【正文】 大、小鼠適應(yīng)期 714天，染毒及實驗觀察期 發(fā)生動物死亡時，應(yīng)進行大體解剖 觀察和評價指標 ： 毒性反應(yīng)癥狀：各器官系統(tǒng)的異常表現(xiàn)（中樞、自主神經(jīng)、呼吸、心血管、胃腸、生殖泌尿系統(tǒng)、皮毛、粘膜等）及體重變化 死亡情況：死亡的時間、數(shù)量、性別、表現(xiàn)等。 時間周期： 一般為 2周 第一周，鼠傷寒沙門氏菌種、試劑、培養(yǎng)基準備 第二周，染毒，培養(yǎng) 48h，菌落計數(shù) 劑量設(shè)計： 決定受試物最高劑量的因素是對細菌的毒性及其溶解度。 鼠傷寒沙門氏菌（ Ames）試驗 觀察及評價指標： 各受試物組及三個對照組的四種菌株（ TA97a， TA98，TA100和 TA102）分別在加和不加 S9情況下的菌落計數(shù)。末期之后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核，被包含在細胞胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱為微核。當受試物的 LD50≥10g/ 時，最高劑量通常采用 10g/。 結(jié)果評價 ： 受試物組與對照組微核率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。在顯微鏡下便可觀察染色體數(shù)目和形態(tài)。 結(jié)果評價 ： 受試物組與對照組染色體畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。因此形態(tài)的改變提示有關(guān)基因及其蛋白產(chǎn)物的改變。 原理 ：不同周期的雄性生殖細胞對化學(xué)物質(zhì)的敏感性不同，多數(shù)情況下化學(xué)誘變劑誘發(fā)染色體畸變必須經(jīng)過 DNA復(fù)制期，故在前細線期處理。 結(jié)果評價 ： 受試物組與對照組的斷片、易位、畸變細胞率、常染色體單價體、性染色體單價體等差異有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。 原理 ： 以不同劑量受試物每日經(jīng)口給予各組實驗動物，連續(xù) 30天。高劑量應(yīng)能引起動物明顯毒效應(yīng)但不造成動物死亡。 30天喂養(yǎng)試驗 觀察及評價指標 ： 一般情況觀察 ：每日的表現(xiàn)、行為、中毒和死亡情況。 病理檢查 ：大體解剖、臟器稱重、組織病理學(xué)檢查。 其它試驗結(jié)果判斷 ? 傳統(tǒng)致畸試驗 ： 需大于或等于人攝入量的 100倍。在 100倍至 300倍之間需進行慢性毒性試驗，小于 100倍需放棄。 實驗組和對照組腫瘤發(fā)生率無明顯差異，但實驗組發(fā)生時間較早。 應(yīng)綜合考慮的問題 在分析試驗組與對照組指標統(tǒng)計學(xué)的顯著性時，應(yīng)根據(jù)其有無劑量反應(yīng)關(guān)系及與本實驗室的歷史性對照值范圍比較的原則 ,來綜合考慮指標差異有無生物學(xué)意義。 應(yīng)綜合考慮的問題 應(yīng)考慮給予受試物量過大時，可能影響營養(yǎng)素攝入量及其生物利用率，從而導(dǎo)致某些毒理學(xué)表現(xiàn)，而非受試物本身的毒性作用所致。 應(yīng)綜合考慮的問題 在評價保健食品的安全性時，應(yīng)盡可能收集人群食用受試物后反應(yīng)的資料。 審評結(jié)論的判定 ：試驗設(shè)計合理，操作規(guī)范，試驗結(jié)果能夠證明受試物的安全性。 審評結(jié)論的判定 ，大會再審，屬以下幾種情況之一： （ 1）由于實驗操作不規(guī)范，根據(jù)提供的檢驗報告無法評價產(chǎn)品的安全性，需要做除 30天 /90天喂養(yǎng)試驗以外的毒理學(xué)試驗； （ 2）已有數(shù)據(jù)提示可能存在安全性問題，但難以下結(jié)論，需要重復(fù)試驗。 （一）： （ 4）毒理、功能、興奮劑與衛(wèi)生學(xué)、穩(wěn)定性試驗樣品的批號不一致。 國家食品藥品監(jiān)督管理局和國家有關(guān)部門規(guī)定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作為新原料。 新原料安全性毒理學(xué)試驗要求 新原料安全性毒理學(xué)試驗項目的選擇 ④ 根據(jù)新原料的特性、作用機制、已有的試驗資料及產(chǎn)品的適宜人群等信息，有針對性地選擇敏感試驗、敏感動物、敏感指標，以全面了解新原料的毒性。 新原料安全性毒理學(xué)試驗要求 毒理學(xué)試驗結(jié)果 ? 新原料的未觀察到有害作用劑量（ NOAEL）應(yīng)大于或等于人群可能攝入量的 100倍； ? 如果人體推薦攝入量較大，試驗中可給予的最大劑量小于人群可能攝入量的 100倍，則在可給予的最大劑量下不應(yīng)觀察到有害作用。 、 化學(xué)性質(zhì)（ 包括化學(xué)結(jié)構(gòu) 、 純度 、 穩(wěn)定性等 ） 。 最典型的是人參 、 鹿茸 、 減肥產(chǎn)品 ， 并非受試物本身有毒影響了動物的生長發(fā)育 ， 而是因為這類產(chǎn)品的服用對象是成人 ， 所用的動物是離乳大鼠 。 4. 從食品中提取某一成分的粗提物只做了 LD50和三項致突變試驗 ， 如大豆異黃酮 。 ,結(jié)論是 ﹥ 10g/KgBW。 而不是二倍而出具了合格的報告 存在的問題 ? Ames實驗 具了 5mg/皿菌落回變數(shù)正常的報告 。 ：陽性對照組精子畸形率 ﹤ %，即判斷陰性對照組與陽性對照組相比差異有顯著性 P﹤ 。 177。 177。 177。 177。 177。 ， 雌性大鼠 700多克 、 600多克 ， 而體重與食物利用率和以前的差不多 。 存在的問題 ? 30天或 90天喂養(yǎng)實驗 ， 大鼠的代謝與人不完全一樣 ，可將尿酸轉(zhuǎn)化為尿囊素排出 。 （具體方法同安全性毒理學(xué)評價） ? 處理方法需在試驗報告中詳細描述 ? 必須說明受試物濃縮或稀釋倍數(shù)、濃度，據(jù)此計算出的給予劑量 動物功能學(xué)試驗基本要求 、 受試物給予方式及時間 （ 1） 實驗動物： 性別 單一性別 年齡 依試驗要求進行選擇 數(shù)量 大鼠每組 812只 小鼠每組 1015只 其余要求同安全性毒理學(xué)評價要求 動物功能學(xué)試驗基本要求 （ 2）受試物給予方式： 必須經(jīng)口給予， 首選灌胃 ；若選擇飲水或摻入飼料， 最高劑量不超過 10％ ；提供每日每劑量組平均飲水量、食物攝入量及周食物利用率 （ 3）給樣時間： 根據(jù)具體功能主要指標而定， 7天 120天，一般為 30天。 ? 以小鼠為實驗動物必須有相當于人體推薦量 （ 折算為每公斤體重 ） 的 10倍劑量組 。 （ 2） 人數(shù) 試食組和對照組的有效例數(shù)不少于 50人 ， 且試驗的脫離率一般不得超過 10%。 必須在衛(wèi)生學(xué)試驗 、 動物毒理學(xué)安全性試驗及興奮劑檢測 （ 僅限改善生長發(fā)育 、 減肥功能 )完成之后確定產(chǎn)品是安全的 ， 符合有關(guān)衛(wèi)生標準要求的情況下再進行 。 如果試驗在不同單位進行的 ， 必須提供同批號的受試樣品 。 兒童一般不要求測心電圖 、 胸透 、 腹部 B超及肝 、 腎功能項 改善生長發(fā)育 、 緩解視疲勞 、 輔助改善記憶功能不要求便常規(guī) ， 其他人體試驗便常規(guī)為必做項目 。 （ 6） 改善生長發(fā)育和減肥功能的產(chǎn)品在人體功能試驗進行前需提供興奮劑檢測報告 。 注意事項：對動物進行直接睡眠實驗時 ， 也要同樣注意進 行 30天灌胃 。 各功能試驗審評要點 4. 提高缺氧耐受力功能檢驗方法 主要指標：常壓耐缺氧實驗 亞硝酸鈉中毒存活實驗 急性腦缺血性缺氧實驗 判定：三項試驗中任二項實驗結(jié)果陽性 。 各功能試驗審評要點 6. 增加骨密度功能檢驗方法 根據(jù)受試樣品作用的原理不同 ， 分為方案一 （ 補鈣為主的受試物 ） 和方案二 （ 不含鈣或不以補鈣為主的受試物 ） 兩種 。 注意事項： （ 1） 使用未批準用于食品的鈣的化合物 ， 除必做主要指標外 ， 還必須進行鈣吸收率的測定；使用屬營養(yǎng)強化劑范圍內(nèi)的鈣源及來自普通食品的鈣源可以不進行鈣的吸收率實驗 。 注意事項：報告中需提供列表詳細描述肝臟病理情況 。 各功能試驗審評要點 2. 祛痤瘡功能試驗 受試對象：選擇臨床痤瘡 I－ III度的自愿健康受試者 ， 排除因病理性原因及妊娠及哺乳期婦女 。 ? 受試者在試驗期間停止使用其它口服及外用有關(guān)養(yǎng)顏祛斑的用品 。 ? 在試驗期間不得服用其它保持皮膚水分的物品及影響結(jié)果判定的化妝品 。 ? 受試者在試驗期間不得服用其它保持保持油份的物品及影響結(jié)果判定的化妝品 。 （ 2） 實驗開始前 ， 所選動物的血清總膽固醇一定要均衡 ， 喂飼高脂飼料后 ，總膽固醇與甘油三酯一定都要陽性 。 注意事項：在糖耐量實驗中 ， 不僅要計算血糖值 ， 更要對血糖曲線下面積進行計算 。 各功能試驗審評要點 動物實驗 主要指標：過氧化脂質(zhì)含量 （ MDA等 ） 抗氧化酶活性 （ SOD、 GSHPx） 判定：過氧化脂質(zhì)含量中任一指標和抗氧化酶活性中任一指標同為陽性 。 各功能試驗審評要點 動物實驗 主要實驗：跳臺實驗 避暗實驗 穿梭箱實驗 水迷宮實驗 判定： 4項動物實驗中任 2項陽性 ,重復(fù)實驗結(jié)果一致 （ 所重復(fù)的同一項實驗兩次結(jié)果均為陽性 ） 。 文化程度基本一致 ， 且未接受過類似測試 。 各功能試驗審評要點 動物實驗：預(yù)防性高鉛動物模型和治療性高鉛動物模型選其一 主要指標：血鉛 骨鉛 肝組織鉛 判定：骨鉛或肝組織鉛有一項陽性 。 各功能試驗審評要點 動物實驗：大鼠棉球植入實驗或大鼠足趾腫脹實驗任選其一 主要指標：肉芽腫凈量 （ 棉球植入實驗 ） 致炎劑刺激前后足跖厚度差異 （ 足趾腫脹實驗 ） 判定：肉芽腫凈量或致炎劑刺激前后足跖厚度差異陽性 。 各功能試驗審評要點 動物實驗 主要指標：血壓 、 心率 判定：實驗動物血壓明顯低于模型對照組 ， 差異具有顯著性 ， 且對實驗組動物心率和正常動物血壓及心率無影響 。 要求： （ 1） 受試者在試食觀察期間不該變原有抗高血壓藥物治療方案 。 （ 2） 推薦使用飲水或加入飼料的方式給予受試樣品 。 要求：盡可能考慮如乳母年齡 、 嬰兒出生天數(shù) 、 飲食情況 、 家庭經(jīng)濟狀況等因素 ， 進行均衡性檢驗 。 毒理學(xué)上動物食物利用率在把握上可以適當放寬 。 替代主食的減肥功能食品 ， 可以不做動物實驗 ， 僅進行人體試食試驗 。 要求：有違禁藥物檢測報告 、 規(guī)范的膳食 、 運動調(diào)查及評價方法 。 ③ 生化主要指標增做血尿酸 、 尿酮體主要指標 ， ④ 體內(nèi)脂肪總量和脂肪占體重百分率 ， 用水下稱重法或電阻抗法 。 注意事項： （ 1） 選用斷乳大鼠 。 （ 3） 受試物給予時間：不少于 3個月 ， 必要時延長至 6個月 。 各功能試驗審評要點 人體試驗 試驗設(shè)計：采用自身和組間兩種對照設(shè)計 。 （ 2） 于試驗開始前 、 結(jié)束前進行三天的詢問法膳食調(diào)查 ， 觀察飲 食因素對試驗結(jié)果的影響 。 注意事項： （ 1） 受試樣品中含雙歧桿菌 、 乳桿菌以外的其它益生菌時 ， 應(yīng)在動物試驗中加測該益生菌 。 要求：考慮年齡 、 性別 、 飲食情況等影響因素進行均衡性檢驗 。 要 求：分組時考慮年齡 、 性別 、 家庭經(jīng)濟水平等因素進行均衡性檢驗 。 排除其它疾病引起的消化不良者 、 急慢性腹瀉及糞便蟲卵陽性者 。 動物起始體重也可以放寬 。 受試對象：選擇排便次數(shù)減少和糞便硬度增加 ， 大便一周少于 3次 ，無器質(zhì)性便秘者 。 （ 3） 報告中應(yīng)有膳食情況 ， 特別是膳食纖維情況及不良反應(yīng)的描述 。 要求：考慮年齡 、 性別 、 病程狀況 ， 進行均衡性檢驗 。 ? 在將本程序所列實驗的陽性結(jié)果用于評價食品的保健作用時 ，應(yīng)考慮結(jié)果的重復(fù)性和劑量反應(yīng)關(guān)系 ， 并由此找出其最小有作用