單克隆抗體技術(shù)ppt課件-免費(fèi)閱讀
【正文】 適用范圍廣，既可用于抗體制備，也適用于其它蛋白如激素、酶、藥物、隨機(jī)多肽等的生產(chǎn)。該技術(shù)的成功給抗體基因的篩選工作帶來了革命性的變革。 抗體庫技術(shù)是用基因工程方法把人或其他動(dòng)物的全部抗體的輕、重鏈可變區(qū)基因 克隆出來，在原核載體上表達(dá)，然后篩選出所需的特異基因和抗體。 雙特異性抗體 (bispecific antibody,BSAb)是指能同時(shí)識(shí)別 2種抗原的抗體。 二是 分泌型表達(dá) ，將細(xì)菌的信號(hào)肽序列與單鏈抗體的氨基端相連，單鏈抗體分子就可分泌到質(zhì)周腔和細(xì)菌體外，進(jìn)行折疊后成為有活性的分子。 在 VH與 VL之間加上一段連接肽，把 VH與 VL連成一條單鏈，得到 ScFv，即單鏈抗體 。 分子小，穿透力強(qiáng) 。 經(jīng)過 CDR移植， 抗體的免疫原性極低，而其抗原結(jié)合能力保持不變， 結(jié)合半抗原及全抗原 (如細(xì)胞表面受體、病毒等 )的改形抗體都已有報(bào)道，到現(xiàn)在已有數(shù)百種人源化抗體。 構(gòu)建嵌合抗體的大致過程是，將鼠源單抗的 可變區(qū)基因 克隆出來，連到包含有 人抗體恒定區(qū)基因及表達(dá)所需的其它元件 (如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、選擇標(biāo)記等 )的表達(dá)載體上，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞 (如骨髓瘤細(xì)胞、 CHO細(xì)胞 )中表達(dá)。 ? 融合比例： ? 骨髓瘤細(xì)胞：脾細(xì)胞 =1： 5或 1： 10 ? 融合劑： 40%PEG（分子量 10002022） ? 融合 24小時(shí)后加 HAT培養(yǎng)液 2周后 改用 HT培養(yǎng)液 2周后 改用一般培養(yǎng)液 d 細(xì) 胞融合 a b c d Ag X Ag X’ ELISA HAT PEG Cell fusion Hybridoma cells 融合瘤 細(xì) 胞 （ Subcloning） (確 定只有一 種細(xì) 胞 ) d’ d a b c d a b c d’ + + + + + + + X d c b a + d NS1 骨 髓 癌 細(xì) 胞 B cell 脾 細(xì) 胞 分株培 養(yǎng)篩選 篩選 單 抗 傳統(tǒng)抗體 (抗血清 ) 試驗(yàn)專 一性 對(duì) 抗 原 的 反 應(yīng) 無 法 分 辨 完 全 不 同 d 舊 有抗原 d’ 新的抗原 ? 一般在雜交瘤細(xì)胞布滿孔底 1/10時(shí)，開始檢測(cè)特異性抗體，篩選出所需雜交瘤細(xì)胞系。 傳統(tǒng) 抗血清 抗 原 免 疫 所有抗 體 混合 1 2 3 4 B A LB / c1 2 3 4 1 2 3 4 脾 臟 淋巴結(jié) B 細(xì)胞 傳統(tǒng) 抗血清的交叉反 應(yīng) 專一性反應(yīng) 沒有反應(yīng) 交叉反應(yīng) + ? 1 2 3 Ag A x y z Ag B 1’ 2 0 Ag A’ 1 2 3 2 2 單克隆抗體 雜交瘤技術(shù)的理論基礎(chǔ) ? 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的克隆選擇學(xué)說，即一種克隆只產(chǎn)生一種抗體 ? 細(xì)胞融合 技術(shù)產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞可以保持雙方親代細(xì)胞的特性 ? 利用代謝缺陷補(bǔ)救機(jī)理篩選雜交瘤細(xì)胞，并克隆化，制備 McAb 可生 產(chǎn) 有用抗 體 的 淋巴細(xì)胞 若 與 癌 細(xì) 胞 融合， 則 形成 穩(wěn) 定而可培養(yǎng) 的 細(xì) 胞 株 。 ● 2022年預(yù)計(jì) 5060個(gè)治療性單抗上市。 ? 美國已上市 16種單克隆抗體藥物 ? 2022年銷售額 29億美元 ? 2022年 90億美元 ? 我國的單克隆抗體藥物市場(chǎng)還處于起步階段，更談不上抗體組藥物的發(fā)展。 實(shí)際意義： （ 1）預(yù)防、治療感染性疾病， 如：破傷風(fēng)抗毒素血清 ? 抗 破傷風(fēng)， 胎盤球蛋 白 ? 抗病毒感染 等 副作用： ?超敏反應(yīng) （ 2）臨床診斷，如：肥達(dá)氏反應(yīng) 傷寒、副傷 寒 缺點(diǎn)：特異性差。 ? 1 2 3 4 m m m m 1 2 3 4 1 2 3 4 單 抗 細(xì) 胞融合 取出脾細(xì)胞 + 癌細(xì)胞 各抗 體
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