤ mRNA 的加工； ⑥ mRNA 序列上終止密碼的選擇；⑦表達質?？截悢导胺€(wěn)定性；⑧外源基因的穩(wěn)定性。 通過控制溶解溫度使富 A=T 區(qū)解鏈變性，而富 G≡ C 區(qū)仍維持雙鏈。 。 cDNA 鏈的合成 。 : ①首選 AUG 為起始密碼子；②正確的 SD 序列；③ SD序列與起始密碼子之間的距離以 9177。 : ①通過組建融合基因，產生融合蛋白；②產生可分泌的蛋白質；③以包含體的形式表達；④選擇合適的宿主表達系統(tǒng)。 ） ？ ① 分離純化需改造的目的蛋白； ② 了解其一級結構及高級結構，了解其結構 功能關系； ③獲 取編碼該蛋白的基因序列； ④ 設計改造方案； ⑤ 對基因序列進行改造； ⑥ 將經過改造的基因序列重組入表達載體，進行表達；⑦分離純化表達產物，并對其功能進行檢測。 生物技術復習題 07437 9 酶工程 一、 專業(yè)符號及名詞解釋 1. NADPH 還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 2. DEAE 二乙氨乙基葡聚糖 3. DNP 二硝基苯酚 4. error prone PCR 易錯 PCR 5. DNA shuffling DNA 改組 6. IU 酶活力國際單位 7. Katal 酶活力單位 8. 酶工程 指通過化學方法、酶學方法和 DNA 重組技術改善自然酶的組成、結構和性質，以提高酶的催化效率、降低成本并在大規(guī)模工業(yè)化生產中進行應用的技術 9. 酶的活力單位 酶在最適條件下，單位時間內，酶催化底物的減少量或產物的生成量 （ IU：指在特定條件下， 1min 內生成 1μ mol 產物的酶量） 每毫克酶蛋白所含的酶活力單位數 酶的比活力 =酶活力單位數 /毫克酶蛋白 （ Immobilized enzyme） 通過物理和化學的方法將酶束縛在一定空間內且仍具有催化活性的酶 制劑 （ Immobilized cell） 指被限制或定位于特定空間位置的細胞，與固定化酶一起統(tǒng)稱為固定化生物催化劑。 優(yōu)點： 操作簡單，可選用帶不同電荷和不同形狀的載體，固定化過程可以與純化過程同時實現，酶失活后載體仍可再生。由于擴散阻力將導致 酶動力學行為改變而降低活力 生物技術復習題 07437 11 ？ 殘留法、水解法 ？ 構象效應、屏蔽效應（或稱位阻效應）、微環(huán)境效應（或稱分配效應）、擴散效應 ？ 分批測定法、連續(xù)測定法 ，固定化酶具有哪些優(yōu)點？ （ 1）穩(wěn)定性較天然酶高 （ 2）反應后，酶與底物易于分開，并可長期反復使用 （ 3）反應液中無殘留酶，產物易于純化，產品質量高 （ 4）可實現轉化反應連續(xù)化和自動化控制； （ 5）酶的利用效率高，產品成本低。 某些 微生物生長所必需的有機物質，但其需要量不大，通常把這些特殊的營養(yǎng)物質稱為生長因子 。 四、 問答題 ? 斜面低溫保藏法、 液體石蠟封藏法 、甘油冷凍保藏法、 真空