cr引物設(shè)計(jì)及相關(guān)軟件使用-免費(fèi)閱讀
【正文】 應(yīng)當(dāng)選用 3’端 ?G 值較低（絕對(duì)值不超過(guò) 9），而 5’端和中間 ?G 值相對(duì)較高的引物。不同的末位堿基在錯(cuò)配位置導(dǎo)致不同的擴(kuò)增效率，末位堿基為 A 的錯(cuò)配效率明顯高于其他 3 個(gè)堿基，因此應(yīng)當(dāng)避免在引物的 3’端使用堿基 A?？梢灾苯犹峤荒０逍蛄械教囟ňW(wǎng)頁(yè)，得到設(shè)計(jì)好的引物，也可以在本地計(jì)算機(jī)上運(yùn)行引物設(shè)計(jì)專(zhuān)業(yè)軟件。 PCR ?引物設(shè)計(jì)是 PCR 技術(shù)中至關(guān)重要的一環(huán)。 2. 引物序列在模板內(nèi)應(yīng)當(dāng)沒(méi)有相似性較高，尤其是 3’端相似性較高的序列，否則容易導(dǎo)致錯(cuò)配。 5. 引物所對(duì)應(yīng)模板位置序列的 Tm 值在 72℃左右可使復(fù)性條件最佳。 一般原則 8. 對(duì)引物的修飾一般是在 5’端增加酶切位點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)下一步實(shí)驗(yàn)中要插入 PCR 產(chǎn)物的載體的相應(yīng)序列而確定。 一般原則 4. 引物序列的 GC 含量一般為 4060%，過(guò)高或過(guò)低都不利于引發(fā)反應(yīng)。 ?必要時(shí)還需對(duì)引物進(jìn)行修飾，如增加限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)，引進(jìn)突變等。PCR引物設(shè)計(jì)及相關(guān)軟件使用 重慶大學(xué)生物工程學(xué)院 楊應(yīng)斌 主要內(nèi)容 ?背景 ?PCR引物設(shè)計(jì)原則 ?常用 PCR引物設(shè)計(jì)軟件 ?Primer Premier 介紹 ?Oligo 介紹 ?在線 Primer3 介紹 PCR 聚合酶鏈反應(yīng) (Polymerase Chain Reaction ,PCR)是 80年代中期發(fā)展起來(lái)的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。 影響因素 ?如引物長(zhǎng)度（ primer length），產(chǎn)物長(zhǎng)度（ product length） ?序列 Tm 值 (melting temperature) ?引物與模板形成雙鏈的穩(wěn)定性 (internal stability, 用 ?G 值
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