第二章基因工程制藥(二)-預覽頁
【正文】 對表達產物的組成，特別是對其氮末端氨基酸是否有增減并無嚴格要求。 分泌信號包括信號肽部分以及前導肽部分的編碼序列，它幫助后面的表達產物分泌出酵母細胞，并在適當的部位由胞內蛋白酶加工切斷表達產物與前導肽之間的肽鍵，產生正確的表達產物。 某些蛋白質糖基化后更加穩(wěn)定，便于分離精制。 分裂不穩(wěn)定：是指工程菌分裂時出現一定比例不含質粒子代菌的現象； 結構不穩(wěn)定：是指外源基因從質粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變。 在培養(yǎng)基中加入抗菌素抑制質粒丟失菌的生長，提高質粒穩(wěn)定性。,29,第二章 基因工程制藥,六、基因工程菌生長代謝的特點,菌體的生長通常用比生長速率來表示。 培養(yǎng)條件的改變，都會改變菌體的能量代謝和小分子前體的供應，影響生物大分子的和成和菌體的生長。,32,第二章 基因工程制藥,菌體的生長與能量的關系,分批培養(yǎng)中選擇不同的碳源，連續(xù)培養(yǎng)中控制稀釋速率等都能一定范圍內控制菌體的生長，從而控制乙酸的產生，減少它的抑制作用。,34,第二章 基因工程制藥,菌體生長與前體供應的關系,在基礎培養(yǎng)基中加入氨基酸能使菌體比生長速率提高，使蛋白質合成增加。,36,第二章 基因工程制藥,七、基因工程菌發(fā)酵,基因工程菌的培養(yǎng)過程包括: 通過搖瓶操作基因工程菌生長的基礎條件,如溫度、pH、培養(yǎng)基各種組分、碳氧比，分析表達產物的合成、積累對受體細胞的影響。,40,第二章 基因工程制藥,連續(xù)培養(yǎng),將種子接入反應器后，培養(yǎng)一段時間，到一定菌濃，開動蠕動泵，同時進料和出料，控制一定稀釋速率。 通過去除培養(yǎng)液中的代謝產物來解除其對生產菌的不利影響,42,第二章 基因工程制藥,固定化培養(yǎng),基因工程菌固定化后，質粒的穩(wěn)定性大大提高。 工藝要求：外源基因既高效表達，又有利于產品分離純化,44,第二章 基因工程制藥,對發(fā)酵影響較大的幾個因素,培養(yǎng)基 接種量 溫度 溶解氧 誘導時機 pH,45,第二章 基因工程制藥,培養(yǎng)基的影響,培養(yǎng)基的組成既要提高工程菌的生長速率，又要保持工程菌的穩(wěn)定性，使外源基因高效表達。,46,第二章 基因工程制藥,培養(yǎng)基的影響,不同的碳源對菌體的生長和外源基因表達有較大的影響。乳糖對lac啟動子有利。,48,第二章 基因工程制藥,接種量的影響,接種量的大小影響發(fā)酵的產量和發(fā)酵周期。 溫度對發(fā)酵過程的影響是多方面的。,50,第二章 基因工程制藥,溫度的影響,適宜的發(fā)酵溫度是既適合菌體的生長，又適合代謝產物合成的溫度。 好氧微生物利用溶解于培養(yǎng)液中的氧氣進行呼吸。 采用調節(jié)攪拌轉速的方法可以改善培養(yǎng)過程中的氧供給，提高活菌產量。,54,第二章 基因工程制藥,pH的影響,pH對細胞的正常生長和外源蛋白的高效表達都有影響。,56,第二章 基因工程制藥,建立工程菌發(fā)酵的最佳化 工藝要求,最快周期、最高產量。 不同于微生物發(fā)酵，微生物發(fā)酵目的是為了獲得初級或次級代謝產物，細胞生長并非主要目標。24.11.1724.11.17Sunday, November 17, 2024 人生得意須盡歡，莫使金樽空對月。24.11.1724.11.1709:21:1809:21:18November 17, 2024 加強自身建設，增強個人的休養(yǎng)。2024年11月17日星期日9時21分18秒09:21:1817 November 2024 科學，你是國力的靈魂；同時又是社會發(fā)展的標志。24.11.172024年11月17日星期日9時21分18秒24.11.17,謝謝
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