第二章基因工程制藥(二)-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 對(duì)表達(dá)產(chǎn)物的組成，特別是對(duì)其氮末端氨基酸是否有增減并無(wú)嚴(yán)格要求。 分泌信號(hào)包括信號(hào)肽部分以及前導(dǎo)肽部分的編碼序列，它幫助后面的表達(dá)產(chǎn)物分泌出酵母細(xì)胞，并在適當(dāng)?shù)牟课挥砂麅?nèi)蛋白酶加工切斷表達(dá)產(chǎn)物與前導(dǎo)肽之間的肽鍵，產(chǎn)生正確的表達(dá)產(chǎn)物。 某些蛋白質(zhì)糖基化后更加穩(wěn)定，便于分離精制。 分裂不穩(wěn)定：是指工程菌分裂時(shí)出現(xiàn)一定比例不含質(zhì)粒子代菌的現(xiàn)象； 結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定：是指外源基因從質(zhì)粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變。 在培養(yǎng)基中加入抗菌素抑制質(zhì)粒丟失菌的生長(zhǎng)，提高質(zhì)粒穩(wěn)定性。,29,第二章 基因工程制藥,六、基因工程菌生長(zhǎng)代謝的特點(diǎn),菌體的生長(zhǎng)通常用比生長(zhǎng)速率來(lái)表示。 培養(yǎng)條件的改變，都會(huì)改變菌體的能量代謝和小分子前體的供應(yīng)，影響生物大分子的和成和菌體的生長(zhǎng)。,32,第二章 基因工程制藥,菌體的生長(zhǎng)與能量的關(guān)系,分批培養(yǎng)中選擇不同的碳源，連續(xù)培養(yǎng)中控制稀釋速率等都能一定范圍內(nèi)控制菌體的生長(zhǎng)，從而控制乙酸的產(chǎn)生，減少它的抑制作用。,34,第二章 基因工程制藥,菌體生長(zhǎng)與前體供應(yīng)的關(guān)系,在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入氨基酸能使菌體比生長(zhǎng)速率提高，使蛋白質(zhì)合成增加。,36,第二章 基因工程制藥,七、基因工程菌發(fā)酵,基因工程菌的培養(yǎng)過(guò)程包括: 通過(guò)搖瓶操作基因工程菌生長(zhǎng)的基礎(chǔ)條件,如溫度、pH、培養(yǎng)基各種組分、碳氧比，分析表達(dá)產(chǎn)物的合成、積累對(duì)受體細(xì)胞的影響。,40,第二章 基因工程制藥,連續(xù)培養(yǎng),將種子接入反應(yīng)器后，培養(yǎng)一段時(shí)間，到一定菌濃，開(kāi)動(dòng)蠕動(dòng)泵，同時(shí)進(jìn)料和出料，控制一定稀釋速率。 通過(guò)去除培養(yǎng)液中的代謝產(chǎn)物來(lái)解除其對(duì)生產(chǎn)菌的不利影響,42,第二章 基因工程制藥,固定化培養(yǎng),基因工程菌固定化后，質(zhì)粒的穩(wěn)定性大大提高。 工藝要求：外源基因既高效表達(dá)，又有利于產(chǎn)品分離純化,44,第二章 基因工程制藥,對(duì)發(fā)酵影響較大的幾個(gè)因素,培養(yǎng)基 接種量 溫度 溶解氧 誘導(dǎo)時(shí)機(jī) pH,45,第二章 基因工程制藥,培養(yǎng)基的影響,培養(yǎng)基的組成既要提高工程菌的生長(zhǎng)速率，又要保持工程菌的穩(wěn)定性，使外源基因高效表達(dá)。,46,第二章 基因工程制藥,培養(yǎng)基的影響,不同的碳源對(duì)菌體的生長(zhǎng)和外源基因表達(dá)有較大的影響。乳糖對(duì)lac啟動(dòng)子有利。,48,第二章 基因工程制藥,接種量的影響,接種量的大小影響發(fā)酵的產(chǎn)量和發(fā)酵周期。 溫度對(duì)發(fā)酵過(guò)程的影響是多方面的。,50,第二章 基因工程制藥,溫度的影響,適宜的發(fā)酵溫度是既適合菌體的生長(zhǎng)，又適合代謝產(chǎn)物合成的溫度。 好氧微生物利用溶解于培養(yǎng)液中的氧氣進(jìn)行呼吸。 采用調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速的方法可以改善培養(yǎng)過(guò)程中的氧供給，提高活菌產(chǎn)量。,54,第二章 基因工程制藥,pH的影響,pH對(duì)細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和外源蛋白的高效表達(dá)都有影響。,56,第二章 基因工程制藥,建立工程菌發(fā)酵的最佳化 工藝要求,最快周期、最高產(chǎn)量。 不同于微生物發(fā)酵，微生物發(fā)酵目的是為了獲得初級(jí)或次級(jí)代謝產(chǎn)物，細(xì)胞生長(zhǎng)并非主要目標(biāo)。24.11.1724.11.17Sunday, November 17, 2024 人生得意須盡歡，莫使金樽空對(duì)月。24.11.1724.11.1709:21:1809:21:18November 17, 2024 加強(qiáng)自身建設(shè)，增強(qiáng)個(gè)人的休養(yǎng)。2024年11月17日星期日9時(shí)21分18秒09:21:1817 November 2024 科學(xué)，你是國(guó)力的靈魂；同時(shí)又是社會(huì)發(fā)展的標(biāo)志。24.11.172024年11月17日星期日9時(shí)21分18秒24.11.17,謝謝
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