生物制藥工藝學-生物制藥工藝技術基礎-醫(yī)藥保健-預覽頁
【正文】 物的生態(tài)特點，從自然界取樣，分離所需要菌種，如到堆積和腐爛纖維素的地方去取樣分離纖維素酶產(chǎn)生菌。如含所需要的菌很少，就需要經(jīng)過富集培養(yǎng)，使所需要的菌大量生長，以利于篩選。菌種純化的方法一般采用稀釋分離或劃線分離法。 從自然界直接分離得到的菌種，都不能立即適應實際生產(chǎn)需要。最后挑選出產(chǎn)量或其它性能比親代菌株優(yōu)秀的突變株。 菌種退化現(xiàn)象：①單位容積中發(fā)酵液的活性物質含量；②瓊脂平皿上的單菌落形態(tài)；③不同培養(yǎng)時期菌體細胞的形態(tài)和主要遺傳特征。③制定科學管理制度 制作平行菌種斜面；④分離單菌落；認真進行單菌落分離工作，再多做平行的菌種斜面；⑤選擇培養(yǎng)條件 選擇有利于高產(chǎn)菌株而不利于低產(chǎn)菌株的培養(yǎng)條件。 索氏法 — 將小試管斜面的菌種放在大試管內(nèi)，大試管內(nèi)裝幾粒氫氧化鉀，管口加橡皮套，然后用石蠟包封。分裝于安醅瓶或小試管中，然后在 60℃ 干熱滅菌 2小時，連續(xù)滅菌三次后即可使用。 （ 1）磨切法 工業(yè)上常用的有絞肉機，刨胰機，球磨機、磨粉機。 （ 1）組織自溶法 利用組織中自身溶解酶的作用改變、破壞細胞結構，釋放出目的物稱為組織自溶法。 第二節(jié) 生物活性物質的提取 提取是利用制備目的物的溶解特性，將目的物與細胞的固形物成分或其它結合成分分離，使其由固相轉入液相或從細胞生理狀態(tài)轉入特定溶液環(huán)境的過程。操作者可根據(jù)文獻資料及本人的試驗摸索獲得的有關信息，在提取過程中增加目的物的溶出度，盡可能減少雜質的溶出度。 （ 3）抑制水解酶的作用 （ 4）其它保護措施（冷、熱、酸、堿） 二、物質的性質與溶解度 （一）物質溶解度的一般規(guī)律 相似相溶 （二）水在生化物質提取中的作用 水是提取生化物質的常用溶劑。另外較高的溫度可以降低物料的粘度，有利于分子擴散和機械攪拌，所以對耐熱成分的提取可以用加熱的方法。 （三）鹽濃度 鹽溶作用 鹽析作用 五、提取方法 （一）用酸、堿、鹽水溶液提取 （二）表面活性劑提取 表面活性劑分子兼有親水與疏水基團，分布于油水界面時，有分散、乳化和增溶作用。石油醚，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇，甲醇。 （ 2）鹽析 加入中性鹽如硫酸銨，氯化鈉等可以使一些生化物質的溶解度減少，這種現(xiàn)象成為鹽析。去乳化的常用方法有：過濾與離心，輕輕攪動，改變兩相的比例；加熱，加電解質，加吸附劑。 （ 4）要選用無毒，不易燃燒的價廉易的溶劑。使液體形成薄膜而蒸發(fā)，成膜的液體具有較大的表面積，熱傳播快而均勻，沒有液體靜壓的影響，能較好地防止物料的過熱現(xiàn)象。沒有固定操作方法。（難點） （ 4）生物制藥的分離方法幾乎都在溶液中進行，各種參數(shù)（溫度， pH，離子強度）對溶液中各種組分的綜合影響常常無法固定，以致許多實驗設計理論性不強。 二、生物制藥中分離制備方法的基本原理 生物大分子分離純化的主要原因： （ 1）根據(jù)分子形狀和大小不同進行分離。 （ 3）根據(jù)分子極性大小及溶解度不同進行分離。 （ 5）根據(jù)配體特異性進行分離 — 親和層析法。 （ 3）材料處理及抽提方法的選擇。 分離純化是生化制備的核心操作。 生化物質的分離都是在液相中進行，故分離方法主要依據(jù)物質的分配系數(shù)，分子量大小，離子電荷性質及數(shù)量和外加環(huán)境條件的差別等因素為基礎。（鹽析－吸附，吸附－鹽析） 對于一未知物通過各種方法的交叉應用，有助于進一步了解目的物的性質。例如酶的分離純化，每一步驟產(chǎn)物重量與活性關系，通過測定酶的比活力及溶液中蛋白質濃度的比例。這些研究工作都是圍繞如何提高收率，改進操作，提高質量，形成批量生產(chǎn)等方面進行。過渡試驗 在小試階段，大部分實驗是在小型玻璃儀器中進行，但在工業(yè)生產(chǎn)中，物料要接觸到各種設備材料，如微生物發(fā)酵罐，細胞培養(yǎng)罐，固定化生物反應器，多種層析材料以及產(chǎn)品后處理的過濾濃縮、結晶、干燥設備等。 、中間體及產(chǎn)品質量分析方法研究 盡量簡化下游工藝操作，采用新工藝，新技術，新設備等。 中試放大的研究內(nèi)容主要有： （ 1）工藝路線與各步反應方法的最后確定 （ 2）設備材質與型號的選擇 （ 3）反應器的規(guī)模選擇及反應攪拌器型式與攪拌速度的
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