20xx年醫(yī)學(xué)專題—第五章-細(xì)胞融合與體細(xì)胞雜交-預(yù)覽頁
【正文】 交是解決遠(yuǎn)源雜交不親和性的有力手段之一，更好地利用自然界基因資源，培育(p233。,問題：有沒有可能培育出地下結(jié)土豆，地上結(jié)番茄(fānqi233。,本章主要內(nèi)容(n232。ngy236。親本細(xì)胞是體細(xì)胞，也叫“體細(xì)胞雜交（somatic cell hybridization）”。,第九頁，共五十九頁。 （2）異核體（Heterokaryon）：來自不同基因型的融合細(xì)胞。,三 發(fā)展(fāzhǎn)歷史,自發(fā)融合現(xiàn)象最初在動物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)。 20世紀(jì)70年代初，華裔加籍科學(xué)家高國楠發(fā)現(xiàn)聚乙二醇(PEG)能促使植物原生質(zhì)體融合，開拓了植物細(xì)胞融合的研究。,細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)(ji233。ng)出現(xiàn)通道,——細(xì)胞橋,四 細(xì)胞融合原理,第十二頁，共五十九頁。,原生質(zhì)體及其制備(zh236。diǎn)： 無細(xì)胞壁，可以方便地進(jìn)行遺傳操作、人工誘變、 細(xì)胞器轉(zhuǎn)移、細(xì)胞融合等操作。b232。使植物細(xì)胞融合技術(shù)得以建立。o)游離的裸露原生質(zhì)體。 離心法：低速離心，收集沉淀。滲透壓調(diào)節(jié)劑：葡萄糖、甘露醇、山梨醇等。n)：細(xì)胞核的融合,沒發(fā)生(fāshēng)細(xì)胞核的融合，僅發(fā)生(fāshēng)了細(xì)胞質(zhì)的融合，則可能成為嵌合細(xì)胞。,第十七頁，共五十九頁。 原因可能是病毒的磷脂外衣與動物細(xì)胞膜相似，病毒外殼上的某些糖蛋白有促進(jìn)細(xì)胞融合的功能。 缺點(diǎn)：提前大量培養(yǎng)病毒； 滅活后才能作為(zu242。,第十九頁，共五十九頁。ng)，使細(xì)胞聚集在一起。,第二十頁，共五十九頁。,第二十一頁，共五十九頁。ji232。,第二十二頁，共五十九頁。n)質(zhì)膜的表面電荷，利于細(xì)胞融合。常用的PEG平均分子量在200－20,000之間，分子量1,000以下者為液體，1,000以上者為固體。ng)與另外一個原生質(zhì)體中帶負(fù)電的基團(tuán)相連，導(dǎo)致原生質(zhì)體融合。因此，PEG結(jié)合高pH的高濃度Ca2+離子誘導(dǎo)(y242。,第二十五頁，共五十九頁。,第二十八頁，共五十九頁。lǐ)法,電融合誘導(dǎo)法（Electrofusion）：利用電場來誘導(dǎo)細(xì)胞(x236。 優(yōu)點(diǎn)：融合率高、重復(fù)性與可控制性強(qiáng)。n hua)細(xì)胞電融合,（1）聚集：在直流電脈沖的誘導(dǎo)(y242。 （4）融合細(xì)胞：細(xì)胞核融合。 he)親本原生質(zhì)體（59105），0.7M山梨醇。 參數(shù)： 電壓：1.53V，超過2V破裂，選1.5V。,融合(r243。lǐ)過程，經(jīng)融合后細(xì)胞將以多種形式出現(xiàn)，需要通過培養(yǎng)和篩選，除去不需要的細(xì)胞，分離出需要的雜種細(xì)胞，從而解決融合細(xì)胞的選擇問題。,六 融合(r243。bāo)篩選方法,（1）細(xì)胞形態(tài)大小差異 （2）選擇性培養(yǎng)基篩選法：利用(l236。親本原生質(zhì)體生長要求外源激素，而有的雜種細(xì)胞由于雙親互補(bǔ)作用會產(chǎn)生內(nèi)激素，從而使雜種細(xì)胞能在無激素的培養(yǎng)基上生長。ngguāng)染料法,兩個親本原生質(zhì)體在融合前用能發(fā)不同顏色熒光 的熒光染料進(jìn)行染色。,第三十八頁，共五十九頁。ng)抗性標(biāo)記進(jìn)行的融合細(xì)胞篩選,第四十頁，共五十九頁。ngy242。nɡ)不親和性，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)源遺傳重組。,細(xì)胞質(zhì)遺傳(y237。,二 技術(shù)(j236。 zi) ：屬間體細(xì)胞雜交,三 植物新品種培育(p233。 z236。,第五十頁，共五十九頁。,KM8P主要(zhǔy224。,雜種植物(zh237。f,內(nèi)容(n232。由于種屬間存在著種種隔離機(jī)制，致使遠(yuǎn)緣雜交常表現(xiàn)不親和或獲得的遠(yuǎn)緣雜種表現(xiàn)不育?！?
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