《外源基因的表達(dá)》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 在構(gòu)建表達(dá)載體的時(shí)候一般采 用 強(qiáng)的啟動(dòng)子 和 強(qiáng)的終止子 ，以達(dá)到高效表達(dá)的目的。選擇可調(diào)控的 強(qiáng)啟動(dòng)子 是構(gòu)建一個(gè)理想的表達(dá)系統(tǒng)首先要考慮的問(wèn)題。 （ 2）外源目的基因的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng) 這一系統(tǒng)包括 啟動(dòng)子、抑制物基因 和 終止子 。 大腸桿菌表達(dá)載體上一般都帶有一個(gè)以上的抗生素抗性基因。 pSC101： 嚴(yán)謹(jǐn)復(fù)制型 ，每細(xì)胞質(zhì)粒拷貝數(shù)少于 5個(gè)。 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)越性： ① 已經(jīng)掌握了十分豐富的有關(guān)大腸桿菌基礎(chǔ)生物學(xué)、遺傳學(xué)以及分子生物學(xué)等方面的 背景知識(shí) ，特別是對(duì)其 基因表達(dá)調(diào)控 的分子機(jī)理有了深刻的了解； ②大腸桿菌已被發(fā)展成為一種 安全的 基因工程實(shí)驗(yàn)體系，擁有各類(lèi)適用的 寄主菌株 和不同類(lèi)型的 載體系列 ； ③實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明，許多克隆的 真核基因 都可以在大腸桿菌細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)有效的、高水平的表達(dá)； ④大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉，易于進(jìn)行工業(yè)化批量生產(chǎn)。 不具備真核生物的蛋白質(zhì)加工系統(tǒng)，表達(dá)產(chǎn)物無(wú)特定的空間構(gòu)象。 原核生物 作為基因表達(dá)系統(tǒng)的受體細(xì)胞所具有的特點(diǎn)： 原核生物多為單細(xì)胞異養(yǎng)，生長(zhǎng)快，代謝易于控制，可通過(guò)發(fā)酵迅速獲得大量基因表達(dá)產(chǎn)物。 ?mRNA只能在 細(xì)胞質(zhì) 中的 核糖體 上 轉(zhuǎn)譯 成多肽或蛋白質(zhì)，再經(jīng)過(guò)加工、糖化，形成高級(jí)結(jié)構(gòu)。 基因表達(dá)在原核生物與真核生物中的差別 （ 1） 原核生物表達(dá)系統(tǒng) ?基因表達(dá)是以 操縱子 的形式進(jìn)行的。第六章 外源基因的表達(dá) 基因重組的 主要目的 使目的基因在某一細(xì)胞中能得到高效表達(dá)，即 產(chǎn)生人們所需要的高產(chǎn)的目的基因產(chǎn)物 ，如蛋白質(zhì)、多肽類(lèi)生物藥物。 從基因到有功能的產(chǎn)物這整個(gè) 轉(zhuǎn)錄 、 轉(zhuǎn)譯 及所有的 加工 過(guò)程就是基因表達(dá)的過(guò)程，它是在一系列 酶和調(diào)控序列 的共同作用下完成的。 基因操縱子調(diào)節(jié)系統(tǒng)示意圖 調(diào)節(jié)基因 啟動(dòng)基因 操縱基因 結(jié)構(gòu)基因 DNA 轉(zhuǎn)錄 （ ） RNA聚合酶 （ +） 轉(zhuǎn)錄 翻譯 mRNA 翻譯 阻遏蛋白 蛋白質(zhì) 誘導(dǎo)劑 控制區(qū) 信息區(qū) 操縱子 （ 2） 真核生物基因表達(dá)系統(tǒng) ?轉(zhuǎn)錄 是在 核內(nèi) 進(jìn)行的，先生成 hnRNA，再加工去掉內(nèi)含子，外顯子相連接，并修飾 5′和 3′末端后才形成成熟的、有功能的 mRNA。 真核生物基因表達(dá)系統(tǒng)： 如酵母表達(dá)系統(tǒng)、植物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)等。 生理代謝途徑及基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制比較清楚。 目前大多數(shù)外源基因都是以大腸桿菌為受體系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)的，是目前應(yīng)用最廣泛的基因表達(dá)系統(tǒng)。 常見(jiàn)的復(fù)制子 pMB p15A、 ColE1： 松弛復(fù)制型 ，每細(xì)胞質(zhì)粒拷貝數(shù)10～ 20個(gè)。 其原因一方面是由于許多質(zhì)粒本身就是帶有抗菌素抗性基因的抗藥性 R因子；另一方面則是因?yàn)榭咕乜剐杂浱?hào)具有便于操作、易于選擇等優(yōu)點(diǎn)。 在構(gòu)建大腸桿菌表達(dá)載體的過(guò)程中，選擇何種抗生素抗性基因，還必須考慮到是否會(huì)對(duì)特定宿主細(xì)胞的代謝活動(dòng)產(chǎn)生影響。 外源目的基因 轉(zhuǎn)錄的起始 是基因表達(dá)的關(guān)鍵步驟。 調(diào)節(jié)基因 啟動(dòng)基因 結(jié)構(gòu)基因 DNA
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