外源基因的表達(dá)ppt課件-免費(fèi)閱讀
【正文】 轉(zhuǎn)化過程中遮光或添加光合作用抑制劑可提高轉(zhuǎn)化效率。 四、藍(lán)藻表達(dá)系統(tǒng) 藍(lán)藻 —— 又稱 藍(lán)綠藻 或 藍(lán)細(xì)菌 ，它含有葉綠素 a(缺乏葉綠素 b)和藻膽素，具有光合系統(tǒng) Ⅰ (PS Ⅰ ) 和光合系統(tǒng) Ⅱ (PS Ⅱ )、能進(jìn)行光合作用，但它又 具有細(xì)菌的特征，無細(xì)胞核及雙層膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器，染色體裸露，是一種典型的原核生物。 鏈霉菌基因表達(dá)載體 ?啟動(dòng)子 結(jié)構(gòu)多樣，至少存在三類鏈霉菌基因的啟動(dòng)子： ?與大腸桿菌基因 10區(qū)和 35區(qū)類似的啟動(dòng)子 ?僅與大腸桿菌基因 10區(qū)類似的啟動(dòng)子 ?與大腸桿菌基因 10區(qū)和 35區(qū)序列均不相同的啟動(dòng)子 ?核糖體結(jié)合位點(diǎn) 類似于其它原核生物的 SD序列： 5′(A/G)GGAGG3′。 ② 啟動(dòng)子 芽孢桿菌含多種 轉(zhuǎn)錄起始識(shí)別因子 （ σ）。 ?提高外源基因 mRNA的穩(wěn)定性。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)分泌到位于大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)膜與外膜之間的外周質(zhì)時(shí)，信號(hào)肽被 信號(hào)肽酶 所切割。 實(shí)現(xiàn)外源基因與宿主染色體整合是根據(jù) DNA同源交換的原理 ，因此在待整合的外源基因兩側(cè)必須分別組合一段與染色體 DNA完全同源的序列。 多表達(dá)單元的重組： 每個(gè)表達(dá)單元都含獨(dú)立的啟動(dòng)子、終止子、 SD序列、起始密碼和終止密碼，形成 獨(dú)立轉(zhuǎn)錄與串連翻譯 的表達(dá)單元。 受體細(xì)胞本身的表達(dá)產(chǎn)物： 如RNA聚合酶、核糖核蛋白、外膜蛋白以及表達(dá)載體編碼的蛋白等。 宿主菌 重組異源蛋白在大腸桿菌中不穩(wěn)定的原因： ?大腸桿菌缺乏復(fù)雜的翻譯后加工和蛋白質(zhì)折疊系統(tǒng) ?大腸桿菌不具備類似真核細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定因子 ?大量的異源重組蛋白在大腸桿菌細(xì)胞中形成高濃度的微環(huán)境，導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子之間的作用增強(qiáng)。 ③ 翻譯終止密碼子 翻譯終止密碼子與核糖體相遇時(shí)，能使核糖體從 mRNA模板上脫落下來，終止蛋白質(zhì)的翻譯過程。 （ 3）蛋白質(zhì)的翻譯系統(tǒng) 在原核生物中影響翻譯起始的因素有： 起始密碼子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)（ SD序列）、起始密碼子與 SD序列之間的距離和堿基組成、 mRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)、 mRNA上游的 5′端非翻譯序列和蛋白編碼區(qū)的 5′端序列等。 調(diào)節(jié)基因 啟動(dòng)基因 結(jié)構(gòu)基因 DNA RNA聚合酶 轉(zhuǎn)錄 mRNA 翻譯 蛋白質(zhì) 外源基因在強(qiáng)啟動(dòng)子的控制下容易發(fā)生 轉(zhuǎn)錄過頭 的現(xiàn)象，形成長(zhǎng)短不一的 mRNA混合物，而 過長(zhǎng)的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物不僅會(huì)影響到 mRNA的翻譯效率 ,同時(shí) 也會(huì)使外源基因的轉(zhuǎn)錄速度大大降低 ，從而影響目的蛋白的翻譯效率。 在構(gòu)建大腸桿菌表達(dá)載體的過程中，選擇何種抗生素抗性基因，還必須考慮到是否會(huì)對(duì)特定宿主細(xì)胞的代謝活動(dòng)產(chǎn)生影響。 常見的復(fù)制子 pMB p15A、 ColE1： 松弛復(fù)制型 ，每細(xì)胞質(zhì)?？截悢?shù)10～ 20個(gè)。 生理代謝途徑及基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制比較清楚。 基因操縱子調(diào)節(jié)系統(tǒng)示意圖 調(diào)節(jié)基因 啟動(dòng)基因 操縱基因 結(jié)構(gòu)基因 DNA 轉(zhuǎn)錄 （ ） RNA聚合酶
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