20xx年醫(yī)學專題—第五章-細胞融合與體細胞雜交-預覽頁
【正文】 交是解決遠源雜交不親和性的有力手段之一，更好地利用自然界基因資源，培育(p233。,問題：有沒有可能培育出地下結土豆，地上結番茄(fānqi233。,本章主要內容(n232。ngy236。親本細胞是體細胞，也叫“體細胞雜交（somatic cell hybridization）”。,第九頁，共五十九頁。 （2）異核體（Heterokaryon）：來自不同基因型的融合細胞。,三 發(fā)展(fāzhǎn)歷史,自發(fā)融合現象最初在動物細胞中發(fā)現。 20世紀70年代初，華裔加籍科學家高國楠發(fā)現聚乙二醇(PEG)能促使植物原生質體融合，開拓了植物細胞融合的研究。,細胞膜的結構(ji233。ng)出現通道,——細胞橋,四 細胞融合原理,第十二頁，共五十九頁。,原生質體及其制備(zh236。diǎn)： 無細胞壁，可以方便地進行遺傳操作、人工誘變、 細胞器轉移、細胞融合等操作。b232。使植物細胞融合技術得以建立。o)游離的裸露原生質體。 離心法：低速離心，收集沉淀。滲透壓調節(jié)劑：葡萄糖、甘露醇、山梨醇等。n)：細胞核的融合,沒發(fā)生(fāshēng)細胞核的融合，僅發(fā)生(fāshēng)了細胞質的融合，則可能成為嵌合細胞。,第十七頁，共五十九頁。 原因可能是病毒的磷脂外衣與動物細胞膜相似，病毒外殼上的某些糖蛋白有促進細胞融合的功能。 缺點：提前大量培養(yǎng)病毒； 滅活后才能作為(zu242。,第十九頁，共五十九頁。ng)，使細胞聚集在一起。,第二十頁，共五十九頁。,第二十一頁，共五十九頁。ji232。,第二十二頁，共五十九頁。n)質膜的表面電荷，利于細胞融合。常用的PEG平均分子量在200－20,000之間，分子量1,000以下者為液體，1,000以上者為固體。ng)與另外一個原生質體中帶負電的基團相連，導致原生質體融合。因此，PEG結合高pH的高濃度Ca2+離子誘導(y242。,第二十五頁，共五十九頁。,第二十八頁，共五十九頁。lǐ)法,電融合誘導法（Electrofusion）：利用電場來誘導細胞(x236。 優(yōu)點：融合率高、重復性與可控制性強。n hua)細胞電融合,（1）聚集：在直流電脈沖的誘導(y242。 （4）融合細胞：細胞核融合。 he)親本原生質體（59105），0.7M山梨醇。 參數： 電壓：1.53V，超過2V破裂，選1.5V。,融合(r243。lǐ)過程，經融合后細胞將以多種形式出現，需要通過培養(yǎng)和篩選，除去不需要的細胞，分離出需要的雜種細胞，從而解決融合細胞的選擇問題。,六 融合(r243。bāo)篩選方法,（1）細胞形態(tài)大小差異 （2）選擇性培養(yǎng)基篩選法：利用(l236。親本原生質體生長要求外源激素，而有的雜種細胞由于雙親互補作用會產生內激素，從而使雜種細胞能在無激素的培養(yǎng)基上生長。ngguāng)染料法,兩個親本原生質體在融合前用能發(fā)不同顏色熒光 的熒光染料進行染色。,第三十八頁，共五十九頁。ng)抗性標記進行的融合細胞篩選,第四十頁，共五十九頁。ngy242。nɡ)不親和性，實現遠源遺傳重組。,細胞質遺傳(y237。,二 技術(j236。 zi) ：屬間體細胞雜交,三 植物新品種培育(p233。 z236。,第五十頁，共五十九頁。,KM8P主要(zhǔy224。,雜種植物(zh237。f,內容(n232。由于種屬間存在著種種隔離機制，致使遠緣雜交常表現不親和或獲得的遠緣雜種表現不育?！?
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