【正文】 Gdenature 95? C539。GCTCGC AGTACTTCATGACGAGCGTCATGAGCTCGCanneal primers 60? CTaq polymerase binds 3’ and extendsGCTCGC539。AGTACTTCATGACGAGCGTCATGAGCTCGCDNA is doubled with each cycleRepeat 2540 timesRAPD的操作PCR反應(yīng)：l10Buffer 2分鐘Step230秒Step446循環(huán)Step6DAF(DNA amplification fingerprinting)：與 RAPD不同的是 :引物濃度更高，引物長度更短（一般 5－ 8個堿基），且往往用聚丙烯酰胺凝膠電泳，通常會產(chǎn)生非常復(fù)雜的帶型，譜帶信息比 RAPDs大得多。SCARs（ Sequenced Characterized Amplified Regions）n 為提高 RAPD標記穩(wěn)定性，把目標 RAPD片段克隆測序，根據(jù)片段兩末端的序列設(shè)計特定引物（通常 24個堿基），再進行 PCR擴增，可把相應(yīng)的單一位點鑒定出來。l根據(jù)核心序列堿基數(shù)的不同 ,可分為單堿基、 2堿基、 3堿基、 4堿基等多種重復(fù)型。SSR的分布特點SSR的功能長期以來一直認為 SSR是轉(zhuǎn)錄啞區(qū)，沒有明確的生理功能。 染色體末端的 SSR，有保護 DNA完整性、避免降解、融合及丟失的功能；216。v 不同材料重復(fù)次數(shù)的不同 ， 導(dǎo)致了SSR長度的高度變異性。l） 4181。95℃ 95℃ 56℃ 72℃ GOTO31循環(huán)注： SSR引物退火溫度在 5265不足：SSR的檢測u瓊脂糖凝膠檢測（同前）u聚丙烯酰胺凝膠檢測u一般采用銀染、熒光檢測。 GACTGCGTACCAATTC339。GATGAGTCCTGAGTAANNN3‘EcoRIprimers +3: 539。（ 3） AFLP分析由于擴增片段較短（ 30700bp)， 分辨率高。（ 5）由于特定引物擴增，退火溫度高，因而假陽性低，可靠性高。酶切 連接；2.AFLP操作步驟：模板 DNA的酶切與連接DNA（ 200ng/181。l） pmol/181。 100BSA l） l， 37℃ 酶切 連接 46小時，或過夜 。MseⅠ l） l 混合后，在如下 PCR條件下擴增：Step2 95℃ 30秒Step4 72℃ 60秒Step2l如下反應(yīng)液：PstⅠ 引物（ 50ng/181。MseⅠ 引物（ 50ng/181。Buffer 混合后按如下 PCR程序擴增：Step4 72℃ 60秒Step7 56℃ 30秒Step6 同位素檢測注意事項 ：1． AFLP酶切反應(yīng)對模板 DNA質(zhì)量要求較高，要求 260/2804． AFLP反應(yīng)對 PCR要求較高，要首先摸索優(yōu)化 Mg2+、 dNTP條件，達到最佳擴增。7coefficient) a a + b + cJaccardNei:a bc d+ 聚類分析n 聚類指標：遺傳距離n 聚類方法： SAHNn mRNA反轉(zhuǎn)錄成 cDNA， 克隆到質(zhì)?；蚴删w載體，構(gòu)建 cDNA文庫，而后大規(guī)模隨機挑選克隆，對 5’或 3’端進行一步法測序，獲得對生長發(fā)育、遺傳變異、衰老死亡等過程認識的技術(shù)。n SNPs可大大豐富既有的連鎖圖n 成熟自動化技術(shù)，有望分析成千上萬的 SNPsn 蛋白質(zhì)組研究 了解生物體蛋白質(zhì)表達的時空分布規(guī)律 , 不同個體 /組織間的表達差異n 蛋白質(zhì)分子標記 定位生物的表性變異(如抗病、抗逆等性狀 )和相關(guān)基因The key technique involves in proteomicselectrophoresisn 分子標記技術(shù)的發(fā)展，使圖譜上標記的密度越來越高。as(%)“mapmapAFLP不僅能縮小抗病基因與連鎖標記之間的距離，而且在 RFLP遺傳圖上，可增加染色體末端標記和填充 RFLP空隙，不干擾 RFLP標記簇，從而大大增加了遺傳圖的飽和度。n eg. 通過 288個位點上對 338個一粒小麥系群 AFLP指紋分析，結(jié)合種系分析，發(fā)現(xiàn)來源于土耳其 東南部 Karacadag山脈的一個野生一粒小麥（ T. boeoticum） 群體與栽培一粒小麥（ T. monococcum ） 遺傳上最為相近，從而推斷該地區(qū)為現(xiàn)代栽培一粒小麥的發(fā)源地（ 用途：鑒定品種真實性和純度，用于新品種登記和品種知識產(chǎn)權(quán)保護等。利用 NILs方法已定位了許多質(zhì)量性狀基因， eg.番茄抗病毒基因 Tm2a， 番茄抗細菌病毒基因及水稻半矮桿基因 Sdy等。n 定位基因：萵苣抗霜霉病基因 、 水稻抗癭蠓基因水稻抗稻瘟病基因、水稻耐黃叢卷葉病毒病基因等分離群體分組分析法 (Bulked Segregation Analysis)產(chǎn)量、品質(zhì)、熟期等大多數(shù)重要農(nóng)藝性狀，均表現(xiàn)數(shù)量性狀的遺傳特點，受許多數(shù)量基因座位 （Quantitative數(shù)量遺傳學(xué)無法確定控制 數(shù)量性狀的 QTLs數(shù)目，也無法確定單個 QTL的遺傳效應(yīng)及染色體位置。 ? 前者以欲克隆基因的功能為基礎(chǔ)，通過鑒定其產(chǎn)物或某種表型的突變進行；? 后者則著眼于基因本身，通過其特定的序列或其在基因組中的特定位置進行。 新發(fā)現(xiàn)： 不同物種之間在標記探針的同源性、拷貝數(shù)及連鎖順序上都具有很大程度的保守性。應(yīng)用比較基因組學(xué)進行基因的克隆n 綠色革命 Rht Rht2基因的克隆擬南芥 GAI 水稻 EST 篩選小麥 BAC文庫 Rht Rht2Blast探針標記深遠意義n 比較基因組研究已使得傳統(tǒng)的植物遺傳學(xué)突破了物種的框架限定，發(fā)展成了新的系統(tǒng)遺傳學(xué)。n 利用 cDNAAFLP的方法，闡明了馬鈴薯塊莖在不同發(fā)育階段基因表達的情況，并克隆了 2個與塊莖脂肪氧合酶高度同源的 cDNA片段（ Bachem等1996） 。n 對遺傳差異與雜種優(yōu)勢關(guān)系的評價方法經(jīng)歷了從形態(tài)性狀遺傳距離，到生化標記遺傳差異，親緣系數(shù)，以及分子標記遺傳差異等各種嘗試。? 提出了 “ 上位性是雜種優(yōu)勢的主要遺傳基礎(chǔ) ” 的重要觀點。l 通過對與雜種優(yōu)勢相關(guān) QTLs效應(yīng)的研究，可以加深對雜種優(yōu)勢機理的了解。n 長期以來，選擇都是基于植株的表型性狀進行的。n ，采用 MAS可直接在當代確定。n 賈繼增等（ 2023）根據(jù) AFLP標記進行小麥白粉病抗性的回交選擇，對小麥的外源染色質(zhì)及基因可以進行準確的跟蹤鑒定，從而加速種質(zhì)創(chuàng)新的進程。但研究表明，即使回交 20代，還能發(fā)現(xiàn)相當大與目標基因連鎖的供體染色體片段?；蚓酆贤黄屏嘶亟挥N改良個別性狀的局限 ,使品種在多個性狀上同時得到改良。4)在對 QTL進行轉(zhuǎn)移時 ,如果沒有轉(zhuǎn)移互作 QTL,則不會達到預(yù)期的結(jié)果。n ．．．．．．成功的報道n 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 16:37:4616:37:4616:37Thursday, March 11, 2023n 1乍見翻疑夢，相悲各問年。 三月 214:37 下午 三月 2116:37March 11, 2023n 1行動出成果，工作出財富。 16:37:4616:37:4616:373/11/2023 4:37:46 PMn 1成功就是日復(fù)一日那一點點小小努力的積累。 11 三月 20234:37:46 下午 16:37:46三月 21n 1楚塞三湘接，荊門九派通。 4:37:46 下午 4:37 下午 16:37:46三月 21n 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 16:37:4616:37:4616:37Thursday, March 11, 2023n 1知人者智，自知者明。 三月 214:37 下午 三月 2116:37March 11, 2023n 1業(yè)余生活要有意義，不